|
|
Využití HPLC v analýze léčiv III
Václavková, Jana ; Kovaříková, Petra (oponent) ; Kučera, Radim (vedoucí práce)
Diplomová práce Využití HPLC v analýze léčiv III Jana Václavková Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Vysokoúčinná kapalinová chromatografie je jednou z nejprogresivnějších separačních a analytických metod. Alternativou ke klasickým stacionárním silikagelovým fázím jsou fáze založené na oxidu zirkoničitém s výhodnějšími chemickými vlastnostmi. Cílem této diplomové práce bylo převedení podmínek separace z kolony ZirChrom® -PBD na kolonu Zirchrom® -MS a umožnit tak propojení s hmotnostním detektorem. Během optimalizace bylo pracováno s různými typy pufru (hydrogenfosforečnan, octan amonný), koncentracemi pufru, se složením mobilní fáze (rozpouštědlo: acetonitril, methanol). Pro separaci ondansetronu a jeho pěti nečistot byly zjištěny tyto optimální podmínky: mobilní fáze složená z acetonitrilu a 5 mM octanového pufru (pH 7), 0-4 min. (40 : 60, V/V), 4-5 min. (40→50 : 60→50, V/V), 5-21 min. (50 : 50, V/V), 21-25 min. (50→40 : 50→60, V/V). Analýza probíhala při teplotě 40 řC a rychlosti průtoku 0,5 ml/min. Detekce byla provedena při vlnové délce 216 nm. Celková doba separace trvala 20 minut.
|
|
|
Analytické hodnocení účinných látek kapalinovou chromatografií II
Raška, Martin ; Kovaříková, Petra (oponent) ; Sochor, Jaroslav (vedoucí práce)
ANALYTICKÉ HODNOCENÍ ÚČINNÝCH LÁTEK KAPALINOVOU CHROMATOGRAFIÍ II. Úvodní studie do problematiky SPME Diplomová práce Martin Raška Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv, Heyrovského 1203, Hradec Králové Tato diplomová práce se zabývá problematikou analytického hodnocení účinných látek kapalinovou chromatografií. Konkrétně je zaměřena na hodnocení benzodiazepinů obsažených v biologickém materiálu za užití mikroextrakce tuhou fází (SPME) a vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). HPLC zaujímá mezi dnes používanými chromatografickými metodami velmi důležitou pozici. Jejími hlavními přednostmi jsou citlivost, selektivita a rychlost provedení separace a vytvoření reprodukovatelného záznamu. Mikroextrakci tuhou fází lze popsat jako jednoduchou a účinnou techniku přípravy vzorku, která v sobě integruje sorpci, desorpci a zkoncentrování analytu. Tato technika nevyžaduje užití rozpouštědel a složitých aparatur a její podstatou je vystavení kapalného či plynného vzorku malému množství extrakční fáze. Během prováděných pokusů byly jako optimální stanoveny následující chromatografické podmínky. Za mobilní fázi byla užita směs methanol:voda (80:20) o hodnotě pH = 7,5 za průtoku 0,8 ml/min a detekce pak byla provedena při 254 nm....
|
|
|
Analýza vybraných polárních látek v HILIC módu
Brychová, Anna ; Vrbatová, Ivana (oponent) ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce)
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie je v dnešní době nejvýznamnější a nejpoužívanější separační metoda, která umožňuje kvalitativní i kvantitativní analýzu směsi látek. Jednou z jejích variant je hydrofilní interakční kapalinová chromatografie. Tato technika zažívá v poslední době stále větší rozmach, hlavně díky svým přednostem, mezi než patří možnost analýzy velmi polárních a hydrofilních sloučenin. Přesně takovými sloučeninami jsou i adeninribonukleotidy (ATP, ADP, AMP, cAMP), kreatin a fosfokreatin. Význam těchto látek je obrovský a to nejen v lidském organismu. Bylo provedeno a publikováno mnoho metod stanovení těchto polárních látek, kde dominuje HPLC stanovení za použití kolon reverzní fáze. Jejich základní přehled je součástí této diplomové práce. V experimentální části tato diplomová práce popisuje postup vývoje vhodných chromatografických podmínek, které by umožnily separaci ATP, ADP, AMP, cAMP, kreatinu a fosfokreatinu a případně i jejich kvantitativní hodnocení v HILIC módu. Nejlepší separace bylo dosaženo na koloně ZIC®-HILIC (150 x 2,1 mm; 3,5 μm; 200 Å) s použitím dvousložkové mobilní fáze a gradientové eluce. Mobilní fáze se skládala ze složky A, kterou byl 2 mM mravenčanový pufr, pH 6,45 a složky B - směsi (90% acetonitril, 2 mM mravenčanový pufr). UV detekce byla prováděna při...
