|
|
Phosphorylation of eukaryotic initiation factor 2α by alternative phosphate sources catalyzed by heme-regulated kinase: kinetic analysis
Ovad, Tomáš ; Martínková, Markéta (vedoucí práce) ; Heidingsfeld, Olga (oponent)