|
|
Acelulární test genotoxicity komplexních směsí organických látek vázaných na velikostně segregovaných aerosolech.
Fikejzlová, Monika ; Rössner, Pavel (vedoucí práce) ; Machala, Miroslav (oponent)
Hlavním cílem této práce bylo porovnat genotoxicitu organických extraktů z prachových částic různé velikosti (1-10 µm; 0,5-1 µm; 0,17-0,5 µm) odebraných velkoobjemovými kaskádními impaktory ve 4 lokalitách České republiky s různým stupněm znečištění (Březno - povrchový důl, Dobré Štěstí - dálnice, Praha - centrum, Láz - pozaďová stanice). Genotoxicita byla stanovena v acelulárním testu DNA z telecího brzlíku (calf thymus DNA; CT-DNA) s a bez metabolické aktivace S9, analýzou DNA aduktů indukovaných extrahovatelnou organickou hmotou (EOM) z prachových částic (PM) metodou 32 P-postlabeling a schopností extraktů indukovat oxidační poškození DNA, které bylo hodnoceno pomocí testu kompetitivní ELISA. Hlavním závěrem této práce je, že největší podíl na genotoxicitě mají jemné částice (<1 µm). Koncentrace karcinogenních polycyklických aromatických uhlovodíků (k-PAU) v EOM ukazuje, že jemná frakce (0,5-1 µm) váže nejvyšší množství k-PAU ve všech odebíraných lokalitách. Tento fakt může souviset s vyšším měrným povrchem této frakce ve srovnání s hrubou frakcí (1-10 µm) a vyšší hmotností ve srovnání s kondenzační frakcí (0,17-0,5 µm). Jemná frakce i kondenzační frakce jsou účinné nosiče k-PAU. Podobně, hladiny DNA aduktů na m3 vzduchu byly nejvyšší pro jemnou frakci, zatímco u kondenzační frakce (Březno,...
|
|
|
Biotransformace a transport xenobiotik u helmintů
Bártíková, Hana ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Horák, Petr (oponent) ; Machala, Miroslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra biochemických věd Kandidát Mgr. Hana Bártíková Školitel Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název disertační práce Biotransformace a transport xenobiotik u helmintů Infekční nemoci způsobené parazitickými helminty představují závažný problém ohrožující zdraví domácích i volně žijících zvířat a ovlivňující zemědělský průmysl. Léčba helmintóz je založena na podání anthelmintik, z nichž jsou nejdůležitější benzimidazoly. Neracionální používání podobných anthelmintik však vedlo k závažnému problému - ke vzniku rezistence helmintů vůči těmto léčivům. K možným mechanismům vzniku rezistence patří změny ve farmakokinetických procesech (změny v transportu léčiva a zvýšená deaktivace léčiv), ke kterým může přispívat zvýšená aktivita biotransformačních enzymů a transportérů u helmintů. Poznání mechanismů rezistence a obranných strategií parazitů vůči léčivům je nezbytné pro zachování účinnosti současných anthelmintik a vývoj nových přístupů ke kontrole helmintóz. Ačkoli biotransformační enzymy a transportéry helmintů slouží jako obrana před negativním působením xenobiotik, doposud byly poměrně málo studovány. V mé disertační práci jsem se proto v rámci studia obranných strategií helmintů věnovala biotransformačním enzymům,...
|
|
|
Regulation of Human Carbonyl Reductase 3 (CBR3) Expression
Malátková, Petra ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Pávek, Petr (oponent) ; Machala, Miroslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát Mgr. Petra Malátková Školitel Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název disertační práce Regulace exprese lidské karbonylreduktasy 3 (CBR3) Regulace exprese lidské karbonylreduktasy 3 (CBR3) byla až donedávna zcela neznámá a stále není plně objasněna. Transkripční regulace genu úzce souvisí s funkcí proteinu, který kóduje. Proto lze očekávat, že objasnění regulace CBR3 pomůže porozumět fyziologické funkci tohoto enzymu, která dodnes zůstává záhadou. Promotor genu CBR3 byl popsán v roce 2009. CBR3 promotor obsahuje několik potenciálních vazebných míst pro různé transkripční faktory. V roce 2010 jsme prokázali, že exprese CBR3 je regulována signální dráhou Nrf2/ARE. Šlo o první studii popisující transkripční regulaci CBR3. Zapojení Nrf2 do regulace CBR3 bylo nedávno potvrzeno studií jiného výzkumného týmu. Funkční antioxidační responzivní element (ARE) se nachází 2698 párů bází proti směru iniciace translace CBR3 (−2698ARE). Analýza promotoru CBR3 o délce 2500 párů bází nicméně naznačila přítomnost cis- regulačního elementu v sekvenci mezi 2500 a 500 párů bází proti směru transkripce. Zdá se tedy, že i jiný responzivní element než −2698ARE může regulovat CBR3. Protože promotor genu CBR3 obsahuje...
