|
|
Stanovení fyzikálně-chemických a farmakokinetických vlastností sloučenin ze skupiny potenciálních antituberkulotik
Nevosadová, Lenka ; Váňová, Nela (vedoucí práce) ; Štěrbová, Petra (oponent)
Diplomová práce se zaměřuje na stanovení fyzikálně−chemických a stabilitních vlastností vybraných látek ze skupiny potenciálních antituberkulotik označovaných jako T−, K−, LV− a G− látky Cílem této práce bylo rozšířit o těchto sloučeninách portfolio informací nezbytných k výběru látek pro následné preklinické testování nových potenciálních léčiv. Teoretická část práce přináší seznámení s celosvětově rozšířeným závažným infekčním onemocněním, tuberkulózou, a vznikající rezistencí kmenů Mycobacterium tuberculosis na nynější léčiva. Dále jsou zde uvedeny vývojové směry nových potenciálních antituberkulotik a popis analytických metod použitých v experimentální části - spektrofotometrie, kapalinová chromatografie a hmotnostní spektrometrie. Experimentální část práce se věnuje popisu jednotlivých postupů, které byly použity pro stanovení vlastností vybraných látek. Jmenovitě se jedná o rozpustnost látky v 5 % DMSO, stabilitu v plasmě a Šulově půdě, mikrosomální stabilitu a experimentální stanovení logP/logD. Z výsledků experimentů je velmi dobře patrné, jak jednotlivé strukturní obměny v molekulách látek ovlivnily některé farmakokinetické či fyzikálně-chemické vlastnosti dané sloučeniny. Například snížení plasmatické stability, v důsledku začleněním síry do uhlíkového spojovacího řetězce, nebo snížení...
|
|
|
LC-MS/MS studie 1. fáze in vitro biotransformace potenciálních léčiv působících v terapii Alzheimerovy nemoci.
Kuřátková, Aneta ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Doposud nebyla nalezena léčba, která by zcela zastavila progresi Alzheimerovy nemoci. Dříve používaný takrin měl v terapii Alzheimerovy choroby dobré výsledky, nicméně dlouhodobé užívání vedlo k chronické hepatotoxicitě způsobené jeho metabolity. Tato diplomová práce se zabývá sloučeninou 7-fenoxytakrin, která je jedním z nadějných substituovaných derivátů takrinu a mohla by být jedním z kandidátů pro potenciální využití v terapii Alzheimerovy choroby. Z důvodu vzniku hepatotoxických metabolitů takrinu po biotransformaci v játrech se jeví jako nezbytné u molekuly 7-fenoxytakrinu identifikovat jeho vznikající metabolity. V rámci diplomové práce byla provedena in vitro biotransformační studie 7-fenoxytakrinu za použití lidských jaterních mikrosomů. Pro stanovení parentní látky a vznikajících sedmnácti metabolitů byla využita technika vysokoúčinné kapalinové chromatografie spojená s tandemovou hmotnostní spektrometrií. Výsledky ukázaly vznik šesti monohydroxylovaných a jedenácti dihydroxylovaných metabolitů 7-fenoxytakrinu. Hydroxylace je tedy hlavní metabolická reakce po in vitro mikrosomální biotransformaci. Kromě identifikace metabolitů byla v rámci této diplomové práce provedena i kvantifikační a mikrosomálně stabilitní studie zahrnující stanovení úbytku parentní látky v čase. Dále byl stanoven...
