|
|
Úloha kináz rodiny Src v metabolismu RNA
Gemperle, Jakub ; Rösel, Daniel (vedoucí práce) ; Mácha, Jaroslav (oponent)
Dosud bylo získáno mnoho faktů o úloze kináz rodiny Src v cytoplazmě či na plazmatické membráně a o jejich interakcích s receptory růstových faktorů nebo s komplexy ve fokálních adhezích. Jejich funkční význam u perinukleární membrány nebo dokonce uvnitř jádra však nebyl dosud dobře charakterizován. Tato práce s použitím dostupných informací poukazuje na fakt, že se kinázy rodiny Src opravdu vyskytují po určitý čas i v jádře. To otevírá novou škálu působnosti kináz rodiny Src také na metabolismus RNA, neboť se dosud předpokládalo, že jejich vliv je omezen pouze na cytoplazmatický kompartment. Tato práce shrnula dosavadní poznatky, které poukazují na složitou síť regulace metabolismu RNA závislé na kinázách rodiny Src; kinázy rodiny Src mají pleiotropní efekt nejen na RNA vazebné proteiny, ale i na remodelaci struktury chromatinu. Přímou interakcí tyto kinázy ovlivňují transport, sestřih a stabilitu RNA či genovou expresi. Tento souhrn naznačuje, že se kinázy rodiny Src nezanedbatelně podílí na metabolismu RNA a to mnoha způsoby.
|
|
|
Úloha glykoproteinu NG2 v regulaci Rho/ROCK signalizace
Kratochvílová, Magdalena ; Rösel, Daniel (vedoucí práce) ; Kuželová, Kateřina (oponent)
NG2 je transmembránový glykoprotein, který se účastní buněčných procesů jako je adheze, migrace nebo invazivita, které jsou významné jednak pro vyvíjející se tkáň, ale také pro tvorbu nádorů a metastáz. NG2 mimo jiné způsobuje inhibici růstu neuritů, a je zřejmě významný pro améboidní invazivitu buněk. Oba tyto procesy jsou si v mnoha ohledech podobné. Jak při inhibici růstu neuritů, tak i při mezenchymální-améboidním přechodu dochází k morfologickým změnám buněk, jejichž výsledkem je ztráta buněčných výběžků a získání kulatého tvaru. Pro oba procesy je také zásadní aktivace Rho/ROCK signalizace. Propojení NG2 se signální dráhou Rho/ROCK bylo naznačeno právě v procesu inhibice růstu neuritů. Mechanismus regulace Rho/ROCK signalizace pomocí glykoproteinu NG2 ale zatím není znám. V této práci je navržen možný molekulární mechanismus aktivace Rho/ROCK dráhy, a to pomocí signalizačního komplexu NG2/MUPP1/Syx. Kdy "scaffold" protein MUPP1, vázaný na NG2, umožňuje vazbu a aktivaci proteinu Syx. Ten pak jakožto RhoGEF aktivuje Rho/ROCK signalizaci. Aktivovaná Rho/ROCK dráha vede jednak k inhibici růstu výběžků, tak i zvýšené kontraktilitě buněk a zvýšení jejich trakčních sil. Tyto procesy jsou přitom zcela zásadní pro améboidní způsob invazivity buněk. NG2 by mohl navíc fungovat i jako integriny zastupující...
|
|
|
In-vitro analýza améboidně-mezenchymálního přechodu A375m2 melanomových buněk
Kasalová, Lenka ; Rösel, Daniel (vedoucí práce) ; Vomastek, Tomáš (oponent)
Invazivita nádorových buněk je důležitým aspektem vývoje rakoviny. Individuální nádorové buňky vykazují v 3D prostředí minimálně dva typy invazivity a to invazivitu mezenchymální a invazivitu améboidní. Buňky mohou v závislosti na jejich stavu a okolním prostředí mezi těmito způsoby invazivity přepínat. Améboidně- mezenchymální přechod je oproti mezenchymálně-améboidnímu přechodu méně prostudován. Provedli jsme proteomickou analýzu améboidně-mezenchymálního přechodu u melanomových buněk linie A375M2, který jsme indukovali inhibitorem kinázy ROCK Y27632 v 3D matrigelové matrici a ve 2D prostředí. Indukce tohoto přechodu ovlivnila expresi 92 proteinů a změnila hladinu fosforylace u 51 proteinů. Pouze u 17 proteinů byla exprese a u 8 proteinů fosforylace změněna shodně ve 2D i 3D prostředí. Zjistili jsem, že PKCα reguluje améboidní migraci, a její inhibice inhibitorem Gö6976 vede k améboidně-mezenchymálnímu přechodu. Analýza proteomických dat dále ukázala, že indukce améboidně-mezenchymálního přechodu inhibitorem kinázy ROCK vede k aktivaci antiapoptotických signálů a signálních drah regulující aktinový cytoskelet a především fokální adheze.
|
|
| |
|
|
Význam dipeptidylpeptidázy-IV a homologních proteáz v procesech migrace a invaze.
