|
|
Využití alternativních stacionárních fází v HPLC analýze léčiv
Holásková, Petra ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Kovaříková, Petra (oponent)
Rigorózní práce Využití alternativních stacionárních fází v HPLC analýze léčiv Mgr. Petra Holásková Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Rozpustnost silikagelu při vyšším pH mobilní fáze vedlo k vývoji alternativních HPLC kolon na bázi oxidů kovů (oxidu titaničitého, oxidu hlinitého), zejména pak oxidu zirkoničitého. Jeho vlastnosti, především chemická odolnost a separační účinnost, byly vyzkoušeny v naší práci, kdy jsme studovali alternativní stacionární fáze pro kvalitativní a kvantitavní analýzu doxazosinu a jeho pěti nečistot. Vzhledem k nízké retenci a dostatečné selektivitě se jako nejvhodnější jevil oxid zirkoničitý modifikovaný polystyrenem. Doba separace trvala do 16-ti minut. Výsledné chromatografické podmínky byly následně validovány.
|
|
|
Analysis of oxidative and free radical induced DNA damage
Váňová, Nela ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Kovaříková, Petra (oponent)
Analýza oxidativního poškození DNA volnými radikály Diplomová práce Nela Váňová Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Volné radikály a reaktivní formy kyslíku (ROS) jsou vysoce reaktivní molekuly schopné modifikovat biomolekuly včetně DNA. 5',8-cyklo-2'-deoxynukleosidy představují skupinu DNA lézí vyznačující se současným poškozením sacharidové složky a nukleové báze stejného purinového nukleosidu a společněs 8-oxo-2'-deoxypuriny patří do hlavní skupiny lézí vznikajících atakem volných radikálů (včetně hydroxylového radikálu). Kvantifikace oxidativně a volnými radikály způsobených DNA lézí jako biomarkerů oxidačního stresu hraje významnou roli ve studiu jejich vlivu na lidské zdraví a nemoci. Pro kvantifikaci těchto DNA lézí ve vzorcích ozařovaných gamma paprsky bude použito spojení tandemové spojení hmotnostní spektrometrie a vysoce účinné kapalinové chromatografie (LC/MS/MS). Před nástřikem do LC/MS/MS, ozářené vzorky podrobené enzymatickému štěpení za účelem získání volných nukleosidů musí být odsoleny a DNA léze musí být separovány od nepoškozených nukleosidů. Pro separaci (5'R)-5',8-cyklo-2'-deoxyadenosinu; (5'R)-5',8-cyklo-2'-deoxyguanosinu; (5'S)- 5',8-cyklo-2'-deoxyadenosinu; (5'S)-5',8-cyklo-2'-deoxyguanosinu;...
|
|
|
Analysis of farnesylated peptides and proteins using LC-MS
Hessler, Filip ; Waisser, Karel (vedoucí práce) ; Kovaříková, Petra (oponent)
Krátké shrnutí práce Farnesylované proteiny mají velký význam ve vedení signálu buňkou a jako takové mohou hrát roli ve vzniku řady chorob, zejména rakoviny. Hmotnostní spektrometrie s ionizací elektrosprejem je metoda široce využívaná v analýze peptidů a proteinů, proto byla zvolena k vyvinutí snadného způsobu nalezení farnesylovaných proteinů v buňce. Na synteticky farnesylovaných jednoduchých peptidech a hovězím albuminu byl objasněn způsob, jakým se farnesylované peptidy štěpí v hmotnostním spektrometru. Charakteristickým rysem MS/MS spekter těchto peptidů jsou dva píky, které vznikly odštěpením farnesylu od samotného peptidu. Tyto fragmenty se liší v počtu nábojů na fragmentu, to je způsobeno rozdílným druhem štěpení. Rozštěpením vazby mezi sírou cysteinu a farnesylem rovnoměrně, vzniká nový náboj na peptidu a odstupující nabitá skupina o atomové hmotnosti 205. Pokud štěpení probíhá za ztráty neutrálního fragmentu farnesylu, na peptidu zůstává pouze původní náboj a odstupuje fragment o atomové hmotnosti 204, který ztratil jeden atom vodíku ve prospěch peptidu. Tato zjištění lze aplikovat z jednoduchých peptidů i na hledání farnesylace ve vzorcích, obsahující složitou směs proteinů z buněk. Při hledání farnesylovaných proteinů ve vzorku získaném z proteinů buněčné membrány buněk rakoviny prsu, jsem však...