|
|
|
Využití LC-MS/MS v in vitro transportních experimentech
Salvová, Šárka ; Váňová, Nela (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Autor: Šárka Salvová Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Nela Váňová, Ph.D. Název diplomové práce: Využití LC-MS/MS v in vitro transportních experimentech Gilteritinib, léčivo ze skupiny antineoplastik, se využívá k cílené protinádorové terapii. Řadí se k inhibitorům tyrosinkinázových receptorů. Jeho struktura je založena na pyrazinkarboxamidovém skeletu. Doposud byl chromatograficky stanovován v biologickém materiálu pouze z plazmy. V této diplomové práci byl gilteritinib stanovován z buněčného média Opti-MEM za účelem využití pro in vitro transportní experimenty a následně byla optimalizovaná a validovaná metoda LC-MS/MS. V průběhu vývoje a optimalizace LC- MS/MS metody byla u hmotnostního spektrometru Thermo Finnigan LCQ Advantage Max Ion Trap s narůstajícím počtem nástřiků pozorována zvyšující se suprese signálu pro gilteritinib i jeho vnitřní standard (maravirok), která dosahovala až 75 % po pouhých 30 nástřicích. Také byla viditelná kontaminace vstupu na iontransferovou kapiláru, ke které je iontový zdroj (elektrosprej) umístěn diagonálně. Dále bylo testováno, zdali jiná konstrukce iontového zdroje (ortogonální poloha elektrospreje) problém nevyřeší. Po transferu metody na...
|
|
|
Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu
Knoblochová, Dominika ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Dominika Knoblochová Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu 3-hydroxykynurenin je jedním z metabolitů tryptofanu a je studován zvláště pro svoji oxidačně modulační aktivitu, díky které má schopnost chránit buňky před oxidačním stresem. Je tvořen z kynureninu katalýzou enzymu kynurenin 3-monooxygenasa, jehož aktivita je sledována na Katedře farmakologie a toxikologie. Pro její studování je třeba kvantitativně stanovit 3-hydroxykynurenin v biologické matrici. Cílem této diplomové práce bylo vyvinout HPLC metodu pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu s použitím vysokoúčinné kapalinové chromatografie a následně metodu validovat. Během vývoje bylo testováno několik mobilních fází s různými hodnotami pH. Výsledná mobilní fáze byla tvořena 100mM kyselinou mravenčí (pH = 2,25) a methanolem (95:5). Byly také zkoušeny různé typy stacionárních fází, z nichž byla nakonec zvolena kolona YMC TRIART PFP s rozměry 15 × 3 mm a rozměrem částic 5 µm. K detekci 3-hydroxykynureninu byl zvolen UV-VIS detektor, na němž byla nastavena vlnová délka 370 nm. Byla...
|
|
|
Optimalizace podmínek derivatizační reakce pro GC-MS analýzu vybraných látek
Jan, Tomáš ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Vedoucí diplomové práce: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Kandidát: Tomáš Jan Název diplomové práce: Optimalizace podmínek derivatizační reakce pro GC-MS analýzu vybraných látek Chinolinová kyselina je endogenní molekula vznikající kynurenátovou cestou jako meziprodukt při metabolické přeměně aminokyseliny L-tryptofanu. Chinolinová kyselina působí jako agonista na NMDA receptorech, jejichž nadměrná aktivace vede k buněčné smrti neuronů. Současné výzkumy přisuzují zvýšené hladině chinolinové kyseliny vyšší riziko rozvoje neurodegenerativních chorob a poruch chování. Hladina kyseliny může být zvýšena větším příjmem tryptofanu (např. doplňky stravy pro zklidnění a podporu duševního zdraví) nebo probíhajícím zánětem v organismu. Cílem této práce bylo vyvinout analytickou metodu pro stanovení chinolinové kyseliny v různých matricích za využití GC/MS a doplnit tak metody, kterými jsou stanovovány ostatní metabolity tryptofanu. Úspěšně byla vyzkoušena derivatizace alkylchloroformiáty. Selektivita byla testována na koloně RTX-5MS s nepolární stacionární fází a na polární koloně SLB-IL59 využívající iontové kapaliny. Analyty byly detekovány na hmotnostním spektrometru typu jednoduchého kvadrupólu...
