|
|
Vývoj a optimalizace separace oligonukleotidů s využitím nového přístupu recyklační HPLC
Holoubková, Barbora ; Minárik, Marek (vedoucí práce) ; Tesařová, Eva (oponent)
1 Abstrakt Separace biologicky významných látek zahrnující proteiny, peptidy a nukleové kyseliny se v posledních letech staly významnou oblastí aplikací pro různé módy vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Jednou z nich je preparativní separace s cílem izolace čistých produktů syntézy oligonukleotidů. Tyto mají v oblasti současné vědecké i komerční sféry zcela zásadní význam. Hrají nezastupitelnou roli v podobě krátkých sekvencí (primerů či sond) pro celou řadu molekulárních metod zahrnujících polymerázovou řetězovou reakci (PCR), DNA sekvenování, detekci patogenů pomocí specifické hybridizace a podobně. Příprava dokonale přesných a čistých oligonukleotidů bývá často zcela zásadní pro úspěšnost těchto metod, proto velmi záleží na účinnosti izolace cílové sekvence od neúplných produktů syntézy či dalších nechtěných příměsí. Současné postupy zahrnují mimo jiné i preparativní chromatografii, avšak nezřídka kdy mívají standardně používané postupy nedostatečné rozlišení. Koncept recyklační chromatografie, kdy jsou analyty po výstupu z kolony navráceny zpět pro opakovaný průchod kolonou, a tím je zlepšeno jejich rozlišení, je znám od 60 let. V poslední době byl však představen zcela nový koncept, tzv. systému Repetto, kdy jsou segmenty separované směsi sekvenčně vraceny zpět na kolonu bez nutnosti průchodu...
|
host ::
RSS.