|
|
Využití metody HILIC pro hodnocení stability kyseliny askorbové
Pavlovičová, Soňa ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Autor: Soňa Pavlovičová Název: Využití metody HILIC pro hodnocení stability kyseliny askorbové Jazyk: český Klíčová slova: kyselina askorbová, stabilita, HILIC, stabilizační činidlo Kyselina askorbová, vitamin C, je látka velmi polární, a je proto velmi obtížně analyzovatelná pomocí kapalinové chromatografie na reverzních fázích. Z tohoto důvodu byla vyvinuta metoda HILIC (Hydrophilic interaction liquid chromatography) a optimalizovány podmínky pro analýzu. Analýza probíhala na koloně ZIC-HILIC (150 x 2,1 mm, 3,5 μm), mobilní fáze se skládala z acetonitrilu a 50 mM pufru octanu amonného o pH 6,8. Za daných podmínek trvala analýza asi 4 minuty. Ke kvantifikaci byla použita kyselina chlorogenová. Metoda využívá UV detekci při 268 nm. Byl sledován vliv jednotlivých faktorů, jako je teplota, koncentrace, přítomnost kyslíku, pH vodné části roztoku na stabilitu kyseliny askorbové a byl zkoumán vliv stabilizačních činidel různého typu. Optimálních podmínek bylo dosaženo snížením teploty na 4řC a použitím 10 mM kyseliny šťavelové jako stabilizačního činidla. Dobrých výsledků bylo dosaženo i při použití 5 % kyseliny o-fosforečné. Metoda byla validována a vyhovovala požadavkům lékopisu.
|
|
|
Stanovení verapamilu metodou sekvenční injekční analýzy s chemiluminiscenční detekcí
Homolová, Zuzana ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Verapamil byl stanovován metodou sekvenční injekční analýzy (SIA) s chemiluminiscenční detekcí (CL). Chemiluminiscence byla emitována během oxidace vzorku manganistanem draselným v roztoku kyseliny sírové za přítomnosti zesilovače CL polyfosfátu sodného (PFS). Optimalizovány byly koncentrace, pořadí, objem činidel a průtoková rychlost. Rovněž byl vyzkoušen vliv rozpouštědel 60% methanolu a 60% ethanolu. Optimální pořadí, objemy a koncentrace činidel pro vodný roztok verapamilu byly: 30 μl 10 mM KMnO4, 50 μl 2% PFS, 50 μl 1 mM verapamilu, 30 μl 1 M H2SO4 a pro 60% ethanolický roztok: 20 μl 10 mM KMnO4, 30 μl 2% PFS, 50 μl 1 mM verapamilu, 30 μl 2 M H2SO4, 30 μl 2% PFS a průtoková rychlost 30 μl/s. Přechodný CL signál byl zaznamenáván při vlnové délce 390 nm. Kalibrační křivky závislosti intenzity CL (výška píku) na koncentraci vzorku byly nelineární, lineární části se pohybovaly v rozmezí 510-5 - 510-3 M pro vodný roztok verapamilu a 110-5 - 110-3 M pro 60% ethanolický roztok. Detekční limity byly 210-5 M pro vodný roztok a 110-5 M pro 60% ethanolický roztok verapamilu. Opakovatelnost (RSD, n = 10) se pohybovala mezi 4,43 % (110-4 M) a 1,83 % (110-3 M) pro vodný roztok a 2,11 % (110-4 M) a 4,90 % (110-3 M) pro 60% ethanolický roztok. Verapamil byl stanovován v HVLP (tablety s obsahem...