|
|
|
Sledování oxidačního stresu HPLC metodami
Kalíšková, Tereza ; Váňová, Nela (vedoucí práce) ; Lochman, Lukáš (oponent)
Reaktivní formy kyslíku a dusíku mají v organismech svou fyziologickou úlohu, ale jejich nadměrná tvorba poškozuje buňky a může vyústit v řadu onemocnění. Interakcí reaktivních forem kyslíku a dusíku s biomolekulami dochází k jejich poškození. Poškozené molekuly lipidů, proteinu i DNA poté slouží jako biomarkery oxidačního stresu a umožňují jeho hodnocení. Oxidační stres může být vyvolán také vnějšími faktory například léčivy, ten se poté může projevit jako nežádoucí a toxické účinky. Pro sledování bezpečnosti léčiv je tedy důležité sledovat schopnost léčiva vyvolat oxidační stres. Pro stanovení malondialdehydu z buněčné pelety jako biomarkeru lipoperoxidace byla vyvinuta metoda vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometii. Největší pozornost byla věnována optimalizaci úpravy vzorku pomocí deproteinace, derivatizace a extrakce na tuhou fázi. Metoda byla validována s přijatelnou specifitou, přesností, precizností výtěžnosti i matricovými efekty a vyhovuje tak požadavkům Evropské lékové agentury na validaci bioanalytických metod. Metodou lze stanovit intracelulární malondialdehyd v rozmezí koncentrací 0,1-2 μmol∙dm-3. Metoda byla úspěšně použita na analýzu biologických vzorků z in vitro experimentu, kde bylo hodnoceno množství malondialdehydu v HepG2 buňkách...
|
|
|
SLEDOVÁNÍ BIOMARKERŮ OXIDAČNÍHO STRESU HPLC METODAMI
Váňová, Nela ; Jun, Daniel (vedoucí práce) ; Doležal, Rafael (oponent) ; Hroch, Miloš (oponent)
a klíčová slova Ačkoliv mají reaktivní formy kyslíku a dusíku zásadní význam pro fyziologické procesy probíhající v živém organismu, jejich nadměrná produkce vyvolaná působením vnitřních i vnějších vlivů může vést k závažnému narušení redoxní homeostázy, poškození intracelulárních komponent a tím zásadně ovlivnit jejich funkci nebo dokonce indukovat buněčnou smrt. Oxidační stres patří mezi významné mechanismy toxického působení chemických látek včetně léčiv a může tak přispívat k rozvoji jejich závažných nežádoucích účinků. Vzhledem k nízkému počtu studií, zabývajících se sledováním oxidačního stresu po expozici oximovým reaktivátorům acetylcholinesterasy (AChE) in vitro a in vivo, není vztah mezi toxicitou těchto léčiv a tvorbou specifických markerů oxidativního poškození biomolekul stále zcela objasněn. Pro posouzení antioxidačních/prooxidačních účinků léčiv byla vyvinuta metoda vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s tandemovou hmotnostně spektrometrickou detekcí (LC-MS/MS) pro simultánní stanovení dvou biomarkerů oxidačního stresu, malondialdehydu (MDA) a 3-nitrotyrosinu (3-NT), z biologických matric. V rámci validace této LC-MS/MS metody bylo dosaženo přijatelné selektivity, správnosti, krátkodobé i dlouhodobé přesnosti a návratnosti pracovního postupu a nebyly pozorovány žádné...
|
|
|
Analysis of oxidative and free radical induced DNA damage
Váňová, Nela ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Kovaříková, Petra (oponent)
Analýza oxidativního poškození DNA volnými radikály Diplomová práce Nela Váňová Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Volné radikály a reaktivní formy kyslíku (ROS) jsou vysoce reaktivní molekuly schopné modifikovat biomolekuly včetně DNA. 5',8-cyklo-2'-deoxynukleosidy představují skupinu DNA lézí vyznačující se současným poškozením sacharidové složky a nukleové báze stejného purinového nukleosidu a společněs 8-oxo-2'-deoxypuriny patří do hlavní skupiny lézí vznikajících atakem volných radikálů (včetně hydroxylového radikálu). Kvantifikace oxidativně a volnými radikály způsobených DNA lézí jako biomarkerů oxidačního stresu hraje významnou roli ve studiu jejich vlivu na lidské zdraví a nemoci. Pro kvantifikaci těchto DNA lézí ve vzorcích ozařovaných gamma paprsky bude použito spojení tandemové spojení hmotnostní spektrometrie a vysoce účinné kapalinové chromatografie (LC/MS/MS). Před nástřikem do LC/MS/MS, ozářené vzorky podrobené enzymatickému štěpení za účelem získání volných nukleosidů musí být odsoleny a DNA léze musí být separovány od nepoškozených nukleosidů. Pro separaci (5'R)-5',8-cyklo-2'-deoxyadenosinu; (5'R)-5',8-cyklo-2'-deoxyguanosinu; (5'S)- 5',8-cyklo-2'-deoxyadenosinu; (5'S)-5',8-cyklo-2'-deoxyguanosinu;...
