|
|
UHPLC-MS/MS analýza vybraných potenciálních léčiv v biologickém materiálu
Švadlenková, Lucie ; Štěrbová, Petra (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Lucie Švadlenková Konzultant: Mgr. Adam Reguli Vedoucí diplomové práce: doc. PharmDr. Petra Štěrbová, Ph.D. Název diplomové práce: UHPLC-MS/MS analýza vybraných potenciálních léčiv v biologickém materiálu Látky s kódovým označením JM-298 a JM-299 jsou polohové izomery, které jsou v současné době předmětem intenzivního výzkumu jako potenciální léčiva používaná v léčbě metabolických a jaterních onemocnění. Cílem této práce je vyvinout a validovat UHPLC-MS/MS metodu pro stanovení těchto analytů z plazmy a stanovit jejich farmakokinetický profil v tomto materiálu po podání myším. Při úpravě vzorku plazmy (25 l) bylo zkoušeno několik precipitačních činidel (acetonitril, okyselený acetonitril, methanol a okyselený methanol), kdy nejvyšší výtěžnosti a nejnižších matricových efektů bylo dosaženo při použití 250 l methanolu. Samotná analýza probíhala za využití UHPLC-MS/MS instrumentu s ionizací elektrosprejem v pozitivním módu. Separace probíhala na koloně Acquity UPLC BEH C18 (2,1×50 mm, 1,7 µm) opatřené předkolonou se stejným typem sorbentu. Kolonový prostor byl vyhříván na 30 řC a objem nástřiku vzorku byl 1 µl, průtoková rychlost mobilní fáze 0,3 ml/min. V rámci optimalizace byly...
|
|
|
Chromatografické stanovení O-alkyl methylfosfonových kyselin v biologickém materiálu
Nováčková, Karolína ; Váňová, Nela (vedoucí práce) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Diplomová práce se zabývá chromatografickým stanovení O-alkyl methylfosfonových kyselin v lidské plazmě a úpravou biologického materiálu před vlastní analýzou. Teoretická část se zabývala problematikou jednotlivých skupin bojových látek, jejich mechanismem účinku a metabolismem v lidském těle. Praktická část byla věnována úpravě vzorku lidské plazmy s cílem vyvinout takový postup, který umožní následné stanovení koncentrace volných O-alkyl methylfosfonových kyselin jakožto metabolitů bojových chemických látek, a pomůže je tak odlišit od těch, které se uvolní z vazby na bílkoviny lidské krve. Druhým cílem bylo vyvrátit možnou interferenci mezi derivatizačním činidlem a volnými O-alkyl methylfosfonovými kyselinami. Metodika a chromatografická analýza byly aplikovány na vzorky lidské plazmy s přídavkem pinakolyl methylfosfonové kyseliny (PMPA) a ethyl methylfosfonové kyseliny (EMPA). Tyto vzorky byly nejprve upraveny pomocí centrifugační filtrace, jejíž postup byl předmětem vývoje. Centrifugace probíhala v centrifugačních zkumavkách Vivaspin 6. Nejefektivnější postup byl takový, kdy zkumavky byly nejprve propláchnuty 400 μl vody a centrifugovány 10 min při 8 000 g. Následně byl na zkumavky nanesen vzorek, centrifugován (20 min, 8 000 g) a opět byly promyty 400 μl vody (centrifugace 10 min, 8 000 g)....
