|
|
Geny kodující acetyhydroxy syntázu u Streptomyces cinnamonensis a jejich regulační oblast:Mutace v katalytické podjednotce zjią»ující necitlivost k inhibici konečného produktu
Kyselková, Martina ; Kopecký, Jan ; Šigutová, Lucie ; Pospíšil, Stanislav ; Felsberg, Jürgen ; Spížek, Jaroslav ; Janata, Jiří
Geny ilvB kódující katalytickou podjednotku AHAS u rodičovského kmene S. cinnamonensis a čtyř mutantů s deregulovanou biosyntetickou drahou valinu byly sekvenovány. Mutace byly nalezeny u dvou kmenů, jejichž AHAS byla v hrubém buněčném extraktu zdánlivě aktivována valinem. U kmene BVR-18 byla nalezena mutace C574A vedoucí v proteinu k substituci E139A. U kmene ACB-NLR-2 došlo k deleci tripletu AGC v pozici 805-807, což v proteinu vedlo k deleci Q217. Podle homologního modelu katalytické podjednotky, vytvořeného na základě krystalové struktury dimeru katalytických podjednotek AHAS u Saccharomyces cerevisiae, se substituce E139A vyskytla ve smyčce na rozhraní podjednotek poblíž TPP vazebného místa, zatímco ?Q217 v helixu odlehlém od aktivního místa. Jednotlivé podjednotky byly exprimovány v E. coli za účelem rekonstituce enzymů in vitro, jejichž aktivita v přítomnosti a nepřítomnosti 10 mM valinu byla měřena. Podařilo se prokázat, že substituce E139A je zodpovědná za zdánlivou aktivaci AHAS valinem pozorovanou u kmene BVR-18. U kmenů ACBR-2 a NLR-3 se zvýšenou hladinou aktivity AHAS nebyla zjištěna žádná mutace v katalytické podjednotce. Regulační oblast před genem ilvB těchto dvou kmenů a kmene rodičovského byla sekvenována. V rámci této oblasti byly nalezeny některé prvky atenuátoru, ale sekvence se u kmenů ACBR-2 a NLR-3 shodovala se sekvencí rodičovského kmene. Zdá se tedy, že regulace exprese AHAS je zajištěna ještě jiným mechanismem, než je atenuace.
|
host ::
RSS.