|
|
Opravy DNA v oocytech a preimplantačních embryích
Koubovská, Markéta ; Ďuríček, Tomáš (vedoucí práce) ; Macůrek, Libor (oponent)
V diplomové práci jsme se zaměřili na vliv hormonální stimulace na integritu DNA savčích oocytů. Později jsme se také věnovali jejímu vlivu na integritu DNA savčích embryí a jejich vývojový potenciál. Udržení integrity DNA v pohlavních buňkách je klíčové pro jejich kvalitu při oplození a další vývoj po oplození. Integrita DNA je ohrožována různými druhy poškození, zejména pak vznikem DNA dvouřetězcových zlomů. V práci jsme zkoumali DNA poškození myších oocytů a raných embryí v závislosti na dávce hormonální stimulace pomocí hormonu PMSG. Imunofluorescenční detekce γ-H2AX, markeru pro DNA dvouřetězcové zlomy, v nezralých GV oocytech nám potvrdila primární hypotézu, že se se zvyšující dávkou hormonální stimulace zvyšoval počet DNA dvouřetězcových zlomů. To samé jsme provedli také u starých myší, kde mezi skupinami nebyl signifikantní rozdíl jako tomu bylo mezi jednotlivými skupinami mladých myší. Pomocí mikroskopie živých buněk jsme zaznamenali mírné časové zpoždění v meiotické maturaci u oocytů z hyperstimulovaných myší oproti kontrole. Ve zralých MII oocytech byl také pozorován trojnásobný nárůst intenzity γ-H2AX fluorescence. Tento rozdíl mizí v oplozených zygotách, kde byly jak v kontrolní, tak hyperstimulované skupině přítomné γ-H2AX foci jen v samčím prvojádře. Z hlediska vývojového potenciálu...
|
|
|
Vliv věku ženy na míru DNA poškození v oocytech
Koubovská, Markéta ; Šolc, Petr (vedoucí práce) ; Tlapáková, Tereza (oponent)
Ženskými pohlavními buňkami jsou oocyty, jejichž množství je určující pro délku reprodukčního období. Důležitým faktorem, kromě množství, je také kvalita oocytů. Ta není po celý život stejná, s přibývajícím věkem dochází k jejímu snižování. Úbytek kvality je způsoben především hromaděním DNA poškození. Za nejzávažnější poškození jsou považovány dvouřetězcové zlomy (DSBs) kvůli přerušení obou řetězců DNA a následným možným translokacím či delecím. Dále však také mohou v buňce vznikat produkty působením volných kyslíkových radikálů, UV nebo γ zářením, modifikované úseky DNA nebo chybně párující sekvence. Všechna tato poškození jsou reparačními mechanismy oocytu opravována. Čím je ale žena starší, dochází k poklesu exprese genů, které se těchto reparačních mechanismů účastní. Proto nejsou opravy dostatečně efektivní a všechna poškození nejsou odstraněna. S vyšším věkem ženy jsou rovněž spojeny neúspěšné pokusy o otěhotnění, vyšší rizika samovolného potratu nebo mimoděložní těhotenství. Aby se těmto rizikům, jež bezpochyby těhotenství ve vysokém věku představuje, předešlo a žena nebyla na životě ohrožena, došlo v evoluci k ztrátě reprodukční schopnosti. U člověka je ukončena kolem 50. roku života tzv. menopauzou.
|
host ::
RSS.