|
|
Využití kapilární elektroforézy pro stanovení vybrané skupiny flavonoidů
Tran Xuan, Tiep ; Mravcová, Ludmila (oponent) ; Řezáčová, Veronika (vedoucí práce)
V posledních letech se znovu dostalo do popředí zájmu široké veřejnosti užívání přírodních léčivých vlastností rostlin. Tyto léčivé rostliny se pro své terapeutické vlastnosti běžně využívají v alternativních metodách léčby u méně závažných onemocnění. Tato diplomová práce se zabývá stanovováním polyfenolových kyselin v extraktech z aronie, třapatkovky, migrénovníku a pupečníku. Jedním z cílů diplomové práce bylo srovnat množství polyfenolových kyselin v jednotlivých rostlinách s jejich s antioxidačními vlastnostmi. Teoretická část zahrnuje obecné představení flavonoidů, uvedení do problematiky polyfenolových kyselin, představení principů kapilární zónové elektroforézy a souhrn vybraných zahraničních studií pro stanovení flavonoidů. Důležitou kapitolou teoretické části je popis jednotlivých rostlin s vysvětlením jejich možného terapeutického využití. Experimentální část se věnuje procesu optimalizace elektroforetického stanovení vybraných polyfenolových kyselin a vyhodnocení jejich obsahu. Bylo zjištěno, že v extraktech se šest zástupců polyfenolových kyselin vyskytuje v minimálních množství, často pod limitem kvantifikace či detekce metody.
|
|
|
Vícerozměrné separace v kapalné fázi
Šesták, Jozef ; Čáslavský, Josef (oponent) ; Pulkrabová, Jana (oponent) ; Česla, Petr (oponent) ; Kahle, Vladislav (vedoucí práce)
Dizertační práce se zabývá problematikou vícerozměrných separací v kapalné fázi. Tyto separační techniky jsou vyvíjeny ve snaze splnit současné požadavky kladené na analýzu velmi složitých vzorků, jejichž komponenty jsou teplotně nestálé, mají nízkou tenzi par nebo vysokou molekulovou hmotnost a nelze je analyzovat s využitím dvourozměrné (2D) plynové chromatografie. V teoretické části práce jsou vysvětleny koncepty píkové kapacity a ortogonality. Vysokoúčinná kolonová kapalinová chromatografie (HPLC) a vysokoúčinná kapilární elektroforéza (HPCE) jsou zde chápány jako nejvhodnější jednorozměrné kapalinově-separační techniky pro realizaci vícerozměrných separací v kapalné fázi, jelikož s nimi lze realizovat automatizované provedení vícerozměrné separace navíc s možností on-line spojení s hmotnostní spektrometrií. V experimentální části je popsána konstrukce zjednodušeného miniaturizovaného kapalinového chromatografu. Původní koncept byl rozšířen o možnosti přípravy gradientů mobilní fáze. Funkce systému byla demonstrována na gradientové separaci směsi alkylfenonů, peptidů z tryptického digestu BSA a směsí nitrolátek. Popsaný LC systém byl použit jako základ několika dvourozměrných separačních platforem. Realizována byla HILIC-MALDI-MS analýza glykanů, dvourozměrná separace peptidů z tryptického digestu BSA využívající off-line spojení kapilární izoelektrické fokusace s vyvinutým gradientovým miniaturizovaným LC systémem a platforma umožňující realizaci on-line dvourozměrné kapalinové chromatografie v módech IEC×RPLC, RPLC×RPLC a HILIC×RPLC. Prezentované výsledky podporují správnost uvažovaného konceptu.
|
|
|
Vliv zpracování kávy na obsah kofeinu a jeho účinky na lidský organismus
Odehnalová, Barbora
Tato diplomová práce se zaměřuje na porovnání obsahu kofeinu v kávě zpracované různými způsoby. Jde o suché a mokré zpracování, kdy jsou v prvním zmíněném případě zrna kávy po sběru a vytřízení sušena na slunci na ideální vlhkost. U mokré metody se káva nechává v kádích s přidanými mikroorganismy fermentovat a následně sušit. Součástí práce jsou i účinky kofeinu na lidský organismus.
|
|
|
Detekce nukleových bazí pomocí kapilární elektroforézy
Hendrychová, Kateřina
Kapilární elektroforéza (CE) je jednou z nejvýznamnějších technik používaných k vysoce výkonným separacím v moderní analytické chemii. Mezi její hlavní výhody patří možnost použití různých detekčních technik, rychlost a účinnost separace či reprodukovatelnost. Tyto vlastnosti se využívají při separaci nejrůznějších analytů od anorganických iontů až po nano částice a byly ověřeny i v této bakalářské práci, kde byly pomocí kapilární elektroforézy s UV detektorem separovány základní stavební kameny DNA a RNA – nukleové báze, které slouží jako biomarkery mnoha poruch, onemocnění i jako indikátory bezpečnosti potravin. Bakalářská práce je zaměřena na vývoj a optimalizaci metody k detekci a separaci 5 nukleových bází a purinu. Separace se podařilo docílit použitím 40 mM borátového pufru o pH 9,8 s přídavkem 60 mM SDS jako detergentu, který tvoří micely.
