|
|
Modifikace kapilární stěny grafenem pro separační aplikace
Ptáčková, Aneta ; Lochman, Lukáš (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
UNIVERZITA KARLOVA FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Aneta Ptáčková Školitel: PharmDr. Lukáš Lochman, Ph.D. Název diplomové práce: Modifikace kapilární stěny grafenem pro separační aplikace Kapilární elektroforéza (CE) je vysoce účinná separační metoda. Látky se rozdělují na základě jejich odlišné pohyblivosti v elektrickém poli. Uspořádání měření CE lze upravit různými způsoby, např. kapilární elektrochromatografie nebo micelární elektrokinetická kapilární chromatografie. Předpokládá se, že modifikace vnitřní stěny kapiláry pomůže zlepšit separační účinnost a selektivitu. Grafen je uhlík s hexagonálním dvoudimenzionálním uspořádáním atomů v hybridizaci sp2. Grafen se jeví jako vhodný materiál pro separační aplikace díky svým vynikajícím vlastnostem jako je např. velký povrch a afinita k aromatickému kruhu pomocí π-π interakcí. Naše práce je zaměřena na modifikaci kapilární stěny grafenem. Jednou z metod je modifikace kapilární stěny metodou Layer-by-Layer neboli vrstvením různě nabitých látek pomocí elektrostatických sil. Další metodou je chemická cesta využívající kovalentní interakce. Pro modifikaci povrchu byly použity různé polymery a grafen. Separační účinnost a selektivita modifikovaných kapilár byla sledována na modelových...
|
|
|
Studium vhodnosti α-bromfenyloctové kyseliny jako modelového analytu pro chirální separace s využitím kapilární elektroforézy II
Bubáková, Zuzana ; Jáč, Pavel (vedoucí práce) ; Lochman, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Zuzana Bubáková Školitel: PharmDr. Pavel Jáč, Ph.D. Název diplomové práce: Studium vhodnosti α-bromfenyloctové kyseliny jako modelového analytu pro chirální separace s využitím kapilární elektroforézy II V publikaci od Rizviho a Shamsiho (Rizvi S.A.A., Shamsi S. A. Anal. Chem. 2006, 78(19), 7061-7069) byla α-bromfenyloctová kyselina (BPAA), rozpuštěná v 50% methanolu (v/v), použita jako modelový analyt pro chirální separace za využití kapilární elektroforézy (CE). Stabilita BPAA ve vodném methanolickém rozpouštědle je však diskutabilní (Kováčová G. 2018. Diplomová práce. Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta). Cílem této práce bylo určení řádu rozkladné reakce BPAA (c = 0,47 mM) v 50% methanolu (v/v). Studie reakční kinetiky byla provedena pomocí kapilární elektroforézy v kapiláře pokryté polyvinylalkoholem (50 µm vnitřní průměr; 30 cm/24,5 cm). BPAA a produkty nukleofilní substituce (kyselina mandlová, kyselina α-methoxyfenyloctová a Br-) byly analyzovány v 60 mM mravenčanovém pufru (pH 3,0) při -30 kV; UV detekce byla 200 nm. Kinetika prvního řádu byla pro tuto rozkladnou reakci potvrzena metodou lineární a nelineární regrese, s hodnotami rychlostních konstant 1,52×10-4 ± 2,76×10-5 s-1 a 7,89×10-5...
|
|
|
Kvantitativní analýza inhibitorů tyrozinkinázy metodou kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí
Maier, Jan ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Lochman, Lukáš (oponent)
Předložená diplomová práce je věnována kvantitativnímu stanovení inhibitorů tyrozinkinázy, konkrétně imatinibu a nilotinibu, metodou kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí. Za účelem sledování hladin těchto léčivých látek v séru či plazmě zejména pacientů s chronickou myeloidní leukémií, v menší míře pak pacientů s gatrointestinálním stromálním tumorem, byla na Ústavu klinické biochemie a diagnostiky Fakultní nemocnice v Hradci Králové vyvinuta nová metoda pro jejich stanovení a monitorování. Hlavním úkolem v souladu s vypracováváním diplomové práce bylo metodu plně optimalizovat a validovat. Tato metoda pro stanovení inhibitorů tyrozinkinázy byla na pracovišti nejdříve prováděná pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie se spektrofotometrickou (UV) detekcí. V rámci modernizace laboratorní technologie se postupem času přešlo na metodu prováděnou pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí. Analyty s jejich vnitřními standardy byly nejprve zpracovány extrakčním postupem kapalina-kapalina, poté byly isokraticky separovány na koloně C18 s reverzní fází. Následně byly oba analyty detekovány s využitím tandemové hmotnostní spektrometrie typu trojitého kvadrupólu s ESI iontovým zdrojem v pozitivním módu. V rámci validace metody byla ověřena její preciznost a správnost,...
