|
|
Rekombinantní exprese a purifikace nitrilasy z Neurospora crassa
Zawadová, Dorota ; Vaněk, Ondřej (vedoucí práce) ; Kavan, Daniel (oponent)
Nitrilasy jsou enzymy schopné transformovat toxické nitrilové sloučeniny na příslušné karboxylové kyseliny nebo amidy. Jsou proto jsou potencionálně využitelné při detoxikaci barviv, herbicidů nebo látek používaných při přípravě léčiv. Jejich dalším uplatněním může být enzymatická výroba karboxylových kyselin, u kterých je postup přípravy neenzymatickou cestou drahý nebo příliš náročný. Náplní této diplomové práce je rekombinantní exprese a optimalizace purifikace nitrilas pocházejících z vláknité houby Neurospora crassa. Jako expresní systém, do kterého byla vnesena sekvence genu kódující tento enzym, byly použity buňky E. coli BL 21 Gold. Purifikace byla provedena v redukujícím prostředí za pomoci chromatografie na iontoměniči, chelatační chromatografie a gelové filtrace. Připravené enzymy byly charakterizovány pomocí sedimentační analýzy v analytické ultracentrifuze, dále pak byly použity pro hledání podmínek krystalizace. Klíčová slova: nitrilasa, Neurospora crassa, rekombinantní exprese
|
host ::
RSS.