|
|
Produkce a charakterizace nových aryl-sulfotransferas a jejich využití v bioanalytice
Petránková, Barbora ; Bojarová, Pavla (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Polyfenolové látky jsou nejrozšířenější přírodní látky nacházející se v potravě. Největší skupinu tvoří flavonoidy, fenolové kyseliny a katecholy. Polyfenoly jsou v organismu metabolizovány v rámci II. fáze biotransformace, můžou být sulfatovány, glukuronylovány nebo methylovány. Pro studium biotransformace je potřeba mít definované standardy. Sulfatované polyfenoly můžeme připravit pomocí enzymové sulfatace, která má mnohem mírnější reakční podmínky oproti chemické. Prokaryotické sulfotransferasy využívají k sulfataci jako donor sulfátu 3'-fosfoadenosin-5'-fosfosulfát (PAPS), který je však velmi drahý a obtížně se regeneruje. Alternativou jsou bakteriální aryl-sulfotransferasy (EC 2.8.2.22), které katalyzují přenos sulfátové skupiny z fenolového donoru na fenolový akceptor. V literatuře byly doposud popsány dvě bakteriální aryl-sulfotransferasy z Desulfitobacterium hafniense a Escherichia coli. Předkládaná práce se zabývá produkcí, purifikací a biochemickou charakterizací dvou nových bakteriálních aryl-sulfotransferas z Desulfosporosinus sp. HMP52 a Salmonela bongori. Enzymy byly heterologně exprimovány v E. coli a purifikovány pomocí afinitní chromatografie. V rámci biochemické charakterizace bylo stanoveno jejich pH a teplotní optimum, stabilita v organických rozpouštědlech a různých teplotách a...
|
|
|
Analýza sulfatovaných flavonoidů pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí (LC-MS)
Petránková, Barbora ; Bojarová, Pavla (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tato bakalářská práce je zaměřena na nalezení optimálních separačních podmínek ve vysokoúčinné kapalinové chromatografii pro analýzu sulfatovaných polyfenolických látek, především pak flavonoidů, fenolových kyselin a katecholů. Při vývoji metody byly použity tři chromatografické kolony. Kolona ZIC-HILIC v polárně organické fázi a kolony C18 a Kinetex PFP v reverzní fázi. Cílem optimalizace metody v rámci práce byl krátký čas separace, ostré nedeformující se píky a separace všech složek směsi. Při použití kolony Kinetex PFP se podařilo nalézt optimální metodu pro separaci testovaných směsí. Jako nejvhodnější se ukázalo použití mobilní fáze o složení 10 mM octanu amonného/0,1% kyseliny mravenčí a methanolu, při průtoku mobilní fáze rychlostí 0,6 ml/min. Modifikací gradientu mobilní fáze a teploty se podařilo separovat všechny složky testovaných směsí, píky byly ostré a čas separace se pohyboval ve většině případů do 10 min. Metoda je také přímo použitelná ve spojení s hmotnostním detektorem. Klíčová slova: Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC), flavonoidy, polyfenolické látky, sulfatace, separace
|
|
|
Význam sebezkušenosti pro pomáhající profese
Petránková, Barbora ; Pivoňková, Lucie (oponent) ; Šnýdrová, Ivana (vedoucí práce)
záměrem práce "Význam sebezkušenosti pro pomáhající profese" je na základě doložených fakt o pozitivním působení sebezkušenostní práce a kvalitní zpětné vazby v oblasti pomáhajících profesí poukázat na značný význam takového působení a jeho vliv na zkvalitnění profesionality i osobního života pracovníků v pomáhajících profesích. Na základě těchto poznatků pak doporučuje zvýšení míry užití sebezkušenostních technik v oborech přímo působících na osobnosti dalších lidí. Nabízí také přehled a popis cílů, forem a směrů psychoterapeutického působení a samostatnou kapitolu o supervizi a dalších formách zpětné vazby.
|
host ::
RSS.