|
|
Optineurin as a regulator of intracellular transport
Ondrúšková, Denisa ; Lánský, Zdeněk (vedoucí práce) ; Štěpánek, Luděk (oponent)
Vnútrobunkový transport mitochondrií a ďalších bunkových komponentov pozdĺž mikrotubulov je nevyhnutný pre všetky bunky a najmä pre neuróny. Anterográdny mitochondriálny transport je poháňaný molekulárnym motorom, kinezínom-1 (KIF5), ktorý je cez adaptorový proteín TRAK1 prepojený s mitochondriou. Optineurín (OPTN) bol iba nedávno objavený ako nový regulátor tohto mitochondriálneho transportu. V našej nedávnej štúdii sme spolu s našimi spolupracovníkmi ukázali, že anterográdny mitochondriálny transport u myší je regulovaný Optineurínom. Taktiež sme ukázali, že OPTN je proteín associovaný s mikrotubulami (MAP), ktorý môže interagovať s KIF5B-TRAK1 komplexom, a tým predĺžiť jeho prejdenú vzdialenosť, čas zotrvania a množstvo dopadov na mikrotubuly. Keďže OPTN je novým proteínom asociovaným s mikrotubulami iba veľmi málo sa vie o jeho spôsobe interakcie s mikrotubulami. V tejto práci ukazujeme ako OPTN interaguje s rôzne post- translačne modifikovanými mikrotubulami a rôznymi izoformami mikrotubulov. Pomocou in vitro rekonštitúcie sme ukázali, že OPTN uprednostňuje nemodifikované pred vysoko post- translačne modifikovanými mikrotubulmi a vytvára na nich oblasti s vysokou afinitou (patches). Okrem toho sa ukázalo, že OPTN má výrazne vyššiu afinitu k α1β4 izoforme v porovnaní s α1β3 izoformou. Avšak, na...
|
|
|
Differentiation of keratinocytes: molecular markers and potential of influencing them in vitro
Ondrúšková, Denisa ; Filová, Elena (vedoucí práce) ; Porubská, Bianka (oponent)
Keratinocyty sú najviac zastúpené kožné bunky nachádzajúce sa v pokožke - epidermis. Delia sa na bazálne proliferujúce kmeňové bunky, ktoré sú v úzkom kontakte s bazálnou membránou a na suprabazálne diferencujúce bunky. Bazálne keratinocyty exprimujú keratíny K5 a K14 a prostredníctvom delaminácie alebo asymetrickým delením dávajú vznik postupne diferencujúcim vrstvám. Ako prvá vzniká stratum spinosum exprimujúca keratíny K1 a K10 a involukrín, následne prechádza v stratum granulosum, v ktorej bunky exprimujú lorikrín a profilagrín a poslednú vrstvu tvorí stratum corneum, tvorená korneocytmi, ktoré sa postupne odlupujú. Keratinocyty sa podieľajú na procese regenerácie kože a je možné ich izolovať a kultivovať. Ich kultivácia môže byť ovplyvnená rôznymi faktormi, ako sú výber vhodného materiálu (nanovlákna/gél) a vhodného kultivačného média, ktoré môže byť obohatené o rastové faktory, doštičkový lyzát, vitamíny a ďalšie látky. Pri ich kultivácii taktiež záleží na tom, či sú keratinocyty úplne ponorené v médiu alebo rastú na rozhraní voda/vzduch. Pre priblíženie sa in vivo podmienkam a na štúdium interakcií medzi bunkovými populáciami sú keratinocyty častokrát pestované v ko-kultúrach s rôznymi bunkami, ako sú fibroblasty, endotelové bunky, monocyty a ďalšie. Keratinocyty kultivované in vitro sa...
|
host ::
RSS.