|
|
Studium biogeneze transportérů monovalentních kationtů v eukaryotních buňkách
Černá, Karolína ; Zimmermannová, Olga (vedoucí práce) ; Schierová, Michaela (oponent)
Regulace vnitrobuněčné hladiny kationtů alkalických kovů (Na+ , K+ ) a protonů v buňkách většiny organismů (od bakterií po savce) závisí na správné lokalizaci a fungování transportérů těchto kationtů v membránách buněk. Cargo receptory jako součást endoplazmatického retikula a váčků COPII rozpoznávají membránové proteiny a usnadňují jim procházet skrze sekreční dráhu do jejich cílových membrán. Rodina cargo receptorů Erv14/Cornichon je konzervovaná napříč eukaryotními organismy a její členové se podílejí na biogenezi několika transportérů monovalentních katiotů. V této diplomové práci jsme podrobně analyzovali strukturu a funkce vybraných cornichonů z kvasinky Saccharomyces cerevisiae (Erv14) a z člověka (CNIH1-4). Pomocí heterologní exprese lidských cargo receptorů CNIH1, CNIH2 a CNIH4 v kvasince S. cerevisiae jsme zjištovali jejich schopnost nahradit úlohu cargo receptoru Erv14 v toleranci buněk k solím, udržování membránového potenciálu a vnitrobuněčného pH. Ze tří lidských cornichonů byly funkce Erv14 v udržování homeostáze monovalentních kationtů nejlépe komplementovány izoformou CNIH1. Exprese proteinů CNIH v S. cerevisiae také ovlivňovala biogenezi a funkci kvasinkového Na+ , K+ /H+ antiporteru Nha1. Navíc jsme odhalili lidský Na+ /H+ antiporter NHA2 jako dalšího interakčního partnera jak...
|
|
|
Charakterizace a funkční analýza genu IST2 v kvasince Saccharomyces cerevisiae.
Andršová, Markéta ; Sychrová, Hana (vedoucí práce) ; Hlaváček, Otakar (oponent)
IST2 je znám jako gen kódující v modelové kvasince Saccharomyces cerevisiae membránový protein, který je studován díky jedinečnému způsobu transportu buňkou, během něhož zřejmě není vůbec využívána klasická sekreční dráha. Přestože gen byl pojmenován před více než deseti lety podle fenotypu buněk s jeho delecí (Increased Sodium Tolerance), dodnes není známo, jakým způsobem produkt genu IST2 ovlivňuje toleranci buněk k toxickému sodíku. Naše rešerše v databázích ukazuje, že podobný protein je kódován i v genomech ostatních druhů kvasinek, žádný však nebyl zatím studován. V této práci byla připravena série čtyř nových kmenů s delecí IST2 v genetickém pozadí lišícím se přítomností genů kódujících transportní systémy pro akumulaci draslíku (Trk1, Trk2), pro export nadbytečných draselných kationtů (Tok1, Ena1-5, Nha1) a pro export toxických kationtů lithia a sodíku (Ena1-5, Nha1). Dále byl připraven plazmid nesoucí kódující sekvenci genu IST2. Pomocí fenotypových testů na pevných i v tekutých médiích byl studován účinek delece IST2 v různých genetických pozadích. Bylo zjištěno, že IST2 zřejmě nemá úlohu v osmotoleranci obecně (absence fenotypu delece ve vysokých koncentracích KCl), ale jeho přítomnost negativně ovlivňuje schopnost buněk vypořádat se s vysokými koncentracemi toxických solí sodíku a...
|
host ::
RSS.