|
|
|
Testování potenciálního využití chirálních iontových kapalin s dlouhým řetězcem pro chirální separace v kapilární elektroforéze II
Müllerová, Kateřina ; Jáč, Pavel (vedoucí práce) ; Lochman, Lukáš (oponent)
Katedra: Katedra analytické chemie Kandidát: Kateřina Műllerová Školitel: PharmDr. Pavel Jáč, Ph.D Název diplomové práce: Testování potenciálního využití chirálních iontových kapalin s dlouhým řetězcem pro chirální separace v kapilární elektroforéze II Chirální iontová kapalina (−)-N-dodecyl-N-methylephedrinium bromid (DMEB) byla testována jako selektor pro chirální separace vybraných léčiv (chinolonová antibiotika, ketoprofen a flurbiprofen) pomocí kapilární elektroforézy (CE). Byl zkoumán vliv několika parametrů na enantioseparaci: (i) typ a pH pufru, (ii) typ a množství organického modifikátoru a (iii) koncentrace DMEB. Při použití tohoto chirálního selektoru byla pozorována enantioseparace pouze u ofloxacinu, u zbylých chirálních léčiv separace za daných podmínek neproběhla. Jako další krok byla vyvinuta CE metoda pro stanovení levofloxacinu, aby bylo možné předvést potenciál DMEB jako chirálního selektoru v kontrole kvality chirálně čistých léčiv. Nejlepší separace bylo dosaženo se základním elektrolytem o složení: 20mM trizmový pufr o pH 8,5 se 100 mM DMEB a 20 % (v/v) acetonitrilu. Separace probíhala v křemenné kapiláře (80,5 cm / 72 cm) s vnitřním průměrem 50 µm při −30 kV s UV detekcí při 291 nm. Rozlišení mezi píky S- a R-ofloxacinu bylo 4,22 ± 0,02 (n = 3). Linearita metody byla...
|
|
|
The employment of HPLC for separation of bioconjugates of azaphthalocyanines II.
Sčensná, Anna ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Lochman, Lukáš (oponent)
6 ABSTRAKT Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát Anna Sčensná Školiteľ doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Názov diplomovej práce Použitie HPLC pre separáciu biokonjugátov azaftalocyanínov II Biokonjugáty azaftalocyanínov sú študované ako tzv. dark quenchers v molekulárnych sondách, v ktorých sú použité pre monitorovanie "real-time" PCR. Princíp detekcie je založený na prenose energie medzi fluorofórom a zhášačom, ktoré sú naviazané na oligonukleotidový reťazec. Fluorofór emituje žiarenie, ktoré tmavý zhášač pohltí. Účinnosť procesu zhášania žiarenia závisí na vzdialenosti medzi fluorofórom a zhášačom. Dostupné sú jednoducho značené sondy, v ktorých sa používajú dva oligonukleotidové reťazce. Jeden z nich je pripojený k fluorofóru a ten druhý k zhášaču. Druhým typom sú dvojito značené sondy, ktoré na jednom oligonuklotidovom reťazci majú naviazaný fluorofór a na opačnom konci zhášač. Nenaviazaná oligonukleotidová sonda je náhodne stočená, a teda fluorofór a zhášač sa k sebe priblížia. Žiarenie nie je emitované. Po hybridizácií s komplementárnym oligoniklotidovým reťazcom sa zhášač a fluorofór od seba oddialia. U sond typu Taq-man dochádza po hybridizácií k odštiepeniu terminálneho nukleosidu zo 5', ktorý nesie...