|
|
|
Fluorescenční sondy pro detekci sacharidů a glykovaných proteinů pomocí kapilární elektroforézy
Kozáková, Silvie
Glykovaný albumin (gHSA) a glykovaný hemoglobin (HbA1c) představují významné biomarkery pro určení progrese onemocnění diabetes mellitus. Cílem této diplomové práce bylo vyvinout a optimalizovat metodu pro simultánní stanovení těchto glykovaných proteinů z lidské krve pomocí kapilární elektroforézy s využitím fluorescenční sondy ABAM (anthracene boronic acid methacrylate). Díky této nové metodě bylo možné selektivně stanovit zmíněné dva proteiny s rozlišením 5,70 a LOD 11,9 µg/ml pro gHSA a 26,5 µg/ml pro HbA1c. Následně byla optimalizovaná metoda úspěšně aplikována na reálný vzorek lidské krve. Současné stanovení těchto biomarkerů může pomoci lépe sledovat dynamické změny v průběhu onemocnění a umožnit monitoring diabetu i u jedinců, u kterých je stanovení HbA1c ze zdravotních důvodů (anémie apod.) nevhodné.
|
|
|
Vývoj nové technologie detekce DNA mutací pro využití v onkologické diagnostice
Janoušková, Kristýna ; Minárik, Marek (vedoucí práce) ; Klepárník, Karel (oponent)
Cílem této diplomové práce bylo otestovat novou technologii detekce DNA mutací a optimalizovat parametry související se zavedením nové metody, která tuto technologii využívá, do onkologické diagnostické praxe. Nová metoda spočívá v experimentální modifikaci již používané metody pro detekci somatických mutací v nádorové DNA, která je založena na heteroduplexní analýze a denaturační kapilární elektroforéze. Novým aspektem je využití specifické sondy, krátkého oligonukleotidu, jehož použití výrazně zjednodušuje interpretaci data a nově také umožňuje současné vyšetření více mutací v jedné reakci (multiplexy). Klíčová slova: DNA, denaturační kapilární elektroforéza, heteroduplex, mutace, PCR, sonda
|
|
|
On-line derivatizace sacharidů v kapilární elektroforéze
Mareš, Vít ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
Sacharidové řetězce glykoproteinů mohou podléhat různým chybám při jejich bi- osyntéze, které ovlivňují jejich biologické funkce, proto jich může být využito v diagnóze některých onemocnění nebo kontrole kvality biofarmaceutik, konkrét- ně monoklonálních protilátek, které také obsahují tetramerní glykoproteiny. Při diagnóze těchto poruch má potencionální využití kapilární elektroforéza. V této práci byla vyvíjena metoda on-line derivatizace sacharidů v křemenné kapiláře o délce 50 cm a o vnitřním průměru 50 µm. Jako modelová molekula byla použita glukóza, která byla značena fluorescenčním derivatizačním činidlem, 7-aminonaftalen-1,3-disulfonovou kyselinou. Metodu derivatizace glukózy a její separaci bylo potřeba optimalizovat. Nejprve byla zjištěna elektroforetická po- hyblivost derivatizačního činidla v 0,5; 1,0 a 2,5M koncentracích kyseliny octové a v 20mM fosfátovém pufru, pH = 3,5. Jako rozpouštědlo pro 7-aminonaftalen- 1,3-disufonovou kyselinu byly vyzkoušeny 2,5M kyselina octová i 20mM fosfátový pufr se záměrem sjednotit reakční a separační prostředí, což se ukázalo jako ne- realizovatelné. Byly zjištěny efektivní pohyblivosti ve zmíněných roztocích. Nej- lépe probíhala reakce s glukózou v prostředí kyseliny octové. Pro separaci bylo zjištěno, že nejvhodnějším základním elektrolytem je naopak...
