|
| |
|
| |
|
|
Příprava vzorku pro analýzy oligomerních forem amyloidu beta hmotnostní spektrometrií
Mrkvičková, Simona ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Alzheimerova choroba je nejrozšířenější chronické a progresivní neurodegenerativní onemocnění. Hlavní problém této choroby je poškození a snížení počtu nervových buněk. Tím dochází k úbytku mozkové hmoty a rozvíjí se poškození paměti. Onemocnění postihuje především lidi ve starším věku, u nichž bývá nejčastější příčinou demence. Celosvětově tímto onemocněním trpí zhruba 50 milionů lidí, přičemž jejich počet roste. Alzheimerova choroba tak představuje závažný problém veřejného zdraví. Patogeneze této choroby souvisí s produkcí a ukládáním peptidu amyloidu beta. Tento peptid má tendenci agregovat. Jeho nižší oligomerní formy jsou ve vodě rozpustné a působí toxicky na nervové buňky. Oligomery amyloidu beta tak představují možný cíl pro diagnostiku Alzheimerovy choroby. Oligomerní formy amyloidu beta mají nekovalentní charakter, což může negativně ovlivňovat jejich stabilitu při analýzách v modelových a biologických vzorcích. V této bakalářské práci byly hledány vhodné podmínky pro přípravu modelových vzorků amyloidu beta. Bylo pozorováno, jak se mění distribuce oligomerních forem působením rozpouštědel, solí a dalších aditiv. Byl také zkoumán vliv pH na inkubaci amyloidu beta v octanu amonném a ve vodě. Na závěr byla vyvinuta metoda pro analýzu amyloidu beta ve vzorcích mozkomíšního moku bez...
|
|
|
Využití separačních a hmotnostně-spektrometrických technik v diagnostice Alzheimerovy choroby
Lebertová, Lucie ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tato diplomová práce je zaměřena na přípravu kovalentně zesítěných oligomerních forem amyloidu beta a jejich analýzu pomocí SDS-PAGE a MALDI-TOF. Kovalentně zesítěné oligomerní formy Aβ(1-42) byly tvořeny pomocí chemické a enzymatické reakce. Prokřížení řetězců amyloidu beta vzniká přes aminokyselinový zbytek tyrosinu za vzniku kovalentní vazby, přičemž takovéto kovalentní zesítění vede ke stabilizaci oligomerní struktury, což umožňuje zlepšení analýzy oligomerů amyloidu beta. Vývoj metod pro detekci a kvantifikaci oligomerů amyloidu beta může být značným přínosem pro diagnostiku Alzheimerovy choroby, protože právě oligomerní formy amyloidu beta jsou nejvíce spojovány s patologií Alzheimerovy choroby. V teoretické části je popsána Alzheimerova choroba s uvedenými problémy v časné diagnostice a terapii. Dále jsou uvedeny základní informace o amyloidu beta a popsány analytické metody separace a detekce amyloidu beta používané ve výzkumu. Experimentální část se zabývá optimalizací analytických metod MALDI-TOF a SDS-PAGE. V metodě MALDI-TOF byly pro stanovení Aβ(1-42), jako vhodné matrice, vybrány matrice kyselina 2,5-dihydroxybenzoová a kyselina sinapová. Nejvhodnější metoda nanášení vzorku na MALDI desku pro analýzu Aβ(1-42) byla metoda vyschlé kapky. Optimalizací metody SDS-PAGE bylo zjištěno, že...
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
host ::
RSS.