|
|
HMGB1 při bakteriálních infekcích
Chmelařová, Petra ; Jílek, Petr (vedoucí práce) ; Celer, Vladimír (oponent)
Bc. Petra Chmelařová Název diplomové práce: HMGB1 při bakteriálních infekcích Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Cíl práce: Stanovení aktivace genové exprese HMGB1 na úrovni mRNA a výskytu proteinu v krvi a v tenkém střevě při bakteriální infekci u infekčního modelu gnotobiotického selete. Zhodnocení průběhu infekčního procesu expresí IL-8, IL10, TNF-α a TLR4 v tenkém střevě na úrovni mRNA a IL-8, IL10 a TNF-α v krvi a střevním výplachu na úrovni proteinu. Výsledné posouzení HMGB1 jako možného pozdního markeru sepse u prasete. Metody: 1) Skupiny gnotobiotických selat - bezmikrobní (kontrola), infikovaná (extracelulární parazit E.coli O55 nebo intracelulární parazit Salmonella enterica sérovar Typhimurium) a asociovaná selata (probiotická E.coli Nissle 1917), 2) stanovení počtu CFU bakterií v krvi a střevě kultivací na bakteriologických půdách, 3) izolace celkové RNA ze střeva kolonkovou metodou, 4) spektrofotometrická kvantifikace a odhad čistoty celkové RNA, 5) syntéza cDNA metodou s kombinovanými primery (oligo d(T) a náhodné n-mery), 6) polymerázová řetězová reakce v reálném čase s LNA sondami, 7) normalizace genových přepisů k β-aktinu a jejich relativizace k průměrné hodnotě přepisu genu, 8) stanovení koncentrací HMGB1 a...
|
|
|
HMGB1 při bakteriálních infekcích
Chmelařová, Petra ; Celer, Vladimír (oponent) ; Jílek, Petr (vedoucí práce)
Bc. Petra Chmelařová Název diplomové práce: HMGB1 při bakteriálních infekcích Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Cíl práce: Stanovení aktivace genové exprese HMGB1 na úrovni mRNA a výskytu proteinu v krvi a v tenkém střevě při bakteriální infekci u infekčního modelu gnotobiotického selete. Zhodnocení průběhu infekčního procesu expresí IL-8, IL10, TNF-α a TLR4 v tenkém střevě na úrovni mRNA a IL-8, IL10 a TNF-α v krvi a střevním výplachu na úrovni proteinu. Výsledné posouzení HMGB1 jako možného pozdního markeru sepse u prasete. Metody: 1) Skupiny gnotobiotických selat - bezmikrobní (kontrola), infikovaná (extracelulární parazit E.coli O55 nebo intracelulární parazit Salmonella enterica sérovar Typhimurium) a asociovaná selata (probiotická E.coli Nissle 1917), 2) stanovení počtu CFU bakterií v krvi a střevě kultivací na bakteriologických půdách, 3) izolace celkové RNA ze střeva kolonkovou metodou, 4) spektrofotometrická kvantifikace a odhad čistoty celkové RNA, 5) syntéza cDNA metodou s kombinovanými primery (oligo d(T) a náhodné n-mery), 6) polymerázová řetězová reakce v reálném čase s LNA sondami, 7) normalizace genových přepisů k β-aktinu a jejich relativizace k průměrné hodnotě přepisu genu, 8) stanovení koncentrací HMGB1 a...
|
|
|
Vliv salmonelového lipopolysacharidu na genový přepis a sekreci inferferonu gama
Machovská, Jana ; Celer, Vladimír (oponent) ; Jílek, Petr (vedoucí práce)
Autor: Bc. Jana Machovská Název: Vliv salmonelového lipopolysacharidu na genový přepis a sekreci interferonu gama Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd (KBLV) studijní obor: Odborný pracovník v laboratorních metodách Cíl práce: Cílem diplomové práce je posoudiv vliv typu salmonelového lipopolysacharidu na aktivaci genového přepisu a produkci interferonu gama (IFN-) jako ústředního cytokinu imunitní reakce proti intracelulárním bakteriálním patogenům. Studie byla provedena na infekčním modelu gnotobiotického prasete infikovaného gramnegativní bakterií Salmonella enterica serovar Typhimurium kmen LT2 nebo jejím rfaL- mutantem. Metody: 1) Vytvoření čtyř skupin selat: kontrolní bezmikrobní skupina (GF), skupina konvenčních selat a skupiny selat infikovaných kmenem LT2 a rfaL- 2) stanovení počtu CFU v krvi a výplachu tenkého střeva kultivací na bakteriologických půdách 3) Izolace celkové RNA z ilea, stanovení její koncentrace (spektrofotometricky) a odhad čistoty (A280/A260). 4) reverzní transkripce 5) kvantifikce specifické vzniklé cDNA (real-time PCR s LNA sondami) 6) normalizace a relativizace dat z real-time PCR 7) stanovení cytokinů jako proteinů v krvi a výplachu tenkého střeva metodou ELISA Výsledky: 1) Počet bakterií v tenkém...
|
|
| |
host ::
RSS.