|
|
|
Retention Behaviour of Catecholamines and Their Precursors under HILIC Conditions
Tibenský, Andrej ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Andrej Tibenský Vedúci diplomovej práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Názov diplomovej práce: Retenčné správanie katecholamínov a ich prekurzorov v HILIC podmienkach Témou diplomovej práce bolo skúmanie retenčného správania katecholamínov a ich prekurzorov v HILIC podmienkach za použitia spektrofotometrickej a fluorimetrickej detekcie. Skúmaných bolo 5 analytov - adrenalín, noradrenalín, dopamín, L-DOPA a tyrozín. Najskôr bolo retenčné správanie skúmané za použitia LUNA 3 µm (PFP)2 kolóny vykazujúcej RP-LC aj HILIC charakteristiky s 2 rôznymi mobilnými fázami. Prvá bola v zložení 25 mM octovej kyseliny v zmesi acetonitrilu a vody a druhá mobilná fáza pozostávala z 25 mM acetátového pufra (pH 4,50) v zmesi acetonitrilu a vody. Následne bol skúmaný efekt stacionárnej fázy na neutrálnej kolóne XBridge BEH Amide a kolónach Avantor ACE HILIC-A a Sequant ZIC-HILIC s iónovými interakciami. Mobilné fázy obsahovali vysoký podiel acetonitrilu (70-90 %) a ich zloženie bolo nasledovné - 25 mM octovej kyseliny v zmesi acetonitrilu a vody. Ďalej sa skúmal efekt zmeny koncentrácie aditíva mobilnej fázy (octová kyselina) na retenčné správanie analytov, a to na kolónach XBridge BEH Amide a...
|
|
|
Evaluation of phenolic substances content in plant material
Hollá, Marcela ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Hroboňová, Katarína (oponent) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytickej chémie Kandidát: Mgr. Marcela Hollá Školiteľ: doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Konzultant: prof. RNDr. Dalibor Šatínský, Ph.D. Názov dizertačnej práce: Hodnotenie obsahu fenolických látok v rastlinnom materiáli O výskum prírodných látok sa vždy zaujímala početná vedecká komunita. Hlavnými dôvodmi je obrovská rozmanitosť samotných látok a taktiež ich významný vplyv na zdravie človeka. Vývoj nových analytických a extrakčných metód vrátane moderných postupov úpravy vzorky umožňuje získavanie podrobnejších poznatkov o štruktúre ale aj biologických vlastnostiach rastlinných látok. Dôležitú skupinu tvoria práve látky s antioxidačnými účinkami do ktorej radíme aj fenolické látky, ktoré sú významnou zložkou ľudskej potravy. Predkladaná dizertačná práca sa venuje problematike stanovenia vybraných skupín prírodných látok z hľadiska špecifických nárokov na chromatografickú separáciu, voľbu detekčnej techniky vzhľadom na selektivitu a citlivosť stanovenia, a taktiež na možnosť aplikácie moderných a zelených/ekologických extrakčných prístupov. Prvá časť predkladanej práce sa venuje problematike stanovenia vybraných rastlinných látok. Za týmto účelom sa porovnávali výsledky získané meraním sady jablčných odrôd pomocou detektoru...
|
|
|
Hodnocení metabolismu a exkrece endogenních látek a xenobiotik
Uher, Martin ; Hroch, Miloš (vedoucí práce) ; Peš, Ondřej (oponent) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Vývoj a validace metod pro stanovení endogenních sloučenin zůstává i přes velký pokrok v analytických technikách stále náročným úkolem, vzhledem k přirozené přítomnosti analytu ve zkoumané biologické matrici. Na rozdíl od xenobiotik, která se běžně v biologickém materiálu nevyskytují, představují endogenní látky zásadní problém vedoucí k nemožnosti získat analytu prostý vzorek tzv. blank, kterého se využívá při vývoji a validaci nové metody pro přípravu referenčních vzorků. Je popsáno několik obecně uznávaných a používaných postupů pro řešení tohoto problému, jako je použití náhradních matric, matric očištěných od analytu, nebo zástupných analytů, nicméně použité pracovní postupy však ne vždy splňují požadavky na vývoj spolehlivé analytické metody dle validačních směrnic a předpisů. Cílem této studie bylo navrhnout nový přístup v přípravě validačních referenčních vzorků při zachování povahy biologické matrice a vyřešení problému s přirozenou přítomností analyzovaných sloučenin v těchto vzorcích a validovanou metodu aplikovat v rámci metabolomických studií zaměřených na výzkum vybraných jaterních onemocnění v rámci klinického i základního výzkumu na in vivo modelech. Použitý postup je odvozen od metody standardního přídavku. Na rozdíl od klasické metody je však přídavek upraven dle zjištěné bazální...
