|
|
Purification of membrane bound enzyme DHRS7B
Mariničová, Valéria ; Novotná, Eva (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Valéria Mariničová Vedúca diplomovej práce: RNDr. Eva Novotná, Ph.D. Názov diplomovej práce: Purifikácia membránovo viazaného enzýmu DHRS7B Membránovo viazaný enzým DHRS7B, pochádzajúci z nadrodiny SDR (dehydrogenázy/reduktáz s krátkym reťazcom), patrí medzi málo preskúmané proteíny ľudského organizmu. Aj napriek nedostatku informácii o jeho vlastnostiach bol pozorovaný u myší, kde sa označuje ako PexRap s lokalizáciou v peroxizomoch a endoplazmatickom retikule (ER). Ide teda o peroxizomálny redukujúci proteín, ktorý ako kofaktor využíva NADPH. V myšacom organizme sa prejavila jeho aktivita na biosyntéze peroxizomálnych éterových lipidov počas adipogenézy. O úlohe ľudského DHRS7B v bunke, a prípadne niektorých ochoreniach, sa doposiaľ iba špekuluje a preto sa stáva predmetom výskumov. Cieľom práce bolo získať čistý rekombinantný ľudský enzým DHRS7B pripravený v Sf9 bunkách. Keďže je to membránový proteín bolo potrebné nájsť vhodný detergent, ktorý dokáže enzým DHRS7B vyňať z fosfolipidickej membrány a zároveň zachovať jeho aktivitu. Najvhodnejším sa javil detergent DDM v koncentrácii 1:1 (w/w) proteín:detergent. Ďalšími krokmi bola purifikácia, afinitná chromatografia pri ktorej sa získal čistý proteín...
|
host ::
RSS.