|
| |
|
|
Studie retenčních vlastností vybraných metabolitů tyrosinu v podmínkách HPLC
Gieslerová, Michaela ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Pilařová, Pavla (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Michaela Gieslerová Vedoucí diplomová práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Název diplomové práce: Studie retenčních vlastností vybraných metabolitů tyrosinu v podmínkách HPLC Tématem diplomová práce bylo studium retenčních vlastností vybraných metabolitů tyrosinu v podmínkách vysokoúčinné kapalinové chromatografie s použitím spektrofotometrické (285 nm) a fluorimetrické detekce (emisní 279, excitační 320). Celkem bylo zkoumáno 8 analytů - tyrosin, L-DOPA, dopamin, adrenalin, noradrenalin, kyselina homovanilová a vanilmandlová. Nejprve byl zkoumán vliv složení mobilní fáze, koncentrace pufru a pH na separaci daných analytů. Analýza proběhla na referenční koloně KINETEX 5 μm EVO C18 (150 mm x 3 mm, 5 μm; PHENOMENEX). Jako nejlépe hodnocená mobilní fáze byla methanol:100 mM kyselina octové (pH bylo upraveno hydroxidem sodným na 4,5); 5:95. Poté byl studován vliv složení stacionární fáze na separaci s použitím mobilní fáze, která je popsaná dříve. Celkem bylo studováno 7 různých kolon, a to SF s modifikovaným silikagel C18 skupinou, PFP skupinou, dále kombinované SF (C18 skupina s aromatickým jádrem, kombinace C18 skupina s PFP) a na závěr dvě kolony se skupinou C18 a dále...
|
|
|
HILIC separace acikloviru a jeho degradačního produktu II
Teplá, Lenka ; Pilařová, Pavla (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Farmaceutické chemie a kontroly léčiv Kandidát: Lenka Teplá Školitel: PharmDr. Pavla Pilařová, Ph.D. Název diplomové práce: HILIC separace acikloviru a jeho degradačního produktu II V rámci diplomové práce bylo testováno retenční chování acikloviru a jeho degradačního produktu guaninu na zirkoniové koloně modifikované elementárním uhlíkem ZirChrom® - CARB s využitím hydrofilní interakční kapalinové chromatografie (HILIC) a byly doplněny již získané poznatky vycházející z diplomové práce Lucie Bouzkové (2016), ve které se zabývala nalezením vhodných podmínek pro separaci analytů. V této práci byl zkoumán vliv koncentrace kyseliny fosforečné, fluoridu amonného, fluoridu sodného, triethylaminu a fosforečnanových pufrů v mobilních fázích na eluci analytů. Také byl sledován vliv složení mobilních fází s různými poměry organické a vodné složky a vliv rostoucí teploty na retenci acikloviru a guaninu. Vyšší obsah organické složky v mobilní fázi vede ke zkrácení retence acikloviru i guaninu. Na separaci se podílí zadržování hydrofilních analytů ve vodné části mobilní fáze. Se stoupající teplotou klesá retence analytů a zlepšuje se symetrie jejich píků. Fluoridy a fosforečnany se v mobilní fázi chovají jako Lewisovy baze a dochází ke...
|
|
|
Validace HPLC metody stanovení piroxikamu v plasmě s využitím SPME a deproteinace
Kuželová, Kristýna ; Pilařová, Pavla (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
Validace HPLC metody stanovení piroxikamu z plasmy s využitím SPME a deproteinace Rigorózní práce Mgr. Kristýna Kuželová Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv, Heyrovského 1203, Hradec Králové Tématem této rigorózní práce bylo bioanalytické hodnocení piroxikamu pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Piroxikam byl izolován z plasmy pomocí SPME a deproteinace. Plasma byla vždy upravena na hodnotu pH 2,5. SPME se skládala z 20 minut sorpce na PDMS/DVB vlákno a 20 minut desorpce do 200 μl methanolu. U druhé metody byl vzorek plasmy deproteinován acetonitrilem, 30 vteřin třepán a následně 5 minut centrifugován při 5 000 G. Poté byl odebrán supernatant, který byl analyzován pomocí HPLC. HPLC analýza probíhala na koloně s reverzní fází C18. Mobilní fáze se skládala z roztoku čištěné vody a acetonitrilu (60:40 v/v), který byl okyselený kyselinou mravenčí na pH 2,5. Průtok mobilní fáze kolonou byl 1 ml/min, teplota byla nastavena na 40řC. Detekce analytu probíhala při 333 nm. SPME i deproteinace byly validovány dle FDA. Sledována byla selektivita, správnost, přesnost, extrakční účinnost, linearita, detekční a kvantitativní limit a stabilita.
