|
|
Stanovení oxidativního poškození DNA pomocí jednobuněčné gelové elektroforézy (kometový test)
Škubalová, Věra ; Hochmann, Jiří (vedoucí práce) ; Slyšková, Jana (oponent)
Oxidativní poškození buňky představuje jeden z nejčastějších typů poškození, které se týká všech buněčných komponent. Jeho následkem jsou oxidační změny struktury lipidů, proteinů a DNA. Na posledně jmenované jsme se zaměřili v této práci. Oxidační změny DNA ústí v změny v replikačním cyklu buňky, které se projevují např. karcinogenezí, mutagenezí či stárnutím buňky. Buňky jsou vybaveny reparačními mechanismy, díky kterým jsou schopny toto poškození efektivně opravovat a tak si zachovat životaschopnost. Oxidační poškození indukují různé faktory, např. volné kyslíkové radikály nebo UV záření, použité pro vyvolání oxidačních změn DNA v rámci této práce. Stanovit oxidativní poškození je možné různými metodami, nejčastěji se používá kometový test (Comet assay). Jde o významnou metodu používanou pro detekci jednořetězcových a dvojřetězcových zlomů DNA, detekci alkalilabilních míst, zjišťování křížových spojení DNA- protein, oxidačních a alkylačních poškození DNA. Pro vlastní stanovení je potřeba jen velmi málo buněk, což představuje jednu z velkých výhod této metody. Námi používaná modifikace kometového testu spočívá ve využití reparačních enzymů, které umožňují detekovat specifické oxidační poškození DNA. Používali jsme tři enzymy: endonukleázu III pro detekci oxidovaných pyrimidinů,...
|
|
|
Stanovení oxidativního poškození DNA pomocí jednobuněčné gelové elektroforézy (kometový test)
Škubalová, Věra ; Hochmann, Jiří (vedoucí práce) ; Slyšková, Jana (oponent)
Oxidativní poškození buňky představuje jeden z nejčastějších typů poškození, které se týká všech buněčných komponent. Jeho následkem jsou oxidační změny struktury lipidů, proteinů a DNA. Na posledně jmenované jsme se zaměřili v této práci. Oxidační změny DNA ústí v změny v replikačním cyklu buňky, které se projevují např. karcinogenezí, mutagenezí či stárnutím buňky. Buňky jsou vybaveny reparačními mechanismy, díky kterým jsou schopny toto poškození efektivně opravovat a tak si zachovat životaschopnost. Oxidační poškození indukují různé faktory, např. volné kyslíkové radikály nebo UV záření, použité pro vyvolání oxidačních změn DNA v rámci této práce. Stanovit oxidativní poškození je možné různými metodami, nejčastěji se používá kometový test (Comet assay). Jde o významnou metodu používanou pro detekci jednořetězcových a dvojřetězcových zlomů DNA, detekci alkalilabilních míst, zjišťování křížových spojení DNA- protein, oxidačních a alkylačních poškození DNA. Pro vlastní stanovení je potřeba jen velmi málo buněk, což představuje jednu z velkých výhod této metody. Námi používaná modifikace kometového testu spočívá ve využití reparačních enzymů, které umožňují detekovat specifické oxidační poškození DNA. Používali jsme tři enzymy: endonukleázu III pro detekci oxidovaných pyrimidinů,...
|
host ::
RSS.