|
|
Mechanismy biogeneze železo-sirných klastrů u eukaryot
Temešinko, Tomáš ; Doležal, Pavel (vedoucí práce) ; Malych, Ronald (oponent)
Mnoho esenciálních proteinů v buňce využívá železo-sirné (Fe-S) klastry jako své kofaktory. Tyto proteiny slouží například jako enzymy, komponenty elektron-transportního řetězce nebo vnitrobuněčné sensory. Před vložením do proteinu musí být klastr nejprve sestaven, respektive syntetizován de novo. Eukaryotické buňky k tomu využívají celkem čtyři odlišné dráhy: ISC, CIA, SUF a NIF. Všechny dráhy jsou navíc schopny klastr doručit specifickému akceptorovému proteinu a tím ho maturovat. Porucha biosyntézyFe-Sklastrůjeproeukaryotickoubuňkučastoletálníavedek selhánívývojemnohobuněčných organismů.Přestozůstávajízákladní principytěchtodrahneobjasněnéajejichstudium stáleprobíhá.Tato bakalářská práce shrnuje dosavadní poznatky o mechanismech biogeneze Fe-S klastrů u eukaryot, tedy poznatky ze savčích buněk, včetně lidí a z modelových organismů jako Saccharomyces cerevisiae, Arabidopsis thaliana a nakonec také parazitického prvoka Giardia intestinalis.
|
|
|
Proteins interacting with oxygen and its reactive species in Naegleria gruberi
Malych, Ronald ; Šuťák, Róbert (vedoucí práce) ; Rohlena, Jakub (oponent)
Naegleria gruberi je volně žijící nepatogenní améba. Je to blízký příbuzný patogenní Naegleria fowleri, která způsobuje primární amébovou meningoencefalitidu u lidí (PAM). Jako volně žijící organismus je Naegleria gruberi přizpůsobena aerobnímu způsobu života, ale má také některé pozoruhodné rysy anaerobního organismu, jako je např. přítomnost Fe-Fe hydrogenázy, která je schopná produkce vodíku. Tato práce se zaměřuje na tři typy železo obsahujících proteinů, interagujících s kyslíkem a jeho reaktivními formami (ROS), které byly odhaleny v genomu N. gruberi - hemerythrin, protoglobin a rubrerythrin. Studované proteiny byly izolovány a purifikovány jako rekombinantní proteiny, proti kterým byly vytvořeny protilátky. V genomu N. gruberi nalezený jediný homolog rubrerythrinu jsme úspěšně lokalizovali v mitochondrii, na rozdíl od hemerythrinu a protoglobinu, které vykazují cytosolickou lokalizaci. Charakterizace těchto rekombinantních proteinů in vitro zahrnovala hlavně chromatografii na molekulárních sítech a UV-vis spektrofotometrii. Schopnost vázat kyslík byla prokázána spektrálními změnami rekombinantního hemerythrinu, purifikovaného za anaerobních podmínek, a rekombinantního protoglobinu, izolovaného aerobně. Analýza western blot odhalila změny exprese těchto proteinů v N. gruberi kultivovaných se...
|
|
|
Proteins interacting with oxygen and its reactive species in Naegleria gruberi
Malych, Ronald ; Šuťák, Róbert (vedoucí práce) ; Rohlena, Jakub (oponent)
Naegleria gruberi je volně žijící nepatogenní améba. Je to blízký příbuzný patogenní Naegleria fowleri, která způsobuje primární amébovou meningoencefalitidu u lidí (PAM). Jako volně žijící organismus je Naegleria gruberi přizpůsobena aerobnímu způsobu života, ale má také některé pozoruhodné rysy anaerobního organismu, jako je např. přítomnost Fe-Fe hydrogenázy, která je schopná produkce vodíku. Tato práce se zaměřuje na tři typy železo obsahujících proteinů, interagujících s kyslíkem a jeho reaktivními formami (ROS), které byly odhaleny v genomu N. gruberi - hemerythrin, protoglobin a rubrerythrin. Studované proteiny byly izolovány a purifikovány jako rekombinantní proteiny, proti kterým byly vytvořeny protilátky. V genomu N. gruberi nalezený jediný homolog rubrerythrinu jsme úspěšně lokalizovali v mitochondrii, na rozdíl od hemerythrinu a protoglobinu, které vykazují cytosolickou lokalizaci. Charakterizace těchto rekombinantních proteinů in vitro zahrnovala hlavně chromatografii na molekulárních sítech a UV-vis spektrofotometrii. Schopnost vázat kyslík byla prokázána spektrálními změnami rekombinantního hemerythrinu, purifikovaného za anaerobních podmínek, a rekombinantního protoglobinu, izolovaného aerobně. Analýza western blot odhalila změny exprese těchto proteinů v N. gruberi kultivovaných se...
|
|
|
Vliv nedostatku a nadbytku iontů mědi na řasu Ostreococcus tauri
Malych, Ronald ; Konvalinka, Jan (vedoucí práce) ; Vaněk, Ondřej (oponent)
Měď je esenciálním prvkem pro řadu organismů. Ionty mědi mají důležitou roliv respiraci, při transportu iontů železa a ve vývoji buněk. Mechanizmus příjmu a utilizace iontů mědi je nejlépe popsán u Saccharomyces cerevisiae. Jedná se o velmi náročný proces složený z mnoha regulátorů, které udržují koncentraci iontů mědi pod toxickou hladinou. Toxicita těchto iontů se projevuje tvorbou reaktivních forem kyslíku reakcí, která je podobná Fentonově reakci. Řasy jako fotosyntetické organismy, které obsahují jak plastidy, tak mitochondrie, jsou dobrým modelem pro studování příjmu a utilizace iontů mědi. Jako modelový organismus byl z řas vybrán Ostreococcus tauri, který je nejmenším volně žijícím eukaryotním organismem. V této práci je řešena otázka jaký vliv má nedostatek a toxicita iontů mědi na buňky O. tauri. Imunochemickou analýzou bylo zjištěno, že nedochází ke změně v expresi enzymu cytochrom c oxidasy, která je součástí dýchacího řetězce a obsahuje měď vázající CuA centrum. Spektrofotometrickým stanovením bylo zjištěno, že nedostatek iontů mědi nemá vliv na tvorbu fotosyntetických pigmentů, chlorofylu a a b. Proteomickou analýzou byly zjištěny proteiny, kterých exprese byla ovlivněna toxicitou iontů mědi. Vliv toxické koncentrace iontů mědi na poškození proteinů oxidativním stresem a příjem iontů...
|
host ::
RSS.