|
|
Atelocollagen separation and characterization
Konečná, Zuzana ; Zubal, Lukáš (referee) ; Vojtová, Lucy (advisor)
The aim of the presented bachelor thesis was to optimize separation of soluble atelocollagen out of commercially available bovine collagen and its characterization. Collagen went through an enzymatic digestion using pepsin as a protease and subsequently purified by filtration, centrifugation and dialysis. Obtained samples were characterized using infrared spectrometry, polyacrylamide gel electrophoresis and Hartree-Lowry assay for total protein determination. Suitable digestion time range to gain sufficient yields was decided from 60 – 70 hours at pepsin/collagen weight ratio 1:25. Highest yield (72.6 %) was obtained at mentioned ratio after 66 hours of reaction. Sufficient filtration, which was decisive for final product purity, was assured by combination of several filtration techniques with centrifugation. Quality of prepared product according to their molecular weight was characterized by gel electrophoresis. Solubility and its dependence on pH and NaCl concentration in solution were measured by Hartree – Lowry assay. Ratio between helical collagen and denaturated collagen was measured by infrared spectroscopy. Obtained spectra yet did not seem fully reliable and provided only a rough estimate. More accurate information about structure could be achieved by using circular dichroism spectroscopy.
|
|
|
Atelocollagen processing, gelation and characterization
Zubal, Lukáš ; Podzimek,, Štěpán (referee) ; Migliaresi, Claudio (referee) ; Vojtová, Lucy (advisor)
Předkládaná disertační práce se zabývá charakterizací, zpracováním a gelací rozpustného kolagenu. Literární rešerše shrnuje postavení kolagenu na trhu s transplantáty, jeho aplikace a jednotlivé typy kolagenu. Detailně jsou rozebrány jednotlivé metody charakterizace rozpustného kolagenu a způsoby jeho gelace. Experimentální část je rozdělena na dvě podkapitoly. První podkapitola experimentální části se zabývá rozpouštěním a gelací rozpustného kolagenu v natlakované CO2 atmosféře. Proti jiným podobným metodám, metoda pracuje na poměrně nízkém tlaku (do 0.9MPa) a je bezpečná z pohledu denaturace kolagenu neboť funguje za nízké teploty blízké 0°C. Tímto způsobem mohou být průhledné gely, obsahující velmi tenká vlákna kolagenu, vytvořeny mnohem rychleji než za použití konvenčních metod. Rychlost gelace a transparentnost dává konceptu potenciál v oblasti oftalmologie a měla by přinést podstatné výhody pro injektovatelné produkty, vytváření mikro kuliček a 3D tisk. Druhá část popisuje unikátní charakterizaci rozpustného kolagenu v nativním stavu pomocí metody průtokové frakcionace s víceúhlovým rozptylem světla (AF4-MALS). Získaná molekulová hmotnost (při nejvyšší detekované koncentraci) odpovídá předpovězené hmotnosti a nativní i denaturovaný kolagen lze snadno rozeznat v konformačním grafu. Tato nová metoda poskytuje konzistentní a stabilní výsledky ve srovnání s ostatními zavedenými metodami. Metoda může být použita pro optimalizaci kvality výtěžků během výroby rozpustného kolagenu, nebo pro citlivou detekci denaturace během zpracování kolagenu.
|
|
|
Atelocollagen processing, gelation and characterization
Zubal, Lukáš ; Podzimek,, Štěpán (referee) ; Migliaresi, Claudio (referee) ; Vojtová, Lucy (advisor)
Předkládaná disertační práce se zabývá charakterizací, zpracováním a gelací rozpustného kolagenu. Literární rešerše shrnuje postavení kolagenu na trhu s transplantáty, jeho aplikace a jednotlivé typy kolagenu. Detailně jsou rozebrány jednotlivé metody charakterizace rozpustného kolagenu a způsoby jeho gelace. Experimentální část je rozdělena na dvě podkapitoly. První podkapitola experimentální části se zabývá rozpouštěním a gelací rozpustného kolagenu v natlakované CO2 atmosféře. Proti jiným podobným metodám, metoda pracuje na poměrně nízkém tlaku (do 0.9MPa) a je bezpečná z pohledu denaturace kolagenu neboť funguje za nízké teploty blízké 0°C. Tímto způsobem mohou být průhledné gely, obsahující velmi tenká vlákna kolagenu, vytvořeny mnohem rychleji než za použití konvenčních metod. Rychlost gelace a transparentnost dává konceptu potenciál v oblasti oftalmologie a měla by přinést podstatné výhody pro injektovatelné produkty, vytváření mikro kuliček a 3D tisk. Druhá část popisuje unikátní charakterizaci rozpustného kolagenu v nativním stavu pomocí metody průtokové frakcionace s víceúhlovým rozptylem světla (AF4-MALS). Získaná molekulová hmotnost (při nejvyšší detekované koncentraci) odpovídá předpovězené hmotnosti a nativní i denaturovaný kolagen lze snadno rozeznat v konformačním grafu. Tato nová metoda poskytuje konzistentní a stabilní výsledky ve srovnání s ostatními zavedenými metodami. Metoda může být použita pro optimalizaci kvality výtěžků během výroby rozpustného kolagenu, nebo pro citlivou detekci denaturace během zpracování kolagenu.
|
|
|
Atelocollagen separation and characterization
Konečná, Zuzana ; Zubal, Lukáš (referee) ; Vojtová, Lucy (advisor)
The aim of the presented bachelor thesis was to optimize separation of soluble atelocollagen out of commercially available bovine collagen and its characterization. Collagen went through an enzymatic digestion using pepsin as a protease and subsequently purified by filtration, centrifugation and dialysis. Obtained samples were characterized using infrared spectrometry, polyacrylamide gel electrophoresis and Hartree-Lowry assay for total protein determination. Suitable digestion time range to gain sufficient yields was decided from 60 – 70 hours at pepsin/collagen weight ratio 1:25. Highest yield (72.6 %) was obtained at mentioned ratio after 66 hours of reaction. Sufficient filtration, which was decisive for final product purity, was assured by combination of several filtration techniques with centrifugation. Quality of prepared product according to their molecular weight was characterized by gel electrophoresis. Solubility and its dependence on pH and NaCl concentration in solution were measured by Hartree – Lowry assay. Ratio between helical collagen and denaturated collagen was measured by infrared spectroscopy. Obtained spectra yet did not seem fully reliable and provided only a rough estimate. More accurate information about structure could be achieved by using circular dichroism spectroscopy.
|
guest ::
