|
| |
|
| |
|
|
Biochemical and molecular studies of cytochrome c oxidase and ATP synthase deficiencies
Fornůsková, Daniela ; Zeman, Jiří (vedoucí práce) ; Hyánek, Josef (oponent) ; Stiborová, Marie (oponent)
Mgr. Daniela Fornůsková Disertační práce Studium poruch cytochrom c oxidasy a ATP synthasy na biochemické a molekulární úrovni ABSTRAKT Savčí organismus je plně závislý na systému oxidativní fosforylace (OXPHOS) jako hlavním zdroji produkce energie (ATP) v buňce. Poruchy OXPHOS mohou být způsobeny mutacemi v genech kódovaných mitochondriální DNA nebo jadernou DNA. Část výzkumné práce je zaměřena na roli raně a pozdně se asemblujících, jaderně kódovaných, strukturních podjednotek cytochrom c oxidasy (CcO) a Oxa1l, lidského homologu kvasinkové mitochondriální Oxa1 translokasy, v biogenezi cytochrom c oxidasy a její funkci s využitím stabilní RNA interference COX4, COX5A, COX6A1 a OXA1L a ektopické exprese epitopově značených podjednotek Cox6a, Cox7a a Cox7b v buněčné linii HEK (lidské embryonální ledviny)-293. Naše výsledky ukazují, že zatímco podjednotky Cox4 a Cox5a jsou nezbytné pro asemblaci funkčního komplexu CcO, Cox6a podjednotka je důležitá pro její stabilitu. V buňkách se sníženou expresí OXA1L byla překvapivě zjištěna normální aktivita i hladina holoenzymu CcO, přestože inaktivace OXA1 u kvasinek vyvolá kompletní ztrátu aktivity CcO. Při studiu poruch OXPHOS v izolovaných mitochondriích kosterního svalu, srdce, jater a frontálního kortexu získaných od pacientů s Leigh syndromem (mtDNA mutace...
|
|
|
Pokročilá lipidomika u vybraných klinických stavů.
Staňková, Barbora ; Tvrzická, Eva (vedoucí práce) ; Hyánek, Josef (oponent) ; Kazdová, Ludmila (oponent)
Poruchy metabolismu lipidů jsou rizikovými faktory kardiovaskulárních, metabolických a nefrologických onemocnění i některých nádorů. Pro snížení kardiovaskulární mortality a zlepšení prognózy těchto pacientů se v současnosti věnuje značné úsilí studiu nových rizikových faktorů a surogátních markerů patogeneze těchto chorob. Cílem disertační práce bylo podat ucelený přehled o lipidové problematice, o vlastnostech, funkci a metabolismu lipidů za fyziologických a různých patologických stavů a o možnosti využití vybraných lipidových parametrů v diagnostice těchto patologických stavů. Vybrané lipidové parametry byly sledovány v několika různých studiích zaměřených na konkrétní patologickou jednotku. Kromě konvenčních lipidových parametrů bylo sledováno zastoupení mastných kyselin, a to u zdravých kontrol a dále u pacientů s metabolickým syndromem, chronickou pankreatitidou a karcinomem pankreatu. Markery oxidačního stresu (oxidačně modifikované LDL a konjugované dieny v precipitovaných LDL) a aktivita paraoxonasy 1 byly opět měřeny u zdravých kontrol, u osob s metabolickým syndromem, u probandů s různou koncentrací apoB-48 a u pacientů s chronickou pankreatitidou a karcinomem pankreatu. Stanovení subfrakcí částic LDL bylo provedeno u zdravých kontrol, pacientů s konečným stádiem onemocnění ledvin a u...
|
|
| |
|
|
Biochemical and molecular studies of cytochrome c oxidase and ATP synthase deficiencies
Fornůsková, Daniela ; Zeman, Jiří (vedoucí práce) ; Hyánek, Josef (oponent) ; Stiborová, Marie (oponent)
Mgr. Daniela Fornůsková Disertační práce Studium poruch cytochrom c oxidasy a ATP synthasy na biochemické a molekulární úrovni ABSTRAKT Savčí organismus je plně závislý na systému oxidativní fosforylace (OXPHOS) jako hlavním zdroji produkce energie (ATP) v buňce. Poruchy OXPHOS mohou být způsobeny mutacemi v genech kódovaných mitochondriální DNA nebo jadernou DNA. Část výzkumné práce je zaměřena na roli raně a pozdně se asemblujících, jaderně kódovaných, strukturních podjednotek cytochrom c oxidasy (CcO) a Oxa1l, lidského homologu kvasinkové mitochondriální Oxa1 translokasy, v biogenezi cytochrom c oxidasy a její funkci s využitím stabilní RNA interference COX4, COX5A, COX6A1 a OXA1L a ektopické exprese epitopově značených podjednotek Cox6a, Cox7a a Cox7b v buněčné linii HEK (lidské embryonální ledviny)-293. Naše výsledky ukazují, že zatímco podjednotky Cox4 a Cox5a jsou nezbytné pro asemblaci funkčního komplexu CcO, Cox6a podjednotka je důležitá pro její stabilitu. V buňkách se sníženou expresí OXA1L byla překvapivě zjištěna normální aktivita i hladina holoenzymu CcO, přestože inaktivace OXA1 u kvasinek vyvolá kompletní ztrátu aktivity CcO. Při studiu poruch OXPHOS v izolovaných mitochondriích kosterního svalu, srdce, jater a frontálního kortexu získaných od pacientů s Leigh syndromem (mtDNA mutace...