Fejfarová, Edita ; Rösel, Daniel (oponent) ; Bušek, Petr (vedoucí práce)
Migrace a invaze jsou děje probíhající přirozeně v organismu během embryogeneze, při imunitních reakcích či hojení ran. Velice důležitým faktorem jsou také u řady závažných onemocnění jako např. revmatická artritida a maligní nádory. Význam proteolytických enzymů v těchto procesech je nesporný - podílejí se na degradaci extracelulární matrix a tím usnadňují pohyb buňky. Dipeptidylpeptidáza-IV (DPPIV) odštěpuje pouhé dvě aminokyseliny od N-konce a na degradaci ECM se nepodílí. Rozpoznává a štěpí krátké peptidy mající jako předposlední AA prolin, který svému držiteli obvykle zajišťuje rezistenci vůči běžným typům proteáz. Mezi substráty DPPIV a homologních proteáz patří chemokiny uplatňující se v signalizaci migrace, jako jsou SDF-1 a RANTES či neuropeptid Y. Jejich štěpením a tím inaktivací se molekuly s DPPIV-podobnou aktivitou projevují jako modulátory migračního signálu na buňkách choriokacinomu, neuroblastomu, buňkách Sézaryho syndromu či epiteliálních buňkách migrujících v reakci na poranění. Dalším mechanismem proteáz s DPPIV-podobnou aktivitou je vazba na proteiny extracelulární matrix, čímž se spolupodílejí na adhezi buněk a tím ovlivňují jejich migrační schopnost. Vliv na migraci a invazi mohou mít i intracelulární enzymové homology DDP8 a DPP9, u kterých je mechanismus účinku již z...
|
|
|
Crosstalk of integrin and mTOR signaling
Teglová, Lucie ; Libus, Jiří (oponent) ; Rösel, Daniel (vedoucí práce)
Propojení integrinové a mTOR signalizace je buněčným procesem, který umožňuje regulovat buněčný růst na základě interakce buňky s okolním prostředím. Přestože informace o adhezivním stavu buňky přenášené integrinovou signalizací jsou pro růst buňky podstatné, vlastní propojení obou drah je poměrně málo popsáno. V této diplomové práci ukazujeme na některé aspekty toho propojení zjištěné za pomocí dvou odlišných přístupů. V první části práce bylo studováno ovlivnění mTOR dráhy proteinem p130Cas v buňkách transformovaných aktivovaným Src onkoproteinem. p130Cas je adaptorový protein, který reguluje především buněčný pohyb a přežívání a je v odpověď na aktivací integrinů fosforylován kinázou Src a kinázou adhezivních folků. V nedávné době bylo také popsáno zapojení proteinu p130Cas do procesů buněčné invazivity a metastazování. V této diplomové práci ukazujeme, že buňky nadprodukující protein p130Cas vykazují stimulaci mTOR dráhy. Tento jev je pravděpodobně závislý na substrátové doméně p130Cas proteinu. Druhá část práce se zabývá vlivem proteinu Rheb na integrinovou signalizaci. Pro studium zapojení proteinu Rheb byly vytvořeny stabilní linie exprimující různé varianty tohoto proteinu. Tyto linie byly následně charakterizovány z hlediska ovlivnění mTOR signalizace, buněčného cyklu a integrinové...
|
|
|
Molekulární mechanismy přenosu extracelulárních signálů dráhou ERK.
Bráborec, Vojtěch ; Rösel, Daniel (oponent) ; Vomastek, Tomáš (vedoucí práce)
Signální MAPK (mitogen-activated protein kinase) kaskáda představuje evolučně konzervovaný mechanismus, který buňkám umožňuje vnímat extracelulární signály a vhodným způsobem na tyto signály reagovat. Nejlépe prostudovaným členem MAPK rodiny je proteinkináza ERK (extracellular signal-regulated kinase), která spolu s proteiny Raf a MEK (MAPK/ERK kinase) tvoří prototypickou signální dráhu regulující široké spektrum biologických dějů jako je kupříkladu proliferace, diferenciace, buněčný pohyb, adheze či apoptóza. Aby mohla jedna signální dráha regulovat množství různých odpovědí, vyvinuly si buňky modulační mechanismy, mezi které patří odlišná síla a doba trvání signálu, různá lokalizace proteinů, komunikace s ostatními signálními drahami, rozdíly ve výběru substrátů i to, jakým způsobem si signalizační molekuly dané spektrum interakčních partnerů vybírají. Uvedené mechanismy jsou ve velké míře ovlivňovány proteiny s neenzymatickými funkcemi, jako jsou tzv. scaffold proteiny, proteinové inhibitory a proteinové kotvy. Tyto proteiny usměrňují signály vedoucí k dosažení konkrétní buněčné odpovědi a jsou tedy klíčovými články signální transdukce. I přes rostoucí význam proteinových modulátorů v buněčné signalizaci, není jejich fyziologická role často známá. Částečnou výjimku představují dva fyziologické děje -...
|
|
| |
|
| |
|
| |
host ::
RSS.