|
Testování interakce nově syntetizovaných látek s konstitutivním androstanovým receptorem
Lágnerová, Jitka ; Pávek, Petr (vedoucí práce) ; Trejtnar, František (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Jitka Lágnerová Školitel: Doc. PharmDr. Petr Pávek, Ph.D. Název diplomové práce: Testování interakce nově syntetizovaných látek s konstitutivním androstanovým receptorem Nukleární receptory jsou ligandem aktivované transkripční faktory, které regulují expresi genů zapojených do široké škály biologických procesů. Pregnanový X receptor (PXR) a konsitutivní androstanový receptor (CAR) jsou členové sirotčí podrodiny nukleárních receptorů, které byly původně definované jako xenobiotické senzory regulující expresi enzymů metabolizující léčiva s cílem ochránit organismus před toxickými sloučeninami. Změna ve funkci CAR může ovlivnit nejen farmakokinetiku, účinnost a toxicitu léčiv, ale i endokrinní homeostázu, energetický metabolismus a buněčnou proliferaci. Cílem této experimentální diplomové práce bylo prověření interakce nově syntetizovaných látek s lidským CAR. Pomocí metody gene reporter assay a two-hybrid assay jsme otestovali na buněčných kulturách HepG2 a LS174T celkem 40 látek v různých koncentracích. Jako přímé ligandy hCAR s výraznou transkripční aktivitou jsme označili dvě látky, a sice 2-(3-methoxyfenyl)chinazolin-4-thiol resp. -ol působící v koncentraci 10 µM. Výsledky této práce v...
|
|
Identifikace antimikrobiálních peptidů v jedu pavouků
Benýšek, Jakub ; Liberda, Jiří (oponent) ; Tichá, Marie (vedoucí práce)
Stále rostoucí rezistence vůči antibiotikům vede k potřebě nalezení nových účinných látek s antimikrobiálními vlastnostmi. Tato práce se zaměřuje na výskyt, chemický a fyzikální popis, mechanismus účinku a na biologickou aktivitu takovýchto látek, nalézajících se v jedu pavouků. Druhá část práce je zaměřena na izolaci a identifikaci látek s těmito vlastnostmi z jedu divokých včel a jednoho pavouka. Byl izolován a identifikován peptid s antimikrobiálními vlastnostmi a nízkou hemolytickou aktivitou z včely Trachusa byssina. Tento peptid má molekulovou hmotnost 1749,9 ? 0,1. Obsahuje 16 aminokyselin a je amidován na svém C-konci. Jeho primární struktura GILSVLKNLLKKHMAS-NH2 byla stanovena za pomoci Edmanova odbourávání a ESI-QTOF hmotové spektrometrie.
|
|
Functional and structural study of thermally activated TRP ion channels: The role evolutionarily conserved motifs in the TRPA1 modulation
Kádková, Anna
Ankyrinový receptor TRPA1 je iontový kanál exprimovaný převážně na primárních aferentních senzorických neuronech, kde působí jako polymodální senzor pro bolestivé a dráždivé podněty. Kromě chemických látek (např. isothiokyanáty, skořicový aldehyd a jeho deriváty, akrolein, menthol) může být aktivován chladem, depolarizací membránového potenciálu nebo vápenatými ionty z intracelulární strany. Iontový kanál TRPA1 je homotetramerem podjednotek, jež jsou topologicky uspořádány do transmembránové oblasti a cytoplazmaticky orientovaných N- a C-konců. Transmembránová oblast je tvořena šesti alfa-helixy propojenými intra- a extracelulárními kličkami. N-konec receptoru se vyznačuje přítomností 16 až 17 ankyrinových repetic (AR), zatímco C-konec je výrazně kratší a má převážně helikální strukturu. Přesná struktura TRPA1 byla částečně rozřešena roku 2015 pomocí kryo-elektronové mikroskopie, avšak funkční úloha jednotlivých oblastí v polymodální aktivaci receptoru není prozatím plně objasněna. Předkládaná disertační práce se zabývá úlohou mezidruhově konzervovaných strukturních a sekvenčních motivů v cytoplazmatických koncích a v S4-S5 oblasti TRPA1 v napěťové a chemické citlivosti receptoru. Pomocí homologního modelování, molekulárně-dynamických simulací, bodové mutageneze a elektrofyziologických technik bylo...
