|
Molekulární patologie akutní intermitentní porfyrie
Hrdinka, Matouš
Molekulární patologie akutní intermitentní porfyrie Autor: Matouš Hrdinka Akutní intermitentní porfyrie (AIP) je autozomálně dominantní dědičné onemocnění způsobené částečným chyběním porfobilinogen deaminázy (PBGD), třetího enzymu v biosyntetické dráze hemu. AIP se projevuje život ohrožujícími akutními neurologickými atakami, které mohou být vyvolány řadou vnějších faktorů, jako jsou léky nebo alkohol. Cílem této studie bylo popsat molekulární podstatu AIP u českých a slovenských pacientů. Mutace v genu pro PBGD byly identifikovány pomocí metody PCR, denaturační gradientové elektroforézy (DGGE), sekvenace a restrikční analýzy (RFLP). Celkem byla vyšetřena DNA 35 pacientů a asymptomatických osob z 8 rodin. Bylo identifikováno 7 různých mutací, z nichž byly 3 nové doposud nepopsané. Zvláštním případem byl pacient se dvěma mutacemi, R173Q a Q204K, lokalizovanými v jedné alele 10. exonu genu pro PBGD. Abychom dále charakterizovali nalezené mutace, gen pro lidskou PBGD byl vložen do pGEX-4T-1 vektoru pro bakteriální expresi a mutace byly připraveny místně specifickou mutagenezí. Nemutovaná a mutované formy PBGD zfůzované s GST proteinem byly poté exprimovány v E. coli a purifikovány afinitní chromatografií. Byly stanoveny podmínky pro měření enzymatické aktivity PBGD a byla určena specifická aktivita,...
|
host ::
RSS.