|
|
Klonování, exprese a purifikace lidské AKR1C4
Kosánová, Kateřina ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Kateřina Kosánová Školitel: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název diplomové práce: Klonování, exprese a purifikace lidské AKR1C4. AKR1C4 je jedním ze čtyř lidských enzymů podrodiny aldo-ketoreduktas AKR1C. Jde o monomerní cytosolický protein o velikosti 323 aminokyselin exprimovaný v játrech. Hraje významnou roli jak v metabolismu endogenních, tak i exogenních látek. Podílí se na metabolizaci steroidních hormonů a žlučových kyselin a nejrůznějších léčiv jako např. tibolonu nebo naltrexonu. Hraje roli i v aktivaci některých kancerogenních látek, jako jsou PAH. cDNA enzymu byla dodána v buňkách E. coli DH10B, vložená do vektoru pDNR-LIB. Po rozbití buněk a izolaci plasmidu byla kódující sekvence namnožena pomocí PCR. Následně byla díky štěpícím místům pro Nde I a Xho I endonukleasy, které byly součástí primerů pro PCR, zaligována do vektoru pET-28b. Takto připravený rekombinantní plasmid byl transformován pomocí tepelného šoku do buněk E. coli HB101. Po svém namnožení byl ligovaný plasmid transformován do buněk BL21. Upravené buňky BL21 byly využity k expresi proteinu. Pro indukci overexprese byl použit IPTG. Čistý rekombinantní protein AKR1C4 se získal pomocí ÄKTA purifikace na chelatačních...
|
|
|
Klonování, exprese a purifikace lidské AKR1C4
Kosánová, Kateřina ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Novotná, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Kateřina Kosánová Školitel: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název diplomové práce: Klonování, exprese a purifikace lidské AKR1C4. AKR1C4 je jedním ze čtyř lidských enzymů podrodiny aldo-ketoreduktas AKR1C. Jde o monomerní cytosolický protein o velikosti 323 aminokyselin exprimovaný v játrech. Hraje významnou roli jak v metabolismu endogenních, tak i exogenních látek. Podílí se na metabolizaci steroidních hormonů a žlučových kyselin a nejrůznějších léčiv jako např. tibolonu nebo naltrexonu. Hraje roli i v aktivaci některých kancerogenních látek, jako jsou PAH. cDNA enzymu byla dodána v buňkách E. coli DH10B, vložená do vektoru pDNR-LIB. Po rozbití buněk a izolaci plasmidu byla kódující sekvence namnožena pomocí PCR. Následně byla díky štěpícím místům pro Nde I a Xho I endonukleasy, které byly součástí primerů pro PCR, zaligována do vektoru pET-28b. Takto připravený rekombinantní plasmid byl transformován pomocí tepelného šoku do buněk E. coli HB101. Po svém namnožení byl ligovaný plasmid transformován do buněk BL21. Upravené buňky BL21 byly využity k expresi proteinu. Pro indukci overexprese byl použit IPTG. Čistý rekombinantní protein AKR1C4 se získal pomocí ÄKTA purifikace na chelatačních...
|
host ::
RSS.