|
|
|
Optimalizace chromatografické separace pro stanovení 4-aminofenolu a účinných látek v léčivém přípravku Valetol
Daňková, Jana ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Tato rigorózní práce se zabývá optimalizací separačních podmínek stanovení paracetamolu, kofeinu, propyfenazonu a 4-aminofenolu v hromadně vyráběném léčivém přípravku Valetol. Jako analytická metoda byla zvolena HPLC s UV detekcí hlavně z těchto důvodů: tablety obsahují mnoho dalších pomocných látek, které jsou během analýzy ze vzorku separovány a neznemožňují stanovení samotných účinných látek možnost sledování stability léčivých látek Práce byla pojata jako původní, a je kladen důraz na co možná největší jednoduchost a časovou nenáročnost optimalizované separace při zachování vysoké přesnosti a spolehlivosti dané metody. Optimální podmínky vhodné pro finální validaci byly nalezeny při separaci na koloně C-18 RP-amide. Celkový čas analýzy nepřesahuje 13 minut i s ekvilibrací kolony po gradientové eluci na původní podmínky. Všechny látky jsou rozdělené s rozlišením větším než 1,5. Píky látek jsou díky gradientu symetrické a nevykazují kromě píku AMF výrazné chvostování. Nulová linie je i přes gradientovou eluci stabilní.
|
|
|
Analýza statinů metodou plynové chromatografie
Pavlovičová, Soňa ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Pospíšilová, Marie (oponent)
Analýza statinů metodou plynové chromatografie Soňa Poláková (roz. Pavlovičová) Abstrakt Byla vyvinuta nová GC metoda pro stanovení statinů po jejich derivatizacis využitím FID detektoru. V průběhu experimentů byly dosaženy následující výsledky. Optimálních výsledků separace při analýze statinů bylo dosaženo při následujícím teplotním gradientu: první minutu při teplotě 250řC; dále se teplota zvyšovala rychlostí 10řC/min do výsledné teploty 320řC s další izotermickou částí. Plamenově-ionizační detektor byl termostatován na teplotu 320řC. Jako optimální derivatizační činidlo bylo zvoleno BSTFA+TMCS pro simvastatin, a N-tert- butyl(dimethylsilyl)trifluoracetamid pro atorvastatin. Přídavkem bezvodého uhličitanu draselného bylo získáno alkalické prostředí, které umožnilo derivatizaci. Nejvhodnější teplota pro derivatizaci je u obou léčiv 90řC. Čas po který je nezbytné nechat proběhnout derivatizaci je 60 minut u simvastatinu a 30 minut u atorvastatinu. Kvantifikace byla v obou případech provedena pomocí kyseliny mefenamové jako vnitřního standardu, která byla rovněž derivatizována, a to stejným derivatizačním činidlem jako dané léčivo. Derivatizace IS probíhala při teplotě 60řC po dobu 60 minut. Největší výtěžnosti reakce bylo dosaženo při použití polovičního množství derivatizačního činidla než je množství...
|
|
|
Separace a stanovení betametazonu a chloramfenikolu ve složených farmaceutických přípravcích pomocí monolitních sorbentů zapojených v systému sekvenční injekční analýzy
Salabová, Markéta ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
SEPARACE A STANOVENÍ BETAMETHASONU A CHLORAMFENIKOLU VE SLOŽENÝCH FARMACEUTICKÝCH PŘÍPRAVCÍCH POMOCÍ MONOLITNÍCH SORBENTŮ ZAPOJENÝCH V SYSTÉMU SEKVENČNÍ INJEKČNÍ ANALÝZY Abstrakt Byl vypracován postup separace a následného stanovení betamethasonu a chloramfenikolu v očních kapkách BETABIOPTAL® . Analýza probíhala za použití mobilní fáze acetonitril/voda (30:80, v/v) o pH = 5, s nastavenou rychlostí průtoku 0,6 ml min-1 a vlnovou délkou detekce 241 nm pro betamethason a 278 nm pro chloramfenikol. Vnitřním standardem s podobnými vlastnostmi jako obě účinné látky byl zvolen z třinácti testovaných látek propylparaben. V první fázi vývoj separačního procesu probíhal na HPLC. Získané údaje byly v další fázi práce přeneseny na SIA systém. Monolitická kolona Chromolith (TM) Flash RP - 18e, 25 x 4,6 mm s 5 mm předkolonou (Merck, Germany) byla zapojena mezi vícecestný ventil konvenčního (SIA) systému a průtokovou Z celu. Nejprve byl vytvořen postup krok za krokem v programu Fialab for Windows 5.0, podle kterého poté probíhala přesně naprogramovaná separační analýza. Optimalizovaná metoda byla před vlastním měřením validována, což dokládají následující údaje. Limit detekce byl pro betamethason 1,0 mg/l, pro chloramfenikol 0,5 mg/l a pro vnitřní standard propylparaben 1,0 mg/l. Limit kvantifikace byl pro betamethason...
