|
|
Vliv povrchových modifikací lipidových nanočástic na jejich vlastnosti
Mašková, Vendula
Cílem diplomové práce bylo studovat vliv povrchových úprav lipozomálních nanočástic na jejich fyzikálně-chemické vlastnosti a zhodnocení jejich příjmu buňkami in vitro. Za tímto účelem byly pro srovnání připraveny dva typy lipozomálních nanočástic (LNPs), které se lišily rozdílnou citlivostí ke změnám pH, tedy pH senzitivní LNPs, které ve svém složení obsahují lipid CPA (cholesteryl-PEG350-aminoxylipid), na nějž se oximovou vazbou navázal PEG (propionaldehyd polyethylenglykolu), a pH nesenzitivní LNPs obsahující DSPE-PEG (1,2-distearoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolamin-polyethylenglykolem). Do těchto nanočástic byla enkapsulována siRNA a byla studována stabilita při skladování, pH senzitivita, štěpení pH senzitivní vazby, formace proteinové korony a jejich pohlcování buňkami HepG2. S použitím hmotnostní spektrometrie MALDI-TOF byla při snižování pH ověřena pH senzitivita vazeb mezi PEGem a CPA, případně mezi PEGem a DSPE. Při studiu pH senzitivity byla také sledována velikost nanočástic, PDI a zeta potenciál. Dle výsledků se pH nesenzitivní LNPs skutečně jevily jako inertní vůči změně pH a pH senzitivní LNPs vykazovaly změny v parametrech při pH 6,0. Dále byla posuzována stabilita obou typů LNPs při dlouhodobém skladování za rozdílných teplotních podmínek na základě změny velikosti a PDI. Připravené LNPs se po celou dobu experimentu i při různých teplotách jevily jako velikostně uniformní a stabilní. Výjimkou byly LNPs s fluorescenčním značením, které v rámci sledovaných parametrů vykazovaly horší stabilitu. V neposlední řadě byl potvrzen vliv povrchových modifikací na snížení tvorby proteinových koron. Připravené LNPs taktéž efektivně vstupovaly do buněk a do 24 hodin došlo k uvolnění siRNA do cytoplazmy z pH senzitivních LNPs a pravděpodobné akumulaci siRNA v endozomech v případě pH nesenzitivních LNPs. Na základě výsledků práce lze usuzovat, že připravené pH senzitivní LNPs vykazují žádoucí chování v biologických systémech, a tudíž mají potenciál jako vhodný nosič pro dopravu siRNA v rámci biologických aplikací.
|
host ::
RSS.