|
| |
|
| |
|
|
Reptory spřažené s trimérními G proteiny v membránových doménách
Rudajev, Vladimír ; Svoboda, Petr (vedoucí práce) ; Nováková, Olga (oponent) ; Teisinger, Jan (oponent)
Závér Nďím cilem bylo isolovat frakci plasmatickémembránycharakterisovanoujako lipidové rafý (membránovédomény)a naléá míru asociace receptorůspřažených s trimemími G proteiny (GPCRs) s těmito membránoými strukturami. Pro separaci raftů jsme použilitři různépostupy- detergentovouextrakci,alkalickou preparacise sonikaci a mechanickouhomogenisaci.Zjistilijsme, žepouzeaplikace Tritonu X-l00 vedla k oddělení lipidových raftůod většinovémembrálové fáze.Pro charakterisacihustotníchsacharosov'ých gradientůzískaných z homogenáhr"alkalického čidetergentovéhoextraktu jsme použili celou řadu bílkovin vys\Áujících sepo centrifugaciv oblastechgradientuodpovidajicich sacharosámo nízké(15.25%)i lrysoké(40%)hustotě.Nizkohustotní,detergentresistentní membriínovéfragmený byly charakterisovány přítomnostíproteinůmembrrí'rrovýchdomén caveolinu,flotillinu a GPI vrizanýchalkalickéfosfatasy,cD55' cD58 a CD59, zatímco vysokohustotnígradientovéfrakce obsahovalypřevážnouvětšinuneraftov'ýchproteinůNďK- ATPasy, MHc I' cDl47' calnexinu a transferinovéhoreceptoru.Alkalická extrakceani homogenisacebuněčnéhomateriálunevedlak isolaci membránovýchdoménoddělenýchod nedoménovéfaze plasmatickémembrány. Kromě ruzrrých,'markerov.ých..proteinůjsme analysovalipředevšímgradientové distribucetrimerníchG proteinůGsa, Gqcr/Gl lo, Gil '2a' GB a...
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
|
Charakterizace vazebných míst na intracelulárních koncích TRPC6 receptoru pro kalmodulin a S100A1
Bílý, Jan ; Teisinger, Jan (vedoucí práce) ; Krůšek, Jan (oponent) ; Pavlíček, Jiří (oponent)
Charakterizace vazebných míst pro kalmodulin a S100A1 na intracelulárních koncích TRPC6 receptoru Skupina TRP (transient receptor potential) iontových kanálů je rozsáhlou třídou membránových receptorů. Součástí této skupiny jsou i kanonické kanály TRPC se sekvencí analogickou TRP kanálům poprvé objevených u octomilky (Drosophila melanogaster). Tyto membránové kanály jsou zapojeny do mnoha fyziologických procesů v různých typech buněk a tkání. TRPC6 je neselektivní kationtový kanál, který řídí intracelulární rovnováhu vápenatých iontů eukaryotických buněk (včetně senzorických a receptorových buněk) jako odpověď na vnější podněty. TRPC6 obsahuje vazebnou doménu CIBR (Calmodulin inositol binding region), který je schopen vázat vápník vázající protein S100A1. Cílem práce je charakterizace vazebného místa CIBR lokalizovaného na C intracelulárním konci TRPC6 pro kalmodulin (CaM) a S100A1. Pomocí bodové mutace byl připravený rozpustný proteinový fragment TRPC6 CT (801-878) se záměrně vyměněnými aminokyselinami. V případě některých vybraných bazických aminokyselin (Arg852, Lys856, Lys859, Arg860 a Arg864) nesoucích pozitivní náboj byl měřením anizotropie fluorescence potvrzen jejich vliv a účast na tvorbě komplexu TRPC6 s CaM i S100A1. Obě interakce jsou závislé na přítomnosti Ca2+ iontů. Homologní model...
|
|
|
Localization and characterization of binding sites for Ca2+ binding proteins and phosphatidylinositol phosphates on intracellular termini of TRP channels
Boušová, Kristýna ; Teisinger, Jan (vedoucí práce) ; Žáčková, Markéta (oponent) ; Krůšek, Jan (oponent)
Tato disertační práce pojednává o charakterizaci vazebných míst pro kalcium vázající protein S100A1 a fosfatidylinositol fosfáty na intracelulárních koncích transient receptor potential (TRP) kanálů, a to především z rodin kanonických (TRPC), vaniloidních (TRPV) a melastatinových (TRPM). TRP kanály reprezentují superrodinu důležitých zprostředkovatelů dějů, které se odehrávají především v oblasti senzorické physiologie: přispívají k detekci chuti, rovnováhy těla, zraku, sluchu, hmatu a k sensibilitě vůči teplotním a tlakovým vjemům vnějšího prostředí. Tyto kanály slouží jako specializované neselektivní a nociceptivní membránové receptory zodpovědné za modulaci sil, které řídí vstup kationtů do buňky. TRP kanály jsou tvořeny šesti transmembránovými doménami s N- a C- terminálními konci vyskytujícími se v intracelulární oblasti. Celkem čtyři monomerní jednotky tvoří charakteristické uspořádání funkčního kanálu. Bylo prokázáno, že většina členů této téměř třicetičlenné rodiny transportérů je aktivována různorodými stimuly působícími jako signální integrátory. Z nejvíce prozkoumaných intracelulárních modulátorů TRP kanálů jsou cytosolické kalcium vázající proteiny a fosfatidylinositol fosfáty (PIPs) ukotvené na vnější straně cytoplazmatické membrány. Tyto signální integrátory váží specifické domény v...
|
host ::
RSS.