|
|
|
Možnosti stanovení hladin statinů v biologických tekutinách metodami GC a HPLC
Kotlíková, Olga ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Nováková, Lucie (oponent)
Možnosti stanovení hladin statinů v biologických tekutinách metodami HPLC a GC Olga Kotlíková Abstrakt Cílem této práce bylo provést kompletní rešerši možností stanovení statinů analytickými metodami vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) a plynové chromatografie (GC) v biologických tekutinách. Převážná většina metod je založena na HPLC. Jednotlivé práce jsou citovány i s obrazovými přílohami a byly zmíněny i konkrétní postupy s důrazem na kritické části analýzy. Zpracované metody jsou citlivé a zpravidla vyžadují finančně náročné přístrojové vybavení pro MS detekci. Zahrnuty byly také méně citlivé metody s UV detekcí, které však vynikaly jednoduchostí provedení a dostupností. U sloučenin s vhodnými optickými vlastnostmi (fluvastatin) bylo možné použít fluorimetrickou detekci, která vyniká citlivostí, je finančně nenáročná a jednoduchá na provedení. V některých případech byla za tímto účelem sloučenina převedena vhodnou derivatizační reakcí na derivát s požadovanými vlastnostmi. Kromě jednotlivých metod byly v úvodu práce diskutovány také specifické aspekty pro tuto oblast, zejména problematika interkonverze v biologických vzorcích ex vivo. Většina metod je vhodná pro terapeutické monitorování hladin této skupiny léčiv, neboť splňuje požadavky kladené na moderní analytickou metodu. Především je to...
|
|
|
Derivatizační metoda pro stanovení cholesterolu v biologickém materiálu metodou plynové chromatografie
Krausová, Martina ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Název práce : Derivatizační metoda pro stanovení cholesterolu v biologickém materiálu metodou plynové chromatografie Diplomant : Martina Krausová Abstrakt Analysed matters mostly occur in complicated mixtures in biological material. It is necessary to separate individual analits. Gas chromatography can be used for this purpose. It is sensitive analytical method with great separative effect. This method is applied with substance which can be turned into vapour by heating them. Substance that dissolves when heated must be put through derivation reaction at the rise of volatile derivatives. One of these derivative methods is described in this diploma work. This reaction is acylation of cholesterol into acyl - cholesterol which can be determined thanks to it's volatility by gas chromatography. V biologickém materiálu se analyzované látky většinou vyskytují ve složitých směsích. Jednotlivé analyty je nutné oddělit. K tomuto účelu lze využít plynovou chromatografii. Je citlivá analytická metoda s velkou separační účinností. Uplatňuje se u látek, které lze zahřátím převést na páry. U látek, které se při zahřátí rozkládají, je nutné je před analýzou podrobit derivatizační reakci za vzniku těkavých derivátů. Jedna z těchto derivatizačních metod je popsána v této diplomové práci. Touto reakcí je acylace cholesterolu...
|
|
|
Vývoj a validace HPLC metody pro separaci a stanovení účinných látek v léčivém přípravku Valetol
Ullrichová, Jana ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Vývoj a validace HPLC metody pro separaci a stanovení účinných látek v léčivém přípravku Valetol Jana Ullrichová Abstrakt Byly zpracovány nalezené literární údaje týkající se stanovení paracetamolu, kofeinu a propyfenazonu pomocí metody HPLC. Byla upravena a validována metoda HPLC určená pro stanovení paracetamolu, kofeinu a propyfenazonu v perorálním přípravku Valetol. Byly nalezeny tyto optimální chromatografické podmínky metody HPLC s UV detekcí pro stanovení paracetamolu, kofeinu a propyfenazonu: Kolona - ODS Hypersil, 250x4,6mm, velikost částic 5m Detekce - UV 273 nm Složení mobilní fáze - voda : 2-propanol : diethylamin : methanol (50 + 15 + 3 + 32) upraveno kys. fosforečnou na pH 7,5 Dávkovaný objem - 5l Rychlost průtoku mobilní fáze - 0,5 ml/min. Teplota - laboratorní Izokratický režim Všechny sledované parametry validace metody vyhovují požadavkům na ně kladeným. Tato metoda může být používána při rutinní kontrole a hodnocení kvality přípravku Valetol.
