|
|
Optimalizace chromatografických podmínek pro HPLC stanovení biologicky aktivních látek.
Kotíková, Eva ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Mokrý, Milan (oponent)
Optimalizace chromatografických podmínek pro HPLC stanovení biologicky aktivních látek Diplomová práce Eva Kotíková Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Adenosintrifosfát (ATP), adenosindifosfát (ADP), adenosinmonofosfát (AMP), kreatin (C) a fosfokreatin (CP) jsou polární látky s velkým významem nejen v lidském organismu. V této práci se podařilo vyvinout HPLC/UV metodu, která umožňuje separaci všech těchto látek za izokratické eluce. Jako vhodná stacionární fáze byla vybrána zirkoniová kolona, jejíž hlavní předností oproti klasickým silikagelovým kolonám je stabilita v celé škále pH a při teplotách až do 200žC. Nejlepší separace tak bylo dosaženo na koloně ZirChrom® - PHASE, s použitím dvousložkové mobilní fáze s průtokem 1 ml/min - složka A: 10mM hydrogenfosforečnanový pufr, pH 7 a složka B: 100% acetonitril. Detekce byla prováděna pomocí UV detektoru při vlnových délkách 254 nm pro ATP, ADP, AMP, cAMP a při 215 nm pro C a CP. Výsledné retenční časy při těchto podmínkách byly: cAMP = 2,1 min, C = 3,7 min, AMP = 4,7 min, CP = 6,4 min, ADP = 10,7 min, ATP = 27,9 min. Při analýze srdeční tkáně byl vzorek nejprve mechanicky homogenizován s 57 µl 100mM EDTA a následně přidán 0,5 ml 0,66M chlazené HClO4. Po deproteinaci byl...
|
host ::
RSS.