|
|
|
Retention Behaviour of Catecholamines and Their Precursors under HILIC Conditions
Tibenský, Andrej ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Andrej Tibenský Vedúci diplomovej práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Názov diplomovej práce: Retenčné správanie katecholamínov a ich prekurzorov v HILIC podmienkach Témou diplomovej práce bolo skúmanie retenčného správania katecholamínov a ich prekurzorov v HILIC podmienkach za použitia spektrofotometrickej a fluorimetrickej detekcie. Skúmaných bolo 5 analytov - adrenalín, noradrenalín, dopamín, L-DOPA a tyrozín. Najskôr bolo retenčné správanie skúmané za použitia LUNA 3 µm (PFP)2 kolóny vykazujúcej RP-LC aj HILIC charakteristiky s 2 rôznymi mobilnými fázami. Prvá bola v zložení 25 mM octovej kyseliny v zmesi acetonitrilu a vody a druhá mobilná fáza pozostávala z 25 mM acetátového pufra (pH 4,50) v zmesi acetonitrilu a vody. Následne bol skúmaný efekt stacionárnej fázy na neutrálnej kolóne XBridge BEH Amide a kolónach Avantor ACE HILIC-A a Sequant ZIC-HILIC s iónovými interakciami. Mobilné fázy obsahovali vysoký podiel acetonitrilu (70-90 %) a ich zloženie bolo nasledovné - 25 mM octovej kyseliny v zmesi acetonitrilu a vody. Ďalej sa skúmal efekt zmeny koncentrácie aditíva mobilnej fázy (octová kyselina) na retenčné správanie analytov, a to na kolónach XBridge BEH Amide a...
|
|
|
Vývoj LC-MS metody pro stanovení vybraných endokrinních disruptorů
Chvalkovská, Eliška ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Eliška Chvalkovská Vedoucí diplomové práce: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Konzultant diplomové práce: Mgr. Martin Novák Název diplomové práce: Vývoj LC-MS metody pro stanovení vybraných endokrinních disruptorů Diplomová práce je zaměřena na vývoj a optimalizaci LC−MS metody pro stanovení dvanácti endokrinních disruptorů v plodové vodě u těhotných žen ve třetím trimetru těhotenství. U těchto žen existuje podezření výskytu předčasných porodů v souvislosti se zvýšeným výskytem endokrinních disruptorů v plodové vodě. Jako extrakční metoda pro izolaci analytů z plodové vody byla vybrána extrakce z kapaliny do kapaliny pomocí 4-methylpentan-2-onu. Pro separaci byla použita vysokoúčinná kapalinová chromatografie v systému reverzních fází s kolonou Hypersil C4 GOLD (2,1 × 100 mm, částice 1,9 µm). Pro analýzu byla využita gradientová eluce s mobilní fází A (0,5% (v/v) vodný roztok kyseliny mravenčí) a B (0,5% (v/v) roztok kyseliny mravenčí v acetonitrilu) při průtoku 0,5 ml/min, nástřiku 5 µl a 35 řC v kolonovém termostatu. K identifikaci stanovení odezvy jednotlivých analytů byl využit vysokorozlišovací hmotnostní spektrometr Orbitrap Q Exactive Plus s chemickou ionizací za...
|
|
|
Stanovení fyzikálně-chemických a farmakokinetických vlastností sloučenin ze skupiny potenciálních antituberkulotik
Nevosadová, Lenka ; Váňová, Nela (vedoucí práce) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Diplomová práce se zaměřuje na stanovení fyzikálně−chemických a stabilitních vlastností vybraných látek ze skupiny potenciálních antituberkulotik označovaných jako T−, K−, LV− a G− látky Cílem této práce bylo rozšířit o těchto sloučeninách portfolio informací nezbytných k výběru látek pro následné preklinické testování nových potenciálních léčiv. Teoretická část práce přináší seznámení s celosvětově rozšířeným závažným infekčním onemocněním, tuberkulózou, a vznikající rezistencí kmenů Mycobacterium tuberculosis na nynější léčiva. Dále jsou zde uvedeny vývojové směry nových potenciálních antituberkulotik a popis analytických metod použitých v experimentální části - spektrofotometrie, kapalinová chromatografie a hmotnostní spektrometrie. Experimentální část práce se věnuje popisu jednotlivých postupů, které byly použity pro stanovení vlastností vybraných látek. Jmenovitě se jedná o rozpustnost látky v 5 % DMSO, stabilitu v plasmě a Šulově půdě, mikrosomální stabilitu a experimentální stanovení logP/logD. Z výsledků experimentů je velmi dobře patrné, jak jednotlivé strukturní obměny v molekulách látek ovlivnily některé farmakokinetické či fyzikálně-chemické vlastnosti dané sloučeniny. Například snížení plasmatické stability, v důsledku začleněním síry do uhlíkového spojovacího řetězce, nebo snížení...
|
|
|
Vývoj LC-MS metody pro stanovení vybraných endokrinních disruptorů
Chvalkovská, Eliška ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Eliška Chvalkovská Vedoucí diplomové práce: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Konzultant diplomové práce: Mgr. Martin Novák Název diplomové práce: Vývoj LC-MS metody pro stanovení vybraných endokrinních disruptorů Diplomová práce je zaměřena na vývoj a optimalizaci LC−MS metody pro stanovení dvanácti endokrinních disruptorů v plodové vodě u těhotných žen ve třetím trimetru těhotenství. U těchto žen existuje podezření výskytu předčasných porodů v souvislosti se zvýšeným výskytem endokrinních disruptorů v plodové vodě. Jako extrakční metoda pro izolaci analytů z plodové vody byla vybrána extrakce z kapaliny do kapaliny pomocí 4-methylpentan-2-onu. Pro separaci byla použita vysokoúčinná kapalinová chromatografie v systému reverzních fází s kolonou Hypersil C4 GOLD (2,1 × 100 mm, částice 1,9 µm). Pro analýzu byla využita gradientová eluce s mobilní fází A (0,5% (v/v) vodný roztok kyseliny mravenčí) a B (0,5% (v/v) roztok kyseliny mravenčí v acetonitrilu) při průtoku 0,5 ml/min, nástřiku 5 µl a 35 řC v kolonovém termostatu. K identifikaci stanovení odezvy jednotlivých analytů byl využit vysokorozlišovací hmotnostní spektrometr Orbitrap Q Exactive Plus s chemickou ionizací za...
|
|
|
Analytické a bioanalytické hodnocení nových protinádorových léčiv
Šesták, Vít ; Štěrbová, Petra (vedoucí práce) ; Bednář, Petr (oponent) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická Fakulta v Hradci Králové Katedra Farmaceutické Chemie a Farmaceutické Analýzy Kandidát: Mgr. Vít Šesták Konzultant: PharmDr. Ján Stariat, Ph.D. Školitel: doc. PharmDr. Petra Kovaříková, Ph.D. Název disertační práce: Analytické a bioanalytické hodnocení nových protinádorových léčiv Farmaceutická analýza hraje nezastupitelnou roli ve vývoji nových účinnějších, levnějších a bezpečnějších léčiv a doprovází je od syntézy po celou dobu jejich existence. V současnosti je dominantní technikou ve farmaceutické analýze kapalinová chromatografie (LC) s různými detekčními modalitami. Separace jednotlivých složek na chromatografické koloně usnadňuje analýzu velice složitých směsí, jako jsou vzorky ze stabilitních studií nebo vzorky biologického materiálu. Rostoucí oblíbenost spojení LC s hmotnostní detekcí (MS) je dána - mimo větší dostupnosti hmotnostních detektorů - jejich schopností dělit ionty analytů podle jejich hmotnosti. Tato další úroveň separace zvyšuje selektivitu detekce i citlivost. Navíc k tomu nabízí MS detekce informace o struktuře analytu - ať už jako hodnotu poměru hmotnosti a náboje nebo fragmentační spektra. Předložená disertační práce se v teoretické části zabývá popisem principů kapalinové chromatografie, hmotnostní detekce, validací analytických a...
|
host ::
RSS.