|
|
|
Faktory ovlivňující metabolismus anthelmintik
Forstová, Veronika ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Machala, Miroslav (oponent) ; Chládek, Jaroslav (oponent)
Souhrn Terapie anthelmintiky je v současné době hlavní metodou v boji s parazitickými červy. Anthelmintika, stejně jako ostatní xenobiotika, v organismu podléhají účinkem biotransformačních enzymů strukturálním změnám, kdy se z látek lipofilních stanou látky polární, snáze vyloučitelné z organismu. Biologický účinek metabolitů a parentní látky je obecně odlišný. Aktivita biotransformačních enzymů je tedy stěžejním faktorem, který určuje rychlost detoxikace a eliminace látky z organismu a tedy i délku účinku léčiv. Ovlivnění aktivit biotransformačních enzymů (modulace) může vést ke změně farmakokinetických parametrů léčiva samého i dalších xenobiotik a tím i k nebezpečí snížení žádoucího účinku a/nebo zvýšení nežádoucích učinků s příslušnými dopady na kvalitu léčby. U hospodářských zvířat je navíc nutno brát v úvahu i možné riziko výskytu reziduí léčiv v živočišných produktech. Biotransformaci xenobiotik ovlivňuje řada faktorů fyziologických i patologických. Tyto faktory lze rozčlenit na inter-individuální (druh, pohlaví, genetický polymorfismus) a intra-individuální (věk, výživa, medikace, onemocnění, atd.). Všechny tyto faktory způsobují obrovskou variabilitu v zastoupení a aktivitě biotransformačních enzymů a jsou příčinou velkých rozdílů v biotransformaci xenobiotik u různých jedinců. Variabilita v...
|
|
|
Oxidative damage by organic extracts from urban air particulate matter
Hanzalová, Kateřina ; Rössner, Pavel (vedoucí práce) ; Machala, Miroslav (oponent)
The aim of this master thesis was to investigate the ability of selected individual carcinogenic polycyclic aromatic hydrocarbons (c-PAHs: benzo[a]pyrene, B[a]P; dibenzo[a,l]pyrene, DB[a,l]P), an artificial mixture of c-PAHs (c-PAH mix) and extractable organic matter (EOM) from urban air particulate matter (PM) to induce oxidative damage in vitro. Two cell lines (human hepatoma cells, HepG2, and human diploid lung fibroblasts, HEL) were treated for 24 h and 48 h with various concentrations of compounds or mixtures. The studied oxidative stress markers included 8-oxodeoxyguanosine (8-oxodG) as a marker of oxidative DNA damage, 15-F2t-isoprostane (15-F2t-IsoP) as a marker of lipid peroxidation and protein carbonyl groups as a marker of oxidative damage to proteins. The response of the cell lines to the tested compounds and mixtures differed substantially. In summary the results demonstrate the ability of EOM to induce oxidative damage to DNA and lipids after 24 h of treatment and to proteins after 48 h, in HepG2 cells. The effect of c-PAHs was substantially less. The induction of oxidative damage by c- PAHs and EOM in HEL cells was weak. Since c-PAHs had lower ability to cause oxidative damage that was limited only to longer incubation periods, it is probable that other components of EOM are responsible for...
|
|
|
Metabolismus anthelmintik u helmintů
Cvilink, Viktor ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Holčapek, Michal (oponent) ; Machala, Miroslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Viktor Cvilink Školitel: Doc. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Název disertační práce: METABOLISMUS ANTHELMINTIK U HELMINTŮ Terapie anthelmintiky je v současné době hlavní metodou v boji s parazitickými červy. Znalost a pochopení detoxikačních systémů, kterými tyto organismy disponují a které jsou jimi využívány k obraně proti působení xenobiotik, jsou důležité pro porozumění pochodům ovlivňujícím hladinu léčiva v těle parazita a rozhodujícím tak o výsledku anthelmintické léčby. Nedosažení efektivní koncentrace léčiva v organismu parazita nevyhnutelně vede ke snížení účinnosti léčby, může vést k indukci přítomných biotransformačních enzymů parazita a vyústit ve vznik rezistence vůči podávanému léčivu. Biotransformační enzymy helmintů jsou však doposud jen málo prostudovány a často je nezřejmé, zda je jimi daný druh vůbec vybaven a zda je dovede v tomto ohledu využít. V předkládané práci bylo naším cílem popsat biotransformační cesty vybraných anthelmintik ve vybraných druzích helmintů, identifikovat vytvářené metabolity a charakterizovat biotransformační enzymy zkoumaných parazitů. Pozornost jsme zaměřili na dva druhy helmintů, vlasovku slézovou (Haemonchus contortus) a motolici kopinatou...
|
|
| |
host ::
RSS.