|
|
|
The employment of HPLC for separation of bioconjugates of azaphtalocyanines
Kaminská, Marta ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Pilařová, Pavla (oponent)
Diplomová práce Využití HPLC pro separaci biokonjugátů azaftalocyanínů Marta Kaminská Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Táto diplomová práca sa zaoberá hľadaním vhodných chromatografických podmienok pre separáciu biokonjugátov azaftalocyanínov. Tieto látky sú predmetom skúmania ako potencionálne zhášače fluorescencie, použiteľné pri konštruovaní molekulárnych sond. Boli uskutočnené merania v analytickom i semipreparatívnom merítku. Celkom sme testovali 9 chromatografických kolόn, všetky typu C18. Pracovali sme v izokratickom i gradientovom mόde a zmenou zloženia mobilnej fázy sme optimalizovali podmienky separácie analyzovanej zmesi. Pre separáciu biokonjugátov azaftalocyanínov boli zistené tieto optimálne podmienky : Pre analytické účely : stacionárna fáza : Hypersil BDS, 100 × 4,6 mm, veľkosť častíc 3 μm mobilná fáza : zložka A - 50 mM roztok TEAA a 12 % ACN vo vode zložka B - 100 % acetonitril gradientová eluce detekcia prebiehala pri vlnových dĺžkach 254 nm, 374 nm, 552 nm, 673 nm, teplota na kolóne 40 ˚C a rýchlosti prietoku mobilnej fázy 1ml/min. Pre semipreparatívne účely : stacionárna fáza : Hypersil BDS, 250 × 4,6 mm, veľkosť častíc 5 μm mobilná fáza : zložka A - 50 mM roztok TEAA a 12 % ACN vo vode...
|
|
|
Hodnocení lipofility pyrazinových analogů chalkonů
Balíková, Svatava ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Pilařová, Pavla (oponent)
Hodnocení lipofility pyrazinových analogů chalkonů Diplomová práce Svatava Balíková Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv, Heyrovského 1203, Hradec Králové Lipofilita derivátů 1,3-difenylprop-2-en-1-onu a 3-fenyl-1-pyrazin-2-ylprop-2-en-1-onu byla hodnocena pomocí tenkovrstvé chromatografie na obrácených fázích. Jako mobilní fáze byla při RP-TLC použita směs tetrahydrofuran - fosforečnanový pufr (pH 7,0). Lipofilitní parametr RMW byl zjištěn extrapolací hodnot RM (výsledky z RP-TLC) do 100% vodné fáze. Prostřednictvím hodnot RMW byl u jednotlivých derivátů zjištěn vliv substituentů na lipofilitu molekuly. Dále byla pro deriváty 3-fenyl-1-pyrazin-2-ylprop-2-en-1-onu vyhodnocena korelace mezi lipofilitním parametrem RMW a teoretickými hodnotami log P vypočtenými počítačovými programy. Byla zjištěna velmi dobrá korelace mezi hodnotami RMW a log P.