|
|
|
Využití infračervené a Ramanovy spektrometrie v preformulačním vývoji léčiv
Klimeš, Jiří ; Vrbatová, Ivana (oponent) ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce)
55/56 ABSTRAKT VYUŽITÍ INFRAČERVENÉ A RAMANOVY SPEKTROMETRIE V PREFORMULAČNÍM VÝVOJI LÉČIV Mgr. Jiří Klimeš Duben 2010 Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv; Farmaceutická fakulta, Univerzita Karlova v Praze Zentiva, k.s., Praha, Oddělení vývoje, Laboratoře pevné fáze Cílem preformulačního vývoje je získat potřebné informace k formulaci léku, který bude stabilní, vhodný k hromadné výrobě a bude v souladu s požadavky terapie a regulačních autorit. Za tímto účelem je ve farmaceutickém průmyslu využíváno analytických metod, kterými se stabilita, kvalita a případné interakce účinné látky s látkami pomocnými zjišťuje. Kritérium pro výběr konkrétní metody je její přesnost, účinnost a v neposlední řadě rychlost a obtížnost měření. Nepostradatelné jsou metody pevné fáze, právě pro jejich jednoduchost provedení a možnost získání dalších informací o látce jako jsou např. polymorfie, velikost a rozložení částic. Tyto informace jsou naprosto esenciální jak pro samotnou formulaci finálního přípravku, tak i jeho výsledné vlastnosti. Na oddělení vývoje v Laboratořích pevné fáze Zentiva, k.s. byly tedy pomocí infračervené a Ramanovy spektroskopie studovány případné interakce a inkompatibility mezi účinnou látkou a excipienty použitými pro formulaci konkrétní lékové formy. Byly studovány kvalitativní parametry u...
|
|
|
Využití HPLC v analýze léčiv I
Kalafut, Peter ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Kovaříková, Petra (oponent)
Kurkumín a jeho deriváty patria medzi farmakologicky účinné diarylheptanoidové zlúčeniny. Získavajú sa z rastlinných oddenkov rodu Curcuma spp. (Zingiberaceae), ktoré sú rozšírené v tropických regiónoch juhovýchodnej Ázie. Posledné desaťročia sa farmaceutická droga dostáva do povedomia vedeckých pracovníkov. Dokázali sa zaujímavé účinky na ľudský organizmus. Terapeuticky sa využíva cholagogický, antioxidačný a antiflogistický účinok. V posledných rokoch sa záujem orientuje na prevenciu a liečbu rakoviny a priaznivý vplyv pri Alzheimerovej chorobe. Po perorálnom podaní však dosahuje systémový obeh iba nepatrné množstvo kurkumínu. V predkladanej práci sme vypracovali HPLC metódu stanovenia kurkuminoidov. Najlepším spôsobom extrakcie kurkumínových farbív z rastliny alebo extraktu je použitie metanolu ako pomerne polárneho rozpúšťadla. Vo vode je kurkumín prakticky nerozpustný. V alkalických vodných roztokoch sa prejavuje prítomnosť troch slabo kyslých vodíkov. Výslednú ionizáciu dokumentuje zmena farby roztoku zo žltej na červenú. Tieto podmienky pôsobia nepriaznivo na stabilitu kurkumínu - čiastočne je možné degradácii zabrániť použitím antioxidačnej látky a uchovávaním roztoku v tme. Analýza prebehla na kolóne Symmetry RP C18 metódou vonkajšieho štandardu. Použitá mobilná fáza bola zmesou...
|
|
|
HPLC analysis of drug candidates from the group of aroylhydrazones II.