|
|
|
Stanovení glutathionu v rostlinných vzorcích pomocí kapilární elektroforézy
Skála, Michael ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Tato práce vychází z dříve publikované metody pro stanovení obou forem glutathionu pomocí kapilární zónové elektroforézy opatřené UV spektrometrickým detektorem. Teoretická část popisuje biologické a biochemické funkce glutathionu. Dále teoretická část shrnuje historické metody stanovení glutathionu, jejich přesnost, správnost a spolehlivost se speciálním zaměřením na metody elektroforetické, a zvláště pak na kapilární zónovou elektroforézu. Je popsán princip kapilární zónové elektroforézy. Také řeší problematiku různých typů vzorků, speciálně pak rostlinné vzorky. Na závěr uvádí metodu pro stanovení redukované a oxidované formy glutathionu, ze které tato práce vychází. V praktické části je popsán postup vývoje a optimalizace samotné metody. Nejprve bylo testováno složení základního elektrolytu, jeho iontová síla, byly porovnávány dva elektrolyty - s NaCl a bez NaCl, byly pozorovány minimální rozdíly, proto byl NaCl ze základního elektrolytu vyloučen. Dále byla určována optimální koncentrace hexadimethrin bromidu. Byl sledován vliv koncentrace hexadimethrin bromidu na rychlost elektroosmotického toku. Byla sestavena kalibrační křivka pro různé koncentrace analytů ve vodě, byla zjištěna opakovatelnost, LOD a LOQ. Následně byla určována pozice píků v elektroferogramech reálného vzorku extraktu z...
|
|
|
Modifikace vnitřního povrchu kapilár pro elektroforetické separace liposomů
Píplová, Renata ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Čokrtová, Kateřina (oponent)
Elektroosmotický tok je jedním z hlavních faktorů, jež ovlivňují rozlišení separací v kapilární elektroforéze a často je nutná jeho modifikace. Jedním ze způsobů modifikace elektroosmotického toku je dynamické nebo permanentní pokrývání vnitřního povrchu kapiláry. Při separacích liposomů může taková modifikace navíc zmírnit jejich tendenci adsorbovat se na povrch kapiláry. Cílem práce bylo najít stabilní pokrytí, které bude dostatečně eliminovat elektroosmotický tok a otestovat jeho vliv na separace liposomů. Nejprve bylo testováno dynamické pokrytí kapiláry polymery Pluronic F-127, polyvinylpyrrolidon K30, polydialyldimethylamonium chlorid, polyethylenglykol a polyvinyalkohol pomocí čtyř různých metod pokrývání. Jednotlivé polymery a metody se lišily mírou potlačení elektroosmotického toku i stabilitou pokrytí. Z dynamických modifikací byla pro další testování separací liposomů zvolena pokrytí polymery Pluronic F-127, polyvinylpyrrolidon K30 a polydialyldimethylamonium chlorid. Liposomy s fluorescenční značkou byly separovány kapilární elektroforézou s laserem indukovanou fluorescenční detekcí a v jednotlivých pokrytích pak byla určena jejich mobilita. Nejvhodnější pro separace liposomů se jevilo pokrytí polymerem polyvinylpyrrolidon K30, ve kterém docházelo k nejmenším interakcím s liposomy v...
|
|
|
Srovnání detekčních technik pro analýzu sacharidů kapilární elektroforézou
Vlčková, Nikol ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Cílem této práce bylo porovnat detekční techniky kapilární elektroforézy pro stanovení sacharidů. Byly porovnávány bezkontaktní vodivostní detekce, přímá a nepřímá UV detekce a fluorescenční detekce. Sacharidy, které byly stanovovány byly glukóza, sacharóza a fruktóza. Měření s bezkontaktní vodivostní detekcí byla prováděna na kapiláře dlouhé 50 cm s vnitřním průměrem 20 µm. Napětí vložené na kapiláru bylo 15 kV a její teplota byla 25 řC. Jako základní elektrolyt byl použit 40mM NaOH. Kalibrační závislost byla měřena v koncentračním rozmezí 0,005 - 0,5 mg/ml. Opakovatelnost pro plochy píků a migrační časy a výtěžnost byly měřeny ve dvou koncentračních hladinách (0,02 a 0,2 mg/ml). Hodnoty RSD pro opakovatelnosti ploch píků a migračních časů se pohybovaly v rozmezí 0,01 - 8,64 %. Hodnoty pro limity detekce a kvantifikace se pohybovaly v rozmezí 1,0 - 5,8 µg/ml. Odchylky výtěžnosti od skutečné koncentrace analytů se pohybovaly mezi 7 - 22 %. Metody s UV nebo fluorescenční detekcí byly prováděny v kapilárách o vnitřním průměru 50 µm. Při metodě s nepřímou UV detekcí bylo napětí vložené na kapiláru 28 kV a její teplota byla 30 řC. Vlnová délka měření byla 207 nm a jako základní elektrolyt byl použit 50mM glycylglycin o pH 12,8. Kalibrační závislost byla měřena v koncentračním rozmezí 0,1 - 1 mg/ml....
|
host ::
RSS.