|
|
|
HPLC analýza daunorubicinu a jeho metabolitu
Adamíková, Klára ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
V současné době patří vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) stále mezi dominantní separační metody, je široce využívána ve všech oblastech analýzy léčiv. HPLC umožňuje kvalitativní i kvantitativní hodnocení separovaných složek směsi. V této práci je popsán vývoj metody pro HPLC analýzu daunorubicinu (DAU) a jeho metabolitu daunorubicinolu (DAU-OL) v králičí plazmě. Analyzované látky byly nejprve odděleny od interferujících substancí v plazmě deproteinací. Z testovaných deproteinačních činidel byl vybrán methanol (600 μl), jehož extrakční výtěžnost byla nejvyšší. Separace DAU a jeho metabolitu byla dosažena na koloně Zorbax SB-Aq (3,5 µm, 150 x 4,6 mm; Agilent Technologies, USA), mobilní fáze byla tvořena vodnou složkou, která obsahovala čištěnou vodu s fosfátovým pufrem, okyselená kyselinou fosforečnou (výsledné pH = 2,4), a organickou složkou tvořenou acetonitrilem v poměru 74:26 (v/v). Analýza proběhla za podmínek izokratické eluce během 15 minut, průtok mobilní fáze byl 1,1 ml/min a nástřik 40 μl vzorku. Fluorescenční detektor měl nastavenou emisní a excitační vlnovou délku na 480 nm a 560 nm. Jako vnitřní standard byl použit doxorubicin. Metoda byla pilotně validována s ohledem na linearitu (4 - 83 ng/ml pro DAU, 25 - 500 ng/ml pro DAU-OL), přesnost a správnost. Byla stanovena stabilita...
|
|
|
Využití plynové chromatografie v kontrole léčiv IV
Kratochvílová, Eva ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Kovaříková, Petra (oponent)
Využití plynové chromatografie v kontrole léčiv IV. Diplomová práce Eva Kratochvílová Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Heyrovského 1203, Hradec Králové Tato diplomová práce se zabývá validací analytické metody pro stanovení nečistot v 1,3- butandiolu plynovou chromatografií. Stanovení optimálních separačních parametrů- teploty na koloně, teplotního gradientu, rychlosti průtoku nosného plynu a splitovacího poměru umožní ideální separaci píku 1,3-butandiolu a nečistot, které jsou v něm obsaženy. Pro kvantifikaci složek vzorku byla testována metoda vnitřního standardu a metoda normalizace. Normalizační metoda byla dále validována. Validace metody zahrnuje linearitu, přesnost, reprodukovatelnost, robustnost, LOD a LOQ. Nalezená metoda splňuje všechny požadavky na tyto parametry. Stabilita vzorku 1,3-butandiolu byla potvrzena sérií měření během 24 hodin.
|
|
|
HPLC analysis of the clinically used drug - dexrazoxane
Pecuchová, Vladimíra ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Vrbatová, Ivana (oponent)
1. ABSTRAKT Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) je progresívna analytická metóda, ktorá patrí medzi najpoužívanejšie separačné techniky. Železo je nenahraditeľným biogénnym prvkom, ktorý sa v tele človeka zúčastňuje mnohých dôležitých biochemických pochodoch. No aj napriek tomu sa za určitých patofyziologických podmienok môžu prejaviť jeho výrazné toxické účinky. Antracyklinové cytostatika patria do skupiny liečiv často využívaných pri liečbe rôznych hematologických malignít a solidných nádorov. Ich hlavným nežiaducim účinkom je kardiotoxicita, ktorá sa vysvetľuje tvorbou komplexov cytostatika s iónmi železa v srdečných bunkách (kardiomyocytoch), ktoré sú z redoxneho hľadiska veľmi aktívne a cyklickým mechanizmom produkujú veľké množstvo vysoko reaktívnych cytotoxických hydroxylových radikálov. Ďalším mechanizmom, ktorý sa podieľa na kardiotoxicite antracyklinových cytostatik je redoxná cyklizácia aglykonu. Dexrazoxan, derivát bisdioxypiperazinu, je jediným klinicky užívaným liečivom voči antracyklinmi vyvolanej kardiotoxicite. Predpokladá sa, že za jeho kardioprotektívny účinok je zodpovedný aktívny metabolit ADR-925, ktorý vzniká hydrolýzou dexrazoxanu vnútri kardiomyocytov a ktorý vychytáva železo z komplexov s antracyklinmi. Táto práca sa zaoberá vypracovaním optimálnych chromatografických...
|
|
|
HPLC analýza léčiv II
Juříčková, Markéta ; Sochor, Jaroslav (vedoucí práce) ; Kovaříková, Petra (oponent)
HPLC ANALÝZA LÉČIV II. Diplomová práce Markéta Juříčková Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv, Heyrovského 1203, 500 05 Hradec Králové, Česká Republika V diplomové práci byly vypracovány optimální podmínky pro analytické hodnocení kyseliny tiaprofenové vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) a její izolaci z plasmy metodou mikroextrakce tuhou fází (SPME). Stanovené chromatografické podmínky byly hodnoceny na koloně s RP-18. Mobilní fázi tvořila směs methanolu a fosfátového pufru. Její průtok kolonou byl 0,7 ml/min. Detekce probíhala v UV oblasti při vlnové délce 306 nm. Pro izolaci kyseliny tiaprofenové ze vzorku bylo použito vlákno pokryté PDMS/DVB. Nejprve byla kyselina tiaprofenová izolovaná z vodného vzorku. Výtěžek mikroextrakce byl 19,46 %. Poté byla provedena extrakce ze vzorku plasmy s přídavkem kyseliny tiaprofenové. Jeho pH bylo upraveno na hodnotu 2,8. Pro desorpci byl použit methanol. Byla stanovena optimální doba sorpce a desorpce. Extrakční účinnost byla 9,74 %. Kvantitativní hodnocení kyseliny tiaprofenové ve vzorku plasmy bylo provedeno s využitím kalibrační křivky a metody vnějšího standardu. Klíčová slova: HPLC, SPME, kyselina tiaprofenová, plasma
|
|
|
HPLC analysis of drug candidates from the group of aroylhydrazones II.