|
|
|
Koncentrace plazmatického cysteinu ve fyziologickém těhotenství a těhotenství s následným rozvojem preeklampsie
Belošovičová, Hana ; Calda, Pavel (vedoucí práce) ; Hyánek, Josef (oponent) ; Kvasnička, Jan (oponent)
Souhrn Cíl: Stanovit hladiny celkového plazmatického cysteinu, homocysteinu, cysteinylglycinu a glutathionu u normotenzních primigravid ve druhém a třetím trimestru a porovnat je s hladinami u těhotných s následným rozvojem preeklampsie. Metodika: Do studie bylo zařazeno 65 zdravých primipar. U každé těhotené byl nabrán vzorek krve v 19.-21. a 30.-32. týdnu těhotenství. Hladiny celkového plazmatického cysteinu, homocysteinu, cysteinylglycinu a glutathionu byly stanoveny HPLC metodou. Hladiny aminothiolů v druhém a třetím trimestru byly porovnány pomocí párového t testu. Hladiny cysteinu u těhotných byly porovnány s hladinami cysteinu u kontrolního souboru netěhotných žen. Výsledky: Hladina celkového plazmatického cysteinu u normotenzních těhotných byla signifikantně nižší ve třetím trimestru v porovnání strimestrem druhým (medián 176.1 |amol/l [163.0, 189.4] versus 187.4 |amol/l [178.7, 205.2], P < 0.001). Hladiny ostatních aminothiolů se nelišily. U třech z 65 těhotných došlo k rozvoji mírné preeklampsie. Hodnoty t-Cys ve třetím trimestru u těhotných s následným rozvojem preeklampsie vykazovaly nárůst nebo menší pokles než u normotenzních těhotných. Závěr: Celkový plazmatický cystein je signifikantně nižší ve třetím trimestru než v trimestru druhém. Tento pokles je pravděpodobně dán spotřebou cysteinu...
|
|
| |
|
|
Monitorování kompenzace u pacientů s cystinurií spektrofotometrickou metodou
Leitner, Martin ; Hyánek, Josef (oponent) ; Chrastina, Petr (vedoucí práce)
Předložená bakalářská práce se zabývá problematikou cystinurie, dědičné metabolické poruchy transportu dibazických aminokyselin. Cílem práce bylo vybrat spektrofotometrickou metodu stanovení cystinu v moči, nalézt nejvhodnější podmínky pro stanovení cystinu v klinické laboratoři a aplikovat metodu na vzorky močí pacientů s cystinurií. Pro stanovení cystinu v moči byla zvolena metoda využívající barevný červenofialový produkt reakce cystinu po redukci na cystein s ninhydrinovým činidlem v kyselém prostředí. Byla změřena absorpční spektra standardu cystinu a moči pacienta s cystinurií s maximem při 560 nm. Byla vyloučena interference ornitinu a dalších aminokyselin. Byla proměřena kinetika redukce cystinu na cystein. Nejvhodnější dobou redukce je 5 minut, při delší době již dochází k oxidaci cysteinu na cystin. Byla proměřena kinetika tvorby barevného produktu. Maxima absorbance při zahřátí reakční směsi s ninhydrinem na 100 řC se dosáhlo po 10 minutách, dále již dochází k degradačním procesům a poklesu absorbance. Byla testována stabilita barevného produktu reakce na světle. Produkt je stabilní po dobu deseti minut, poté dochází k poklesu absorbance po 45 minutách o 8%. Byla ověřena linearita závislosti absorbance barevného produktu reakce na koncentraci cystinu v rozmezí 0 - 834 µmol/l. Byla testována...
|
|
|
The study of mitochondrial biogenesis during fetal development
Pejznochová, Martina ; Zeman, Jiří (vedoucí práce) ; Hyánek, Josef (oponent) ; Brdička, Radim (oponent)
Postnatální adaptace novorozence na extrauterinní prostředí je kromě jiného závislá i na efektivním průběhu mitochondriální biogeneze v období fetálního vývoje. Proto studium mitochondriální biogeneze na molekulárně genetické a biochemické úrovni může přispět k zlepšení péče o předčasně narozené děti, zvláště o kriticky nemocné novorozence. Práce vznikla v Laboratoři pro studium mitochondriálních poruch Kliniky dětského a dorostového lékařství 1.LF UK v Praze a zabývá se molekulárně genetickými analýzami zaměřenými na charakterizaci exprese genů podílejících se na mitochondriální biogenezi včetně genů pro systém oxidativní fosforylace (OXPHOS) a na charakterizaci změn množství mitochondriální DNA v průběhu fetálního vývoje člověka. Získané výsledky umožňují: Efektivní analýzu expresní hladiny mRNA metodou real-time PCR ve fetálních tkáních Kvantifikaci množství mtDNA v různých fetálních tkáních Pochopit a vysvětlit tkáňové specifické rozdíly v expresi OXPHOS genů a genů podílejících se na transkripci mtDNA a regulaci jejího množství v průběhu druhého trimestru gestace
|
host ::
RSS.