|
|
|
HPLC hodnocení L-tryptofanu a jeho metabolitů v biologickém materiálu
Málková, Kateřina ; Kastner, Petr (vedoucí práce) ; Pilařová, Pavla (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Kateřina Málková Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Název diplomové práce: HPLC hodnocení L-tryptofanu a jeho metabolitů v biologickém materiálu Tématem diplomové práce bylo vyvinutí optimalizovaných podmínek pro stanovení L-tryptofanu a jeho metabolitů (L-kynurenin, kyselina kynurenová, serotonin, kyselina 5-hydroxyindol-3-octová, melatonin) pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Separace probíhala na silikagelové koloně Kinetex EVO C18 (100A, 150 × 3 mm, 5 μm) s předkolonou OPTI-GUARD 1 mm C18 za použití spektrofotometrické a fluorimetrické detekce. Výchozí parametry detekce uvedené v metodě byly nastavené pro kynurenin (absorbance při 369 nm, 227 nm a fluorescenční detekce Ex: 369 Em: 475). Detekční a eluční parametry metody byly dále optimalizovány dle přidávaných analyzovaných látek na základě jejich individuálních UV a fluorescenčních spekter. Byly zkoušeny různé mobilní fáze, různá pH tlumivých roztoků. Výsledná mobilní fáze se skládala ze dvou složek: mobilní fáze A: voda + octanový tlumivý roztok 0,1 M; pH 4,5; methanol v poměru 97:3 mobilní fáze B: methanol. Byla využita eluce gradientová. Průtoková rychlost mobilní fáze byla 0,5 ml/min....
|
|
|
Use of liquid chromatography in pharmaceutical analysis III.
Babinská, Agáta ; Pilařová, Pavla (vedoucí práce) ; Kastner, Petr (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutickej chémie a farmaceutickej analýzy Kandidát: Agáta Babinská Školiteľ: PharmDr. Pavla Pilařová, Ph.D. Názov diplomovej práce: Využitie kvapalinovej chromatografie vo farmaceutickej analýze III. Témou tejto diplomovej práce bolo bioanalytické hodnotenie kvetiapínu a jeho dvoch aktívnych metabolitov 7-hydroxykvetiapínu a norkvetiapínu pomocou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie. Separácia prebiehala na zirkóniovej kolóne ZirChrom®-PBD (150x4,6 mm, 5 µm). Bol testovaný vplyv rôznych mobilných fáz, sily a pH tlmivého roztoku, ako aj vplyv rôzneho zastúpenia organickej zložky (ACN) v mobilnej fáze na retenčné správanie týchto troch analyzovaných látok. Výsledná mobilná fáza sa skladala z dvoch zložiek: MF A - octanový tlmivý roztok, 6mM, pH 4,0:ACN v pomere 90:10 (v/v) MF B - 10mM roztok TFA, pH 1,9:ACN v pomere 40:60 (v/v) Prietok mobilnej fázy kolónou bol 1 ml/min, teplota bola nastavená na 30řC. Detekcia analyzovaných látok prebiehala pri 254 nm. Bola využitá gradientová elúcia. Analyzované látky boli izolované z plazmy pomocou LLE, ktorá bola následne validovaná podľa FDA a ICH. Ako vnútorný štandard bol použitý flunitrazepam. Sledovanými parametrami bola selektivita, správnosť, presnosť, extrakčná...
|
|
| |
|
|
Hodnocení biologicky aktivních látek pomocí HPLC V.
Kokošková, Denisa ; Pilařová, Pavla (vedoucí práce) ; Mokrý, Milan (oponent)
Hodnocení biologicky aktivních látek pomocí HPLC V. Diplomová práce Denisa Kokošková Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Byla optimalizována metoda stanovení kyseliny salicylové jako hlavního rozkladného produktu kyseliny acetylsalicylové v tabletách Acylpyrinu, Acylcoffinu a Acifeinu. K hodnocení byla použita vysokoúčinná kapalinová chromatografie s elektrochemickou detekcí. Pro analýzu byla využita monolitická kolona Phenomenex 100 x 4,6 mm, Onyx monolitic C8. Optimalizace a ověření již navržených podmínek elektrochemické detekce bylo zaměřeno na nalezení vhodného složení mobilní fáze a rozpouštědla vzorku. Jako vhodná mobilní fáze byl použit 50 mM roztok fosfátového pufru o pH 2,5 a acetonitrilu v poměru 80 : 20. Průtok kolonou byl 1 ml/min, teplota 25 řC, injikovaný objem 10 μl. Elektrický potenciál byl nastaven na hodnoty E1= 300 mV, E2= 850 mV. Rozsah byl 1 μA. Optimalizovaná metoda byla validována, parametry validace byly přesnost, správnost, linearita, selektivita, robustnost, kvantitativní a detekční limit. Byla sledována stabilita vzorku tablet Acylpyrinu po dobu 48 hodin.
|
host ::
RSS.