|
|
Studium fotosyntetické reakce zelených řas na přítomnost vybraných těžkých kovů
NOVÁK, Jan
S nárůstem počtu obyvatel na Zemi se stále více zemědělských ploch ocitá v oblastech, které jsou zasaženy odpadními látkami. Pro posouzení dopadu jejich přítomnosti na životní prostředí je proto důležité stanovit jejich toxicitu. Cílem této práce je zhodnocení vlivu vybraných iontů těžkých kovů (CoSO4, CuSO4, CdSO4, ZnSO4 a K2Cr2O7) na průběh fotosyntézy u modelových zástupců zelených řas (Scenedesmus quadricauda) prostřednictvím sledování dynamiky uvolňování kyslíku do roztoku živného média. Experimenty jednotlivými sloučeninami probíhaly při pH 7, teplotě 25°C a světle 450 ?mol m-2 s-1. K měření byla použita sestava Algareact vyvinutá firmou BVT Technologies. K validaci metody bylo použito srovnání s růstovými křivkami Scenedesmus quadricauda při různých pH. Metoda měření rozpuštěného kyslíku v médiu je vhodná k měření bezprostředního účinku chemických sloučenin na fotosyntetickou aktivitu zkoumaného organismu. Metoda je omezena tekutostí měřeného roztoku. Nejvíce ovlivnilo naměřené množství kyslíku rozpuštěného v médiu CdSO4 v koncentraci 0,1 M.
|
|
Přístup k soudům ve věcech ochrany životního prostředí
Bernard, Michal ; Damohorský, Milan (vedoucí práce) ; Smolek, Martin (oponent) ; Sobotka, Michal (oponent)
Cílem této práce na téma Přístup k soudům ve věcech ochrany životního prostředí je popis možností přístupu fyzických a právnických osob k soudní ochraně životního prostředí v České republice. Soudní ochrana je důležitým prvkem pro zajištění práva na příznivé životní prostředí. Pro efektivní zajištění ochrany životního prostředí a práva jednotlivců na jejich příznivé životní prostředí je nutné zajistit co nejširší přístup fyzických a právnických osob k jednotlivým soudním orgánům k možnosti namítání nezákonností ze strany orgánů veřejné moci či třetích osob. Široká soudní ochrana práva na příznivé životní prostředí je nezbytnou a nepostradatelnou součástí demokratického zřízení a základním předpokladem pro fungování tohoto základního lidského práva v praxi. Tato práce se nejprve musí zabývat hmotně právní otázkou práva na příznivé životní prostředí - jeho obsahem a okruhem subjektů, kterým toto základní ústavní právo přináleží. Právem na příznivé životní prostředí se rozumí právo na takové prostředí, které je antropogenně zatěžované pouze podlimitně. Tedy na prostředí znečišťované a zatěžované důsledky lidské činnosti včetně vnášení fyzikálních, chemických či biologických emisí a činitelů v míře, jíž připouštějí jednotlivé složkové předpisy na ochranu životního předpisy a lidského zdraví. Soudy až...
|
|
Vývoj a aplikace afinitního nosiče pro izolaci lidských karbonyl-redukujících enzymů
Andrýs, Rudolf ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Šebela, Marek (oponent) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Rudolf Andrýs Školitel: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název disertační práce: VÝVOJ A APLIKACE AFINITNÍHO NOSIČE PRO IZOLACI LIDSKÝCH KARBONYL-REDUKUJÍCÍCH ENZYMŮ Již po několik tisíciletí tvoří základ lidské medicíny malé bioaktivní molekuly, které byly podávány ve formě rostlinných extraktů nebo syntetický připravených sloučenin. Jejich využití v moderní lékařské vědě ovšem není možné bez detailního porozumění jejich biochemických účinků a identifikace jejich molekulárních cílů. Metody chemické proteomiky, založené na specifické interakci mezi bioaktivní látkou a cílovou molekulou, patří v současné době k nejpoužívanějším technikám při identifikaci molekulárních cílů malých molekul. Oproti klasickým biochemickým metodám (např. 2D elektroforéza) se jedná o citlivé a především velmi selektivní techniky, díky kterým lze z komplexních biologických vzorků úspěšně identifikovat i biomolekuly, které se přirozeně vyskytují jen ve velmi malých koncentracích. Takovými biomolekulami jsou i karbonyl-redukující enzymy, které představují fyziologicky důležitou skupinu proteinů, jelikož se podílí na metabolismu řady endogenních (např. prostaglandiny, steroidní hormony) i xenobiotických (např....
|
|
Vliv substrátu na produkci žížal Dendrobena veneta
SCHMIDTMAJEROVÁ, Eva
Důležitost biologických procesů při zpracovávání organických zbytků je široce uznávána. Tato práce se zabývá jednou z nejúčinnějších metod přeměny pevných organických zbytků na produkty, které jsou vhodné pro životní prostředí a zároveň cenné. Kompostování pomocí žížal obsahuje složité potravní sítě a současně modifikuje různé chemické formy několika základních živin na anorganické sloučeniny, které jsou vhodné pro výživu rostlin. V práci je stručně popsána biologie, výskyt a základní ekologické kategorie žížal a je zde ukázáno, jak mohou být důležitými rozkladači organických zbytků. V této práci je podán přehled hlavních druhů vhodných pro vermikompostování se zaměřením na druh Dendrobaena veneta. Je zde srovnáno 5 substrátů z hlediska vhodnosti pro produkci tohotu druhu žížal a vhodnosti změněného substrátu žížalami pro využití jako hnojivo. V práci bylo zjištěno, že vhodnými substráty pro produkci žížal Dendrobaena veneta jsou odpad z čističky odpadních vod a substrát čistá celulóza.
|
|
Uplatnění imunohistochemických metod v diagnostice novotvarů
VELKOVÁ, Michala
Bakalářská práce se zabývala uplatněním imunohistochemických metod v diagnostice novotvarů. Jsou zde zmapovány indikace imunohistochemických metod podle jednotlivých oddělení Nemocnice Písek, a.s. V teoretické části popisuji poznatky o jednotlivých vyšetřovacích metodách. U imunohistochemie jsem se zaměřila na stanovení jednotlivých antigenů a použití vhodných primárních protilátek pro diagnostiku řady onemocnění, převážně novotvarů. Oddělení patologicko-anatomické má k dispozici 20 primárních protilátek. V praktické části porovnávám konvenčního barvení a imunohistochemické metody s konvenčním barvením a speciálními barvícími metodami v histologii pro stanovení diagnózy novotvarů. Hematoxylin eosin slouží k odlišení základních buněčných součástí. Selektivní barvení umožňuje barevné odlišení různých tkáňových komponent. Pomocí imunohistochemie se prokazuje přítomnost určitých tkáňových antigenů díky protilátkové reakci s navázanými chemickými sloučeninami. Toto porovnání jsem aplikovala při diferenciální diagnostice maligních melanomů a myogenních novotvarů na Oddělení patologicko-anatomickém, Nemocnice Písek, a.s. U stanovení maligních melanomů byl prvotně vzorek histologicky zpracován a obarven základním barvením Hematoxylin eosin. Druhotně jsem použila argentafinní reakce na průkaz pigmentu melaninu a imunohistochemické barvení antigenu HMB 45 pomocí monoklonální myší protilátky proti HMB 45 od firmy Dako a proteinu S 100 pomocí polyklonální králičí protilátky proti S100 od firmy Dako. Takto bylo vyšetřeno 14 vzorků od pacientů s maligním melanomem. HMB 45 se barvilo pozitivně u 12 vzorků z celkových 14. Monoklonální protilátka proti HMB 45 je pro maligní melanom dosti specifická. S 100 protein byl detekován ve všech tkáňových vzorcích. Polyklonální protilátka proti S 100 vykazuje vyšší senzitivitu, není však příliš specifická. Spíše se používá k odlišení neuroektodermálních a nonneuroektodermálních lézí. Melanin byl prokázán u 11 tkáňových vzorků. Průkaz melaninu je též nespecifický a komplikovaný. Argentafinní reakce vykazuje zbarvení i u jiných látek obsažených v cytoplazmě jako např. lipofuscin, proto je nutné k diagnostice melanomu použít i jiné metody např. imunohistochemii. V diagnostice myogenních novotvarů se použilo základní barevní Hematoxylin eosin a následně jsem imunohistochemicky stanovovala hladkosvalový aktin a desmin pomocí monoklonálních myších protilátek od firmy Dako a přehledné barvení Hematoxylin van Gieson, které se využívá v menší míře než v minulosti. Celkem se vyšetřilo 94 myogenních novotvarů. 72 novotvarů obarvených Hematoxylinem van Giesonem vykazovalo pozitivní barevnou reakci svaloviny a 22 novotvarů slabou barevnou reakci. Hladkosvalový aktin a desmin byl imunohistochemicky detekován u 92 vzorků. Hlavním problémem v barvení Hematoxylin van Gieson zůstává menší specificita a někdy i nejednoznačná diferencovatelnost barevných odstínů ve vlastním preparátu znesnadňující až znemožňující v některých případech spolehlivé stanovení diagnózy. Z tohoto důvodu je upřednostňován imunohistochemický průkaz hladkosvalového aktinu a desminu (mimo jiných) jako klíčových parametrů. S výhodou lze pak využít pozitivní protilátkové reakce s hladkosvalovým aktinem u myoepitelií při pátrání po eventuální invazivitě především k odlišení in situ a mikroinvazivních tumorů ve žlazových orgánech. V diferenciální diagnostice tumorů myogenního původu se v současné době upřednostňují před speciálním barvením imunohistochemické metody pro vysokou míru senzitivity i specificity, stejně jako v diferenciální diagnostice maligního melanomu. V kombinaci se pak oba přístupy dobře doplňují a poskytují již poměrně vysokou míru jistoty při určování původu buňky.
|
|
An Environmental Impact of Pyritic Bauxite from the Dajti Mine, Albania
Novák, Jiří Karel ; Minařík, Luděk ; Peza, Luftulla Hasan ; Melka, Karel
The accelerated chemical weathering of bauxite due to acid atmospheric deposition and breakdown of pyrite was simulated using short-termed laboratory acid leaching at 20 o C. Pyrite-bearing gibbsite-boehmitic bauxite giving rise to a number of questions concerning ecology was tested along with oxic boehmitic bauxite from the Dajti mine and that from Mali Korites (Mali Thate Mts., SE Albania). The leachte of pyrite-bearing and sulphate-producing bauxite is enriched in the following risk elements: Cd, Be, Zn, Ni, Co, and much less Cr, Cu, As, and Pb. Toxic soluble hydroxy-alumina ions may be also released into the aquatic environment, because of high concentration in output leachate (563 mg/l). In contrast, the leachates of oxic boehmitic bauxites commonly contain much lower concentrations of toxic elements with exception of Cu (Dajti mine) and Be (new occurence of Mali Korites).
|
|
Preparační praktikum z anorganické chemie
FRANTOVÁ, Jana
{\clqq}Preparační cvičení z anorganické chemie`` je čtvrtou částí internetové video-databáze chemických pokusů. Tento oddíl je určen především pro SŠ a VŠ studenty. Celkem je prezentováno patnáct pokusů (na internetu od prosince 2006). Součástí didaktického zpracování jsou video-záznamy, návody a principy úloh. Možnosti využítí ve výuce naznačují otázky a úkoly. http://home.zf.jcu.cz/public/departments/kch/didaktika/didaktika.htm
|
host ::
