|
|
Vliv protinádorových léčiv na expresi a aktivitu cytochromů P450 podrodiny 2C
Uher, Tomáš ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Feglarová, Tereza (oponent)
Metoda cílené terapie, založená na blokování metabolických drah důležitých pro růst, proliferaci a migraci tumorových buněk je v poslední době aplikována u mnoha druhů rakovinových onemocnění. Příkladem takového léčiva je cabozantinib, perorálně podávaný nízkomolekulární inhibitor tyrosinkinasových receptorů, regulující růst, angiogenezi a metastázi progresivních medulárních karcinomů štítné žlázy. Cíleně působící léčiva doplňují v rámci nádorové léčby cytostatika, mezi které patří ellipticin. Použití této látky v klinické praxi je nicméně omezeno její nízkou rozpustností a množstvím škodlivých účinků. V rámci této bakalářské práce byl studován vliv jednorázového podání cabozantinibu, ellipticinu či jejich kombinace na genovou a proteinovou expresi cytochromů P450 2C6 a 2C11 in vivo, významných biotransformačních enzymů v játrech potkana. Proteinová exprese byla zkoumána metodou Western blot s imunodetekcí, genová exprese byla stanovena prostřednictvím kvantitativní PCR. Zároveň byla určena enzymová aktivita CYP2C6 metodou 4'-hydroxylace diklofe- naku, aktivita CYP2C11 metodou 16α-hydroxylace testosteronu. V neposlední řadě byl studován přímý inhibiční účinek cabozantinibu na enzymovou aktivitu rekombi- nantní potkaní izoformy CYP2C11, in vitro. Bylo zjištěno, že exprese CYP2C6 a CYP2C11 v jaterní...
|
|
|
Vliv cytochromu b5 na aktivitu cytochromů P450
Ličko, Vojtech ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Feglarová, Tereza (oponent)
ABSTRAKT Cytochrom b5 (CYB5) je hemový protein schopný redukce cytochromů P450 (CYP) nebo jiných enzymů. Jeho regulační schopnost však byla rovněž pozorována i v apo formě, tedy bez přítomnosti hemové prostetické skupiny v aktivním centru. CYB5 je schopný přijetí elektronu z cytochrom b5 reduktasy (CYB5R) nebo cytochrom P450 reduktasy (CYPOR). Samotná CYPOR je redukována NADPH a je rovněž schopná odevzdání elektronu CYP nezávisle na CYB5. CYB5R je naopak redukována NADH. Schopnost CYB5 přijmout a odevzdat elektron byla studována in vitro na pěti různých substrátech - testosteronu, Sudanu I, aristolochové kyselině I (AAI), ellipticinu a vandetanibu. Tyto substráty byly vybrány podle jejich charakteristických reakcí, jež jsou katalyzovány příslušnými isoformami CYP. Experimenty s těmito substráty byly prováděny v prostředí s rekombinantními CYP připravenými v hmyzích buňkách nebo E. coli nebo v prostředí s jaterními mikrosomy izolovanými z různých organismů. Potkani, z nichž byla většina mikrosomů izolována, byly zároveň premedikovány různými induktory CYP. Pro prokázaní schopnosti CYB5 redukovat CYP nezávisle na CYPOR byly experimenty prováděny v prostředí s NADH nebo NADPH. Tímto způsobem byla prokázána schopnost CYB5 a CYB5R sloužit jako zdroj elektronů při metabolismu testosteronu (CYP3A4) a...
|
host ::
RSS.