Stariat, Ján ; Kovaříková, Petra (vedoucí práce) ; Kučera, Radim (oponent)
1. ABSTRAKT Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) je v oblasti liečiv jednou z najčastejšie používanou analytickou technikou. Železo je dôležitým biogénnym prvkom, no napriek tomu jeho zvýšené množstvo v organizme pôsobí toxicky. Výskum vysoko selektívnych a účinných biokompatibilných chelátorov železa bol pôvodne inšpirovaný potrebou mobilizovať železo v tkanivách s chronickým preťažením železa. Avšak v posledných rokoch je pozornosť venovaná využitia chelátorov železa tiež pri liečbe bežných onemocnení. Salicylaldehyd isonicotinoyl hydrazon (SIH), biokompatibilný chelátor železa odvodený od aroylhydrazonu, je v dnešnej dobe predmetom aktívneho výskumu ako potenciálne liečivo. Okrem schopnosti viazať železo, vykazuje aj ďalšie zaujímavé farmakologické účinky: antioxidačný, antiproliferatívny, kardioprotektívny, antimalarický a antimikróbny. Táto práca sa zaoberá vypracovaním optimálnych chromatografických podmienok HPLC separácie SIH a jeho potenciálnych metabolitov (isoniazid, acetylisoniazid, salicylaldehyd) a následne využitia tejto separácie k štúdiu možnosti izolácie uvedených látok z moči králika pomocou SPE ako úpravy vzorku. Najlepšia chromatografická analýza bola dosiahnutá použitím kolóny od firmy Phenomenex (2504,6 mm I. D.) s náplňou Prodigy 5u ODS3 100A (5 μm). Mobilná fáza bola v...
|
|
|
Význam antiangiogenní terapie u lymfomu z plášťových buněk
Kovaříková, Petra ; Klener, Pavel (vedoucí práce) ; Kalinová, Markéta (oponent) ; Boudová, Ludmila (oponent)
Lymfom z plášťových buněk (MCL) je podtypem B-non-Hodgkinských lymfomů charakterizovaný častými relapsy. I přes začlenění ibrutinibu, inhibitoru Brutonovy tyrosinkinázy, do záchranné terapie dochází u těchto pacientů dříve či později k návratu biologicky vysoce agresivní choroby s extrémně špatnou prognózou. Jedním z popisovaných mechanismů rezistence na ibrutinib je zvýšená aktivace alternativních metabolických drah, z nichž některé (např. PI3K-AKT-mTOR) vykazují též signifikantní proangiogenní aktivitu. V předložené studii jsme zavedli a standardizovali ultrasonografické a fotoakustické zobrazování neovaskularizace a tkáňové oxygenace podkožních MCL tumorů na myších modelech v reálném čase. Zjistili jsme, že ultrasonografické a fotoakustické zobrazování je rychlou, neinvazivní metodou k posouzení angiogeneze v podkožních tumorech s velkým preklinickým potenciálem. Na myších modelech MCL jsme prokázali význam míry exprese CD31/PECAM1 pro přihojení, růst a šíření buněk MCL in vivo. Na pacientských vzorcích jsme ověřili, že míra exprese CD31/PECAM1 pozitivně koreluje s mírou extranodálního postižení. CD31 usnadňuje přežití a reguluje extranodální šíření lymfomu z plášťových buněk. Zjistili jsme, že zvýšení exprese VEGF vede nejen ke zvýšení mikrovaskulární denzity díky pozitivnímu ovlivnění...
|
|
|
WOOX
Kovaříková, Petra ; Weiss, Jan (oponent) ; Havliš, Karel (vedoucí práce)
Jesenická firma WOOX zaměřující se na výrobu sportovního zboží – převážně textilu se začala rozrůstat a naplnila tak původní kapacity. Pro své nové výrobní místo si vybrala brownfield bývalé jesenické textilky. Ta se nachází pět minut od centra města. Já jsem oslovila majitele této firmy a vzhledem k tomu, že se právě zabýval návrhem přestavby, tak jsme se dohodli na vzájemné spolupráci. Mým záměrem je poskytnou firmě vizi a představit jí možnosti řešení. Má sloužit nejen jako inspirační materiál, ze kterého firma může v budoucnu čerpat, ale také ukázat možné přístupy v rámci tohoto projektu. V návaznosti na analýzu pozemku a okolí diplomová práce navrhuje výrobu, projekci, startovací bydlení a multifunkční halu s bistrem. Práce vzniká s ohledem na SMART principy. Snaží se propojovat zájmy obyvatel města a firmy WOOX.
|
host ::
RSS.