|
|
Funkční charakterizace vybraných Kunitz proteinů Eudiplozoon nipponicum
Tymich, Alexandr ; Mikeš, Libor (vedoucí práce) ; Kašný, Martin (oponent)
Proteiny obsahující Kunitz doménu jsou většinou 6-10 kDa inhibitory serinových proteáz, ale ve výjimečných případech mohou inhibovat i cysteinové a aspartické proteázy. Hlavní charakteristikou je přítomnost šesti cysteinových zbytků tvořících tři disulfidické můstky formující typickou aktivní smyčku, která je komplementární k aktivnímu místu různých proteáz. Specifita této vazby je do velké míry určena aminokyselinou v P1 poloze. Mezi jejich funkce patří regulace řady fyziologických dějů založených na proteolýze, např. koagulační kaskády krve nebo imunitních reakcí. Vzhledem ke své povaze se však také staly mocným nástrojem parazitických organismů k interakcím s jejich hostitelem, kde opět cílí na proteázy účastnící se fyziologických dějů hostitele a umožňují tak parazitovi přežít v interakci s hostitelem. Donedávna byli zástupci třídy Monogenea z hlediska molekulárních interakcí parazit-hostitel opomíjenou skupinou a jejich biochemií a popisu biologicky aktivních molekul se věnovalo pouze pár prací. V této práci jsem se zaměřil na dva vybrané Kunitz proteiny u Eudiplozoon nipponicum, krevsajícího ektoparazita z třídy Monogenea, který se stal celkem běžným parazitem kapra obecného (Cyprinus carpio), ryby s velkým ekonomickým významem v Evropě a Asii. Přestože E. nipponicum není přímo zodpovědný za...
|
|
|
Antikoagulační faktory a příjem krve u monogeneí čeledi Diplozoidae
Skipalová, Karolína ; Mikeš, Libor (vedoucí práce) ; Sojka, Dan (oponent)
K úspěšnému přijímání potravy je pro hematofágní organismy nezbytná přítomnost antihemostatických molekul mezi které patří vasodilatační, antikoagulační molekuly a apyrázy. Přestože zástupci čeledi Diplozoidae (Heteronchoinea) sají krev na žábrách ryb, žádné podobné látky blokující hostitelskou hemostázu, u nich nebyly dosud identifikovány. Cílem této práce proto byla charakterizace molekul s potencionální antikoagulační aktivitou v homogenátu a exkrečně/sekrečních produktech (ESP) zástupců čeledi Diplozoidae. Dále pak provést bioinformatickou analýzu sekvencí získaných v transkriptomovém projektu Eudiplozoon nipponicum a vybrané proteiny (proteinové domény) získat v rekombinantní podobě. Inhibiční aktivita v ESP a homogenátech měřená proti koagulačním faktorům IIa a Xa spolu s jejich fluorogenními substráty byla prokázána pouze v jednou případě z pěti měření. Z 2 transkriptomového projektů jsme vyčlenily tři skupiny inhibitorů serinových proteáz - annexiny, serpiny, Kunitz-type protein, které by mohly patřit mezi kandidáty na inhibitory koagulační kaskády. Prací jsme zaměřili na inhibitory Kunitz typu, které se vyznačují přítomností vysoce konzervované doménu odpovídající za inhibici. Samotnou Kunitz doménu z vybraného proteinu jsme se následně pokusili exprimovat v rekombinantí formě v...
|
|
|
Antikoagulační faktory a příjem krve u monogeneí čeledi Diplozoidae
Skipalová, Karolína ; Mikeš, Libor (vedoucí práce) ; Sojka, Dan (oponent)
K úspěšnému přijímání potravy je pro hematofágní organismy nezbytná přítomnost antihemostatických molekul mezi které patří vasodilatační, antikoagulační molekuly a apyrázy. Přestože zástupci čeledi Diplozoidae (Heteronchoinea) sají krev na žábrách ryb, žádné podobné látky blokující hostitelskou hemostázu, u nich nebyly dosud identifikovány. Cílem této práce proto byla charakterizace molekul s potencionální antikoagulační aktivitou v homogenátu a exkrečně/sekrečních produktech (ESP) zástupců čeledi Diplozoidae. Dále pak provést bioinformatickou analýzu sekvencí získaných v transkriptomovém projektu Eudiplozoon nipponicum a vybrané proteiny (proteinové domény) získat v rekombinantní podobě. Inhibiční aktivita v ESP a homogenátech měřená proti koagulačním faktorům IIa a Xa spolu s jejich fluorogenními substráty byla prokázána pouze v jednou případě z pěti měření. Z 2 transkriptomového projektů jsme vyčlenily tři skupiny inhibitorů serinových proteáz - annexiny, serpiny, Kunitz-type protein, které by mohly patřit mezi kandidáty na inhibitory koagulační kaskády. Prací jsme zaměřili na inhibitory Kunitz typu, které se vyznačují přítomností vysoce konzervované doménu odpovídající za inhibici. Samotnou Kunitz doménu z vybraného proteinu jsme se následně pokusili exprimovat v rekombinantí formě v...
|
host ::
RSS.