Stariat, Ján ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
1. ABSTRAKT Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) je v oblasti liečiv jednou z najčastejšie používanou analytickou technikou. Železo je dôležitým biogénnym prvkom, no napriek tomu jeho zvýšené množstvo v organizme pôsobí toxicky. Výskum vysoko selektívnych a účinných biokompatibilných chelátorov železa bol pôvodne inšpirovaný potrebou mobilizovať železo v tkanivách s chronickým preťažením železa. Avšak v posledných rokoch je pozornosť venovaná využitia chelátorov železa tiež pri liečbe bežných onemocnení. Salicylaldehyd isonicotinoyl hydrazon (SIH), biokompatibilný chelátor železa odvodený od aroylhydrazonu, je v dnešnej dobe predmetom aktívneho výskumu ako potenciálne liečivo. Okrem schopnosti viazať železo, vykazuje aj ďalšie zaujímavé farmakologické účinky: antioxidačný, antiproliferatívny, kardioprotektívny, antimalarický a antimikróbny. Táto práca sa zaoberá vypracovaním optimálnych chromatografických podmienok HPLC separácie SIH a jeho potenciálnych metabolitov (isoniazid, acetylisoniazid, salicylaldehyd) a následne využitia tejto separácie k štúdiu možnosti izolácie uvedených látok z moči králika pomocou SPE ako úpravy vzorku. Najlepšia chromatografická analýza bola dosiahnutá použitím kolóny od firmy Phenomenex (2504,6 mm I. D.) s náplňou Prodigy 5u ODS3 100A (5 μm). Mobilná fáza bola v...
|
|
|
Využití alternativních stacionárních fází v HPLC analýze léčiv
Holásková, Petra ; Kovaříková, Petra (oponent) ; Kučera, Radim (vedoucí práce)
Rigorózní práce Využití alternativních stacionárních fází v HPLC analýze léčiv Mgr. Petra Holásková Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Rozpustnost silikagelu při vyšším pH mobilní fáze vedlo k vývoji alternativních HPLC kolon na bázi oxidů kovů (oxidu titaničitého, oxidu hlinitého), zejména pak oxidu zirkoničitého. Jeho vlastnosti, především chemická odolnost a separační účinnost, byly vyzkoušeny v naší práci, kdy jsme studovali alternativní stacionární fáze pro kvalitativní a kvantitavní analýzu doxazosinu a jeho pěti nečistot. Vzhledem k nízké retenci a dostatečné selektivitě se jako nejvhodnější jevil oxid zirkoničitý modifikovaný polystyrenem. Doba separace trvala do 16-ti minut. Výsledné chromatografické podmínky byly následně validovány.
|
|
|
HPLC analýza dexrazoxanu a jeho metabolitů
Dlouhý, Lukáš ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) je jednou z nejpoužívanějších separačních metod instrumentální analýzy umožňující zároveň jak kvalitativní tak kvantitativní analýzu látek. Anthracykliny jsou cytotoxická léčiva široce používaná v klinické praxi při léčbě hematologických malignit (leukémií, lymfomů) a solidních nádorů (žaludku, prsu a vaječníků). Léčba těmito léčivy však má svůj závažný limitující faktor. Tímto faktorem je anhracykliny indukovaná kardiotoxicita, která je způsobena hydroxylovými radikály a dalšími reaktivními formami kyslíku. V jejich tvorbě mají klíčovou úlohu komplexy anthracyklinů se železem. Dexrazoxan je derivát bisdioxopiperazinu, který se používá ke snížení kardiotoxického účinku anthracyklinů. Předpokládá se, že působí prostřednictvím svého aktivního metabolitu ADR-925, který působí jako chelátor vyvazující železo, a tak brání na železu závislé tvorbě kyslíkových radikálů. Tato práce se zabývá možnostmi analýzy dexrazoxanu a jeho rozkladných produktů/metabolitů na stacionární fázi Ascentis HILIC za podmínek kompatibilních s hmotnostní detekcí (MS). Nejlepších výsledků bylo dosaženo za podmínek izokratické eluce při použití mobilní fáze tvořené 5mM mravenčanem amonným o pH 5 nebo 7 a acetonitrilem v poměru 22:78 (v/v). Mobilní fáze protékala kolonou rychlostí 0,3...
