|
|
Produkce kyseliny hyaluronové covRS-deficientním kmenem Streptococcus equi subsp. zooepidemicus
Freislerová, Eva ; Franke,, Lukáš (oponent) ; Mgr.Stanislav Pepeliaev, Ph.D. (vedoucí práce)
V průmyslovém měřítku je významným producentem kyseliny hyaluronové rod Streptococci. Významným zástupcem této skupiny je Streptococcus equi subsp. zooepidemicus. Navýšení produkce lze ovlivnit především kultivačními podmínkami nebo genetickou úpravou Streptococcus equi subsp. zooepidemicus. Práce popisuje deleci genů covR a covS, které jsou zodpovědné za transkripční regulaci stresové odpovědi. Podle Galeas a kol. [35] delece těchto genů u Streptococcus pyogenes vede k navýšení produkce kyseliny hyaluronové. Jelikož S. pyogenes a S. equi subsp. zooepidemicus mají z 80 % shodné genomy, byl tento experiment proveden na tomto mikroorganismu. Pomocí mutageneze metodou alelické výměny byl připraven nový kmen SEZ covRS. Následně byly prováděny kultivace v laboratorních fermentorech na bohatém Wheat E1 médiu. Nově připravený kmen SEZ covRS vykazoval o 9 % větší výtěžky. Je tedy zřejmé, že regulační systém covRS hraje stejnou roli i u Streptococcus equi subsp. zooepidemicus a nepřímo reguluje biosyntézu kyseliny hyaluronové.
|
|
|
Vývoj rychlé metody cílené mutageneze bakterie Streptococcus zooepidemicus
Černý, Zbyněk ; Španová, Alena (oponent) ; Pepeliaev,, Stanislav (vedoucí práce)
Tato diplomová práce je zaměřena na vyvinutí rychlé metody cílené mutageneze genů Streptococcus zooepidemicus založené na přirozené kompetenci buněk. Na základě experimentálních dat byly vybrány geny pro deleci, které s vysokou pravděpodobností mají vliv na syntézu kyseliny hyaluronové. Byla provedena delece vybraných genů z genomové DNA jako důkaz účinnosti metody, a u rekombinantních kmenů S. zooepidemicus byly sledovány změny koncentrace prekurzorů kyseliny hyaluronové (glukuronová kyselina a N-acetylglukózamin) v čase a výsledná produkce kyseliny hyaluronové.
|
|
|
Řízení molekulové hmotnosti kyseliny hyaluronové (HA) nastavením specifické rychlosti růstu kultury Streptococcus equi subsp. zooepidemicus
Osičková, Jana ; Pepeliaev,, Stanislav (oponent) ; Franke,, Lukáš (vedoucí práce)
Diplomová práce se zaměřuje na vliv kultivačních parametrů na syntézu kyseliny hyaluronové při její biotechnologické produkci. Sledovanými kultivačními parametry byly teplota kultivace, vzdušnění, míchání, zdroj uhlíku a přídavek fosfatidylcholinu. Sledovaly se změny molekulové hmotnosti a výtěžků kyseliny hyaluronové, růstu biomasy a viskozity média po fermentaci. Ze získaných dat bylo zjištěno, že specifická růstová rychlost kultury významně ovlivňuje finální vlastnosti kyseliny hyaluronové. Při suboptimálních teplotách vznikal vysokomolekulární polymer se srovnatelnými výtěžky jako u kontrolní kultivace. Vysoké teploty (40 °C) způsobovaly pokles molekulové hmotnosti. Dalšími sledovanými kultivačními parametry byly intenzita míchání a vzdušnění. Nejvyšších molekulových hmotností bylo dosaženo při nejvyšších otáčkách a za intenzivnějšího vzdušnění, tedy s parametry 1 vvm/800 rpm a 2 vvm/800 rpm. Větší vliv na molekulovou hmotnost mělo míchání než vzdušnění. Při změně zdroje uhlíku ze sacharózy na glukosu se dosáhlo nejnižších hodnot molekulové hmotnosti i výtěžnosti. Přídavek fosfatidylcholinu o koncentraci 160 mg/l měl pozitivní efekt na kultivaci, kdy se navýšila molekulová hmotnost a došlo k větší tvorbě biomasy.
