|
Porovnání původní Ellmanovy metody a její modifikace s použitím readeru mikrotitračních destiček
Morávková, Martina ; Macáková, Kateřina (vedoucí práce) ; Siatka, Tomáš (oponent)
Morávková, Martina. Porovnání původní Ellmanovy metody a její modifikace s použitím readeru mikrotitračních destiček. Diplomová práce 2015. Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické botaniky a ekologie. Vedoucí práce: Ing. Kateřina Macáková, Ph.D. Klíčová slova: Ellmanova metoda, acetylcholinesteráza, butyrylcholinesteráza, spektrofotometr, reader mikrotitračních destiček. Ellmanova metoda je často využívaným postupem při měření inhibice cholinesteráz acetylcholinesterázy (AChE) a butyrylcholinesterázy (BuChE). Princip je založený na hydrolýze acetylthiocholinu a butyrylthiocholinu cholinesterázami za vzniku příslušné kyseliny a thiocholinu. Množství thiocholinu je stanoveno spektroforometricky pomocí reakce s 5,5'- dithiobis-2-nitrobenzoovou kyselinou. V této práci byly porovnány výsledky měření ze dvou různých přístrojů (spektrofotometr a reader mikrotitračních destiček) a při různých teplotách (laboratorní teplota a teplota 37 řC). Pro porovnání byly zvoleny látky s různou mírou inhibice obou enzymů: allokryptopin, kalifornidin jodid, eserin, galantamin, huperzin A a tazettin. U kalifornidin jodidu (AChE, BuChE), eserinu (BuChE) a huperzinu A (AChE) byly zaznamenány statisticky významné rozdíly při měření na různých přístrojích a za různých podmínek. Obecně...
|