|
|
|
Biosenzory pro testování inhibitorů cholinesteras
Keresteš, Ondřej ; Kučerová, Marta (vedoucí práce) ; Lochman, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Student: Bc. Ondřej Keresteš Vedoucí práce: PharmDr. Marta Kučerová, Ph.D. Konzultant: pplk. prof. RNDr. Miroslav Pohanka, Ph.D., DSc. Název diplomové práce: Biosenzory pro testování inhibitorů cholinesteras Acetylcholinesterasa (AChE, EC 3.1.1.7) štěpí acetylcholin v nervovém systému. Vazba acetylcholinu na receptor a následné hydrolytické štěpení v centrálních synapsích nebo na nervosvalových ploténkách umožňuje opakovaný přenos nervového vzruchu. Tím je zabezpečen vědomý pohyb a optimální kognitivní schopnosti člověka. Při styku AChE s inhibitorem dojde k jejímu zablokování, tedy ke zhoršení kognitivních funkcí a zasaženého postihnou křeče, při delší expozici může nastat smrt. Cílem práce bylo otestovat různé přístupy v měření aktivity AChE inhibované fyzostigminem a takrinem. Dalším cílem byla příprava biosenzorů pomocí vybraných imobilizačních technik. Vyzkoušeny byly tři postupy imobilizace - dva s použitím elektrochemických detektorů, kdy byla cílem optimalizace metody stanovení aktivity AChE měřením rozdílu pH (AChE kotvena v chitosanové membráně), nebo chronoamperometricky (AChE sorbována na tištěné elektrodě). Třetí zkoumanou cestu zahrnovala imobilizace AChE na magnetické...
|
|
|
Studium vhodnosti α-bromfenyloctové kyseliny jako modelového analytu pro chirální separace s využitím kapilární elektroforézy II
Bubáková, Zuzana ; Jáč, Pavel (vedoucí práce) ; Lochman, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Zuzana Bubáková Školitel: PharmDr. Pavel Jáč, Ph.D. Název diplomové práce: Studium vhodnosti α-bromfenyloctové kyseliny jako modelového analytu pro chirální separace s využitím kapilární elektroforézy II V publikaci od Rizviho a Shamsiho (Rizvi S.A.A., Shamsi S. A. Anal. Chem. 2006, 78(19), 7061-7069) byla α-bromfenyloctová kyselina (BPAA), rozpuštěná v 50% methanolu (v/v), použita jako modelový analyt pro chirální separace za využití kapilární elektroforézy (CE). Stabilita BPAA ve vodném methanolickém rozpouštědle je však diskutabilní (Kováčová G. 2018. Diplomová práce. Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta). Cílem této práce bylo určení řádu rozkladné reakce BPAA (c = 0,47 mM) v 50% methanolu (v/v). Studie reakční kinetiky byla provedena pomocí kapilární elektroforézy v kapiláře pokryté polyvinylalkoholem (50 µm vnitřní průměr; 30 cm/24,5 cm). BPAA a produkty nukleofilní substituce (kyselina mandlová, kyselina α-methoxyfenyloctová a Br-) byly analyzovány v 60 mM mravenčanovém pufru (pH 3,0) při -30 kV; UV detekce byla 200 nm. Kinetika prvního řádu byla pro tuto rozkladnou reakci potvrzena metodou lineární a nelineární regrese, s hodnotami rychlostních konstant 1,52×10-4 ± 2,76×10-5 s-1 a 7,89×10-5...
|
|
|
Studium rozpoznávacích částí senzorických azaftalocyaninů
Lochman, Lukáš ; Nováková, Veronika (vedoucí práce) ; Musílek, Kamil (oponent) ; Kubát, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Mgr. Lukáš Lochman Školitel: Doc. PharmDr. Veronika Nováková, Ph.D. Konzultant: Doc. PharmDr. Petr Zimčík, Ph.D. Disertační práce: Studium rozpoznávacích částí senzorických azaftalocyaninů Azaftalocyaniny (AzaPc) jsou planární makrocyklické látky s unikátními fotofyzikálními vlastnostmi, jako jsou absorpce a emise nad 650 nm a vysoké kvantové výtěžky fluorescence. U alkylamino substituovaných AzaPc byl objeven jev zvaný intramolekulární přenos náboje (ICT), který je zodpovědný za účinné zhášení excitovaných stavů (nefluorescentní OFF stav). ICT probíhá mezi donorem (periferní amin) a akceptorem (makrocyklické jádro). Pokud zablokujeme probíhající ICT, dojde k obnovení kompetitivní relaxační cesty formou silné emise fluorescence (fluorescentní ON stav). ICT v AzaPc lze blokovat dvěma způsoby: Protonizací donoru, kterého se využívá u pH-senzitivních AzaPc senzorů, nebo koordinací kationtu kovu do rozpoznávací části typické pro AzaPc senzory citlivé ke kationtům kovu. Výše zmíněné vlastnosti předurčují AzaPc, aby se staly novými fluorescenčními senzory s dobrou svítivostí a výhodnou absorpcí a emisí červeného světla, které může pronikat hluboko do tkání díky nízké...