|
|
|
Využití metody sekvenční injekční chromatografie pro separaci a stanovení triamcinolon acetonidu a kyseliny salicylové v léčivém přípravku Triamcinolon-Ivax
Holík, Pavel ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Solich, Petr (oponent)
Využití metody sekvenční injekční chromatografie pro separaci a stanovení triamcinolon acetonidu a kyseliny salicylové v léčivém přípravku Triamcinolon-IVAX Pavel Holík Abstrakt Výsledky měření potvrdily, že sekvenční injekční chromatografii je možné použít pro simultánní stanovení účinných látek v léčivém přípravku Triamcinolon - IVAX. Zjištěné výsledky dokázaly, že je tato nová generace průtokových metod alternativou HPLC v analytických laboratořích při zachování správnosti dosažených výsledků. Optimální podmínky pro analýzu jsou: mobilní fáze acetonitril-voda v poměru 35:65 (v/v), pH 3,3 až 3,4 upraveno přidáním koncentrované kyseliny octové (99%). Množství MF potřebné pro jednu analýzu je 4 ml; množství vzorku k jedné analýze 10 μl; průtoková rychlost pumpy 15 µl.s-1 . Pro analýzu byla použita kolona Onyx™ monolithic C18 (50 x 4,6 mm) s monolitickou předkolonou (5 x 4,6 mm); detekční cela Z o délce optické dráhy 1 cm s podélným směrem paprsku vůči toku; UV-VIS spektrofotometr s nastavenou vlnovou délkou 240 nm; jako vnitřní standard byl použit propylparaben. Metoda vykazovala tyto hodnoty: limit detekce (3σ) pro kyselinu salicylovou 1,00 µg.ml-1 , pro triamcinolon acetonid 0,66 µg.ml-1 a pro propylparaben 0,33 µg.ml-1 ; limit kvantifikace pro kyselinu salicylovou 3,00 µg.ml-1 , pro triamcinolon acetonid...
|
|
|
Stanovení bopindololu technikou sekvenční injekční analýzy s chemiluminiscenční detekcí
Holá, Petra ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Při oxidaci léčiva bopindolol [4-(2-benzoyloxy3-tert-butylaminopropyl)-2-methylindol (I)] manganistanem v prostředí vodné H2SO4 je emitováno chemiluminiscenční (CL) záření. CL signál je zesilován hexametafosfátem. Tato CL reakce byla využita k vypracování automatizovaného stanovení I ve farmaceutických přípravcích technikou sekvenční injekční analýzy (SIA). SIA sytém ovládaný osobním počítačem se skládal z 2,5-ml pístového čerpadla Cavro XL 3000, 10-cestného selekčního ventilu Vici-Valco a průtokového fluorescenčního detektoru Spectra-Physics FS970 doplněného CL detekčním modulem, který byl zhotoven v naší laboratoři. CL signál bopindololu korigovaný slepým pokusem se zvýšil 3-krát (ve srovnání s dávkováním čistě vodného roztoku I) pokud injektovaný vzorek obsahoval 60% (v/v) methanolu. Optimální pořadí, koncentrace a objemy aspirovaných zón reaktantů byly: 80mM Na hexametafosfát ( 61l), I v 60% (v/v) methanolu (60 l), 30mM H2SO4 (40 l) a 0,5mM KMnO4 (9 l). Kalibrační křivka vyjadřující závislost intensity CL (výška píku) na koncentraci bopindololu byla lineární v rozsahu 1 - 8 M I; limit detekce (S/N = 3) byl 0,2 M I. Frekvence dávkování vzorků byla 100 h-1 . Opakovatelnost výšek píků byla charakterizována hodnotou RSD 1,8% pro 15 nástřiků 8 M I. Navržená SIA-CL metoda byla použita ke...
|
host ::
RSS.