|
|
Detekce GMO v potravinách a krmivech pomocí PCR
ŠKRNOVÁ, Dominika
Geneticky modifikované organismy (GMO) se v mnoha zemích staly kontroverzním tématem, protože jejich přínosy pro výrobce potravin i pro spotřebitele jsou spojeny s potenciálními biomedicínskými riziky a vedlejšími účinky na životní prostředí. V této práci se snažím shrnout aktuální poznatky o geneticky modifikovaných (GM) plodinách a představit různé metody detekce GMO v potravinách a krmivech. V praktické části této práce bylo z různých zdrojů náhodně odebráno třicet vzorků potravin a krmiv obsahujících kukuřici. Cílem mé práce bylo tyto vzorky otestovat na přítomnost GMO, ověřit údaje uvedené na jejich obalech a zjistit, zda jsou v souladu s legislativou EU, která požaduje označování produktů obsahujících více než více než 0,9% GM materiálu. Dalším cílem byla optimalizace metody izolace DNA z testovaných vzorků. Pro izolaci genomové DNA ze vzorků jsem použila NucleoSpin Food Kit a automatický izolátor nukleových kyselin MagCore. Koncentrace extrahované DNA byla změřena za využití absorbce UV světla pomocí spektrofotometru BioSpec-nano. Gen pro zásobní protein kukuřice zein byl použit k potvrzení přítomnosti amplifikovatelné kukuřičné DNA. Po extrakci DNA následovalo provedení PCR používající různé sady primerů k detekci čtyř různých GM odrůd kukuřice: Bt11, Bt176, Mon810 a T25. Elektroforéza na agarózovém gelu byla použita k separaci DNA fragmentů, které byly následně vizualizovány za použití manuálního gelového dokumentačního systému InGenius. Navzdory současným nařízením, ani jeden ze tří pozitivních vzorků, u kterých byla prokázána přítomnost kukuřice MON810, neměl na svém obalu označení. U vzorků, které měly na obalu uvedeno "GMO free", skutečně nebyla prokázána přítomnost ani jedné z vyšetřovaných GM odrůd kukuřice.
|
|
|
Making Transgenic \kur{C. elegans} with Polycistronic mCherry Vector
FARKA, Dominik
Creation of transgenic animals has become a popular method to analyse gene function. In the nematode Ceanorhabditis elegans transformation is widely used and can be achieved by microinjection. For functional analyses, transgene constructs typically contain a promoter driving the expression of the protein of interest that is fused to a fluorescent protein. However, as this fusion of proteins can lead to misfolding of the protein of interest and may not reflect proper function, a modification of the expression vector has been developed; introducing a short sequence of non-coding DNA in-between the sequences of the two proteins and making the construct compatible with a polycistronic operon system. In this study, four different polycistronic constructs were introduced into C. elegans by means of microinjection in order to provide new tools for the analyses of gene function. Tissue specific promoters wrt-2 (seam cells), grl-21 (hyp7), and egl-17 (vulval precursor cells) were used to over-express either NHR-25 or SMO-1 in the corresponding tissues and the expression was visualized by independently translated mCherry red fluorescent. 10 independent transformed C. elegans strains were established and corresponding tissue-specific promoter activities were confirmed. Furthermore, in some cases, ectopic behaviour was observed e.g. ectopic mCherry expression in different tissues or specific cell differentiation defects that was most likely caused by the overexpression of NHR-25 or SMO-1. This study was the first case in our laboratory to generate transformed C. elegans utilizing the polycistronic mCherry vector system. New genetic tools were introduced in the laboratory useful for further analyses of gene function.
|
host ::
RSS.