|
|
|
Řízení molekulové hmotnosti kyseliny hyaluronové (HA) nastavením specifické rychlosti růstu kultury Streptococcus equi subsp. zooepidemicus
Osičková, Jana ; Pepeliaev,, Stanislav (oponent) ; Franke,, Lukáš (vedoucí práce)
Diplomová práce se zaměřuje na vliv kultivačních parametrů na syntézu kyseliny hyaluronové při její biotechnologické produkci. Sledovanými kultivačními parametry byly teplota kultivace, vzdušnění, míchání, zdroj uhlíku a přídavek fosfatidylcholinu. Sledovaly se změny molekulové hmotnosti a výtěžků kyseliny hyaluronové, růstu biomasy a viskozity média po fermentaci. Ze získaných dat bylo zjištěno, že specifická růstová rychlost kultury významně ovlivňuje finální vlastnosti kyseliny hyaluronové. Při suboptimálních teplotách vznikal vysokomolekulární polymer se srovnatelnými výtěžky jako u kontrolní kultivace. Vysoké teploty (40 °C) způsobovaly pokles molekulové hmotnosti. Dalšími sledovanými kultivačními parametry byly intenzita míchání a vzdušnění. Nejvyšších molekulových hmotností bylo dosaženo při nejvyšších otáčkách a za intenzivnějšího vzdušnění, tedy s parametry 1 vvm/800 rpm a 2 vvm/800 rpm. Větší vliv na molekulovou hmotnost mělo míchání než vzdušnění. Při změně zdroje uhlíku ze sacharózy na glukosu se dosáhlo nejnižších hodnot molekulové hmotnosti i výtěžnosti. Přídavek fosfatidylcholinu o koncentraci 160 mg/l měl pozitivní efekt na kultivaci, kdy se navýšila molekulová hmotnost a došlo k větší tvorbě biomasy.
|
|
|
Produkce kyseliny hyaluronové covRS-deficientním kmenem Streptococcus equi subsp. zooepidemicus
Freislerová, Eva ; Franke,, Lukáš (oponent) ; Mgr.Stanislav Pepeliaev, Ph.D. (vedoucí práce)
V průmyslovém měřítku je významným producentem kyseliny hyaluronové rod Streptococci. Významným zástupcem této skupiny je Streptococcus equi subsp. zooepidemicus. Navýšení produkce lze ovlivnit především kultivačními podmínkami nebo genetickou úpravou Streptococcus equi subsp. zooepidemicus. Práce popisuje deleci genů covR a covS, které jsou zodpovědné za transkripční regulaci stresové odpovědi. Podle Galeas a kol. [35] delece těchto genů u Streptococcus pyogenes vede k navýšení produkce kyseliny hyaluronové. Jelikož S. pyogenes a S. equi subsp. zooepidemicus mají z 80 % shodné genomy, byl tento experiment proveden na tomto mikroorganismu. Pomocí mutageneze metodou alelické výměny byl připraven nový kmen SEZ covRS. Následně byly prováděny kultivace v laboratorních fermentorech na bohatém Wheat E1 médiu. Nově připravený kmen SEZ covRS vykazoval o 9 % větší výtěžky. Je tedy zřejmé, že regulační systém covRS hraje stejnou roli i u Streptococcus equi subsp. zooepidemicus a nepřímo reguluje biosyntézu kyseliny hyaluronové.
|
|
|
Vývoj rychlé metody cílené mutageneze bakterie Streptococcus zooepidemicus
Černý, Zbyněk ; Španová, Alena (oponent) ; Pepeliaev,, Stanislav (vedoucí práce)
Tato diplomová práce je zaměřena na vyvinutí rychlé metody cílené mutageneze genů Streptococcus zooepidemicus založené na přirozené kompetenci buněk. Na základě experimentálních dat byly vybrány geny pro deleci, které s vysokou pravděpodobností mají vliv na syntézu kyseliny hyaluronové. Byla provedena delece vybraných genů z genomové DNA jako důkaz účinnosti metody, a u rekombinantních kmenů S. zooepidemicus byly sledovány změny koncentrace prekurzorů kyseliny hyaluronové (glukuronová kyselina a N-acetylglukózamin) v čase a výsledná produkce kyseliny hyaluronové.
|
host ::
RSS.