|
| |
|
|
Kvantifikace nukleových kyselin pomocí TaqMan sond - možnosti a limity s ohledem na způsob odběru, stáří a kvalitu vzorku lidských tkání
Herzogová, Eva ; Daňková, Pavlína (vedoucí práce) ; Kološtová, Katarína (oponent)
Metoda real-time PCR je varianta klasické PCR, která umožňuje kontinuálně monitorovat přírůstky DNA během každého cyklu a využívá se především k analýze genové exprese. Na základě předchozích experimentů jsme se rozhodli otestovat účinek antikoagulačních činidel EDTA, heparin, citrát sodný a CPDA na expresi vybraných genů imunologického spektra, a dále doby času od odběru krve do zpracování vzorku na hladiny mRNA vybraných genů, jež jsou dány změnami genové exprese a/nebo degradací mRNA. Pro kvantifikaci mRNA sledovaných genů jsme z leukocytů periferní krve izolovali celkovou RNA a tu přepsali pomocí reverzně transkriptázové PCR do cDNA, jež sloužila jako templát pro real-time PCR. Pro sledování změn exprese způsobených vlivem jednotlivých antikoagulačních činidel byla použita krev od 10 dobrovolníků (každý dárce krve byl odebrán do 3 vakuových zkumavek s antikoagulačním činidlem EDTA, heparinem a citrátem sodným). Deset vzorků buffy coatů jsme získali od dárců krve v transfuzních vacích s antikoagulačním agens CPDA. Buňky krve ovlivněné CPDA vykazovaly statisticky významně nižší hladiny mRNA genů TLR4, MYC a CCL2 ve srovnání s buňkami krve odebrané do jednoho ze 3 typů vakuet, a naopak, hladiny mRNA IL-10 a TNFa byly v buňkách těchto vzorků signifikantně zvýšeny. Antikoagulační agens používaná v...
|
|
| |
host ::
RSS.