|
|
|
Analytické hodnocení nových potenciálních léčiv ze skupiny chelátorů železa s využitím HPLC II.
Tomalová, Kateřina ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) zaujímá dominantní postavení mezi moderními technikami užívanými pro kvalitativní i kvantitativní analýzu léčiv. Po adekvátní úpravě vzorků je HPLC také běžně používána pro stanovení léčiv a metabolitů v biologickém materiálu. Tato práce popisuje vývoj a validaci chromatografické metody pro analýzu 2',4'- dihydroxyacetofenon isonikotinoyl hydrazonu (DHAP-INH) - nového biokompatibilního chelátoru železa, a její použití pro hodnocení stability tohoto potenciálního léčiva v králičí plasmě in vitro. DHAP-INH patří do série nově nasyntetizovaných analogů salicylaldehyd isonikotinoyl hydrazonu (SIH), která byla připravena s cílem zlepšit stabilitu látky v plasmě a přispět tak ke zlepšení farmakokinetických vlastností chelátorů odvozených od aromatických hydrazonů. Dostatečné separace DHAP-INH, jeho syntetických prekurzorů/rozkladných produktů (2,4-dihydroxyacetofenonu a isoniazidu) a vnitřního standardu (SIH) bylo dosaženo na koloně s náplní LiChrospher 100, RP-18 (250 mm × 4,6 mm I.D., 5 µm) s použitím mobilní fáze složené ze směsi fosfátového pufru (0,01 M NaH2PO4.2H2O; 2 mM EDTA; pH 6,0) a methanolu v poměru 54:46 (v/v). UV detekce byla prováděna při vlnových délkách 254 a 326 nm. Z testovaných rozpouštědel pro precipitační deproteinaci plasmy byl vybrán...
|
|
|
Vývoj bioanalytické metody pro studium úlohy pyridoxal isonikotinoyl hydrazonu při intoxikaci izoniazidem
Effmertová, Marcela ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Sochor, Jaroslav (oponent)
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie je v oblasti stanovení léčiv z biologického materiálu jednou z nejpoužívanějších separačních metod. Je vhodná ke kvantitativní i kvalitativní analýze léčiv. Isoniazid se používá jak k léčbě, tak i k prevenci tuberkulózy. Předávkování isoniazidem zpřusobuje neurotoxicitu. Akutní intoxikace isoniazidem se projevuje tonicko-klonickými křečemi centrálního přuvodu. Jako antidotum se v klinické praxi podává vitamín B6 (pyridoxin). Přestože je zřejmé, že je tento druh toxicity spojen s deficitem vitaminu B6 (respektive jeho aktivní formy pyridoxal-5-fosfátu - PLP), konkrétní dřukazy o mechanismech a dějích, které jsou za tento jev zodpovědné, stále chybí. Cílem pilotní studie bylo vypracovat chromatografické podmínky, vhodné pro monitorování intoxikace isoniazidem a detekci případných hydrazonových metabolitř u. Tyto podmínky by měly umožnit separaci sedmi analytřu (isoniazid, acetylisoniazid, pyridoxal, pyridoxol, pyridoxal-5-fosfát, PIH a o-108 - vnitřní standard). Dále pak bylo cílem studovat možnosti izolace všech uvedených látek z králičí plazmy. Nejlepší chromatografická separace byla dosáhnuta použitím kolony LiChroCART 250 × 4 nm I.D., s náplní Lichrospher 100 RP-18 (5 µm)....
|
host ::
RSS.