|
|
|
UHPLC-MS/MS analýza vybraných léčiv v biologickém materiálu
Motyčka, Filip ; Štěrbová, Petra (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Bisdioxopiperazinový derivát dexrazoxan (dále jen DEX) je jediné klinicky užívané léčivo proti kardiotoxicitě způsobené antracykliny. Prvotní studie přišla s myšlenkou, že DEX je proléčivo, které je v kardiomyocytech enzymatickou hydrolýzou piperazinového kruhu aktivováno na metabolit označovaný ADR-925. Nicméně další výzkum prokázal, že skutečným mechanismem účinku je deplece topoizomerázy IIβ způsobené samotným DEX. Za účelem detekce DEX a jeho metabolitu byla vyvinuta bioanalytická metoda na HPLC-MS/MS systému. Tato metoda trvá 30 minut, což je na požadavky moderních bioanalýzy poměrně dlouhá doba. Cílem tohoto projektu byla snaha vyvinout a validovat rychlejší metodu využívající UHPLC-MS/MS schopnou detekovat DEX a ADR-925 v plasmě. Veškerý vývoj probíhal na UHPLC systému ve spojení s hmotnostním spektrometrem s trojitým kvadrupólem s ESI ionizací v pozitivním módu (obojí Shimadzu). Jako stacionární fáze byly testovány ZORBAX Bonus-RP (100 mm × 3.0 mm, 1.8 μm), Luna Omega Polar C18 (100 mm × 2.1 mm, 1.6 μm) a Kinetex F5 column (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm). Testované mobilní fáze byly směsi acetonitrilu či methanolu s různými koncentracemi mravenčanu amonného nebo kyselinou mravenčí při isokratické i gradientové eluci. Nejlepších výsledků bylo dosaženo na koloně Kinetex F5 s 1mM mravenčanem amonným...
|
|
|
Vliv rozpustnosti a adsorpce vybraných látek na plast v transportních experimentech
Šilhanová, Marie ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Studentka: Marie Šilhanová Školitel: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv rozpustnosti a adsorpce vybraných látek na plast v transportních experimentech Z transportních experimentů na buněčných modelech získáváme významné informace o transportních mechanismech léčiv v organismu. In vitro experimenty jsou prováděné například na insertech typu Transwell. Během měření bylo zjištěno, že výsledky pro některé látky jsou nehomogenní a patrně dochází k úbytku množství látky v roztoku z důvodů horší rozpustnosti lipofilních látek nebo jejich adsorpce na povrch plastů, ze kterých jsou inserty vyrobeny atd. Kvůli těmto problémům dochází k významnému zkreslování výsledků. Tato práce se zaměřila na antivirotika, u kterých byla pozorována při transportních experimentech nepřesná data. Nejprve byly vyvinuty HPLC/MS metody, pomocí kterých byly stanovovány koncentrace vzorků antivirotik. Vlivy adsorpce na plastové povrchy a rozpustnosti pro jednotlivá léčiva byly stanoveny za různých podmínek. Látky byly rozděleny do skupin podle jejich chování. Poté byly tyto informace porovnány se vzorky získanými z transportních experimentů. Nakonec byly prozkoumávány možnosti, které by...
|
host ::
RSS.