|
|
|
Studium rozpoznávacích částí senzorických azaftalocyaninů
Lochman, Lukáš ; Nováková, Veronika (vedoucí práce) ; Musílek, Kamil (oponent) ; Kubát, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Mgr. Lukáš Lochman Školitel: Doc. PharmDr. Veronika Nováková, Ph.D. Konzultant: Doc. PharmDr. Petr Zimčík, Ph.D. Disertační práce: Studium rozpoznávacích částí senzorických azaftalocyaninů Azaftalocyaniny (AzaPc) jsou planární makrocyklické látky s unikátními fotofyzikálními vlastnostmi, jako jsou absorpce a emise nad 650 nm a vysoké kvantové výtěžky fluorescence. U alkylamino substituovaných AzaPc byl objeven jev zvaný intramolekulární přenos náboje (ICT), který je zodpovědný za účinné zhášení excitovaných stavů (nefluorescentní OFF stav). ICT probíhá mezi donorem (periferní amin) a akceptorem (makrocyklické jádro). Pokud zablokujeme probíhající ICT, dojde k obnovení kompetitivní relaxační cesty formou silné emise fluorescence (fluorescentní ON stav). ICT v AzaPc lze blokovat dvěma způsoby: Protonizací donoru, kterého se využívá u pH-senzitivních AzaPc senzorů, nebo koordinací kationtu kovu do rozpoznávací části typické pro AzaPc senzory citlivé ke kationtům kovu. Výše zmíněné vlastnosti předurčují AzaPc, aby se staly novými fluorescenčními senzory s dobrou svítivostí a výhodnou absorpcí a emisí červeného světla, které může pronikat hluboko do tkání díky nízké...
|
|
|
Syntéza azaftalocyaninů s fotofyzikálními vlastnostmi citlivými ke kationtům kovů.
Lochman, Lukáš ; Zimčík, Petr (vedoucí práce) ; Doležal, Martin (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Kandidát Lukáš Lochman Školitel Doc. PharmDr. Petr Zimčík, PhD. Konzultant PharmDr. Veronika Nováková, PhD. Název diplomové práce Syntéza azaftalocyaninů s fotofyzikálními vlastnostmi citlivými ke kationtům kovů Azaftalocyaniny (AzaPc) jsou makrocyklické planární sloučeniny se zajímavými fotofyzikálními a fotochemickými vlastnostmi. Obvykle absorbují světlo nad 650 nm a vykazují vysoké kvantové výtěžky fluorescence a singletového kyslíku. Nicméně, nedávno bylo zjištěno, že zavedení alespoň jedné alkylaminové skupiny na periferii AzaPc sníží kvantové výtěžky k nule díky intramolekulárnímu přenosu náboje (ICT). Tato vlastnost byla využita v diplomové práci pro přípravu fluorescenčního senzoru pro kationty kovů. Detekce kationtů byla založena na blokování donoru ICT koordinací kovového kationtu, čímž dojde k nárůstu fluorescence. Struktura finálního AzaPc byla navržena s šesti objemnými terc-butylsulfanylovými skupinami, které slouží jako antiagregační část. Substituent odvozený od 1-aza-15-crown-5 je vhodný pro koordinaci (detekci) sodných a draselných iontů. Příprava příslušně 5,6-disubstituovaných pyrazin-2,3-dikarbonitrilů (A a B), prekurzorů AzaPc, byla provedena metodou...
|
host ::
RSS.