|
|
Sekretované aspartátové proteázy kvasinky Candida parapsilosis.
Marečková, Lucie ; Dostál, Jiří (vedoucí práce) ; Novotný, Marian (oponent)
Candida parapsilosis je oportunistický patogen člověka způsobující řadu infekcí. Mezi nejvíce ohroženou skupinu pacientů patří jedinci s oslabenou imunitou. Narůstající četnost infekcí spojená se vznikem rezistentních kmenů se stala hlavním důvodem pro hledání nových metod léčby. Jedním z možných řešení mohou být přístupy zabývající se inhibicí sekretovaných aspartátových proteáz, které jsou považovány za jeden z virulentních faktorů kandid. Genom C. parapsilosis obsahuje tři geny kódující sekretované aspartátové proteázy SAPP1, SAPP2 a SAPP3. Zatímco izoenzym Sapp1p byl dobře biochemicky i strukturně charakterizován, izoenzymům Sapp2p a Sapp3p byla doposud věnována jen malá pozornost. První část této diplomové práce je zaměřena na rentgenostrukturní analýzu vazby vybraných peptidových inhibitorů do aktivního místa izoenzymu Sapp1p a na vazbu známého inhibitoru aspartátových proteáz Pepstatinu A do aktivního místa izoenzymu Sapp2p. Druhá část této práce je spjata se zjištěním, že C. parapsilosis patří mezi kandidy, jež překládají standartní leucinový kodón CUG majoritně serinem. Ačkoliv se jedná o nekonzervativní záměnu hydrofobní aminokyseliny za hydrofilní, je tato unikátní schopnost některými druhy kandid udržována více jak 170 mil. let. Přestože se již některé studie věnovaly selekčním výhodám a...
|
|
|
Candida parapsilosis secreted aspartic proteinases: processing and secretion
Vinterová, Zuzana ; Heidingsfeld, Olga (vedoucí práce) ; Hodek, Petr (oponent) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Candida parapsilosis je lidský oportunní patogen, jehož klinický význam vzrůstá, a který způsobuje širokou škálu potencionálně život ohrožujících infekcí u jedinců s oslabeným imunitním systémem. Jedním z nejvýznamějších virulenčních faktorů kvasinek Candida je produkce sekretovaných aspartátových proteas (Saps). Předkládaná disertační práce se zabývá převážně studiem sekretované aspartátové proteasy 1 (Sapp1p) kvasinky C. parapsilosis, jejím procesem aktivace a sekrece za různých podmínek a s využitím různých experiemntálních modelů. Sapp1p je sekretovaná buňkami C. parapsilosis do mimobuněčného prostoru se zcela odštěpeným pre-pro-peptidem a plně proteolyticky aktivní. Pokusy studující buněčnou stěnu C. parapsilosis prokázaly prodlouženou přítomnost zcela aktivované proteasy na buněčném povrchu (CW-Sapp1p). Metoda pro měření enzymové aktivity Sapp1p provedená na neporušených buňkách ukázala, že CW-Sapp1p je proteolyticky aktivní ještě před svým uvolněním do mimobuněčného prostoru a je schopná štěpit substrát. Pokusy s biotinylací a následnou analýzou pomocí hmotnostní spektrometrie ukázaly, že biotinylace CW-Sapp1p je proces saturovatelný, jehož výsledkem ale nejsou plně naznačené molekuly. Přístupnost jednotlivých lysinových zbytků byla v molekule Sapp1p proměnlivá s výjimkou čtyř zbytků, které...
|
|
|
Sekretované aspartátové proteázy kvasinky Candida parapsilosis.
Marečková, Lucie ; Dostál, Jiří (vedoucí práce) ; Novotný, Marian (oponent)
Candida parapsilosis je oportunistický patogen člověka způsobující řadu infekcí. Mezi nejvíce ohroženou skupinu pacientů patří jedinci s oslabenou imunitou. Narůstající četnost infekcí spojená se vznikem rezistentních kmenů se stala hlavním důvodem pro hledání nových metod léčby. Jedním z možných řešení mohou být přístupy zabývající se inhibicí sekretovaných aspartátových proteáz, které jsou považovány za jeden z virulentních faktorů kandid. Genom C. parapsilosis obsahuje tři geny kódující sekretované aspartátové proteázy SAPP1, SAPP2 a SAPP3. Zatímco izoenzym Sapp1p byl dobře biochemicky i strukturně charakterizován, izoenzymům Sapp2p a Sapp3p byla doposud věnována jen malá pozornost. První část této diplomové práce je zaměřena na rentgenostrukturní analýzu vazby vybraných peptidových inhibitorů do aktivního místa izoenzymu Sapp1p a na vazbu známého inhibitoru aspartátových proteáz Pepstatinu A do aktivního místa izoenzymu Sapp2p. Druhá část této práce je spjata se zjištěním, že C. parapsilosis patří mezi kandidy, jež překládají standartní leucinový kodón CUG majoritně serinem. Ačkoliv se jedná o nekonzervativní záměnu hydrofobní aminokyseliny za hydrofilní, je tato unikátní schopnost některými druhy kandid udržována více jak 170 mil. let. Přestože se již některé studie věnovaly selekčním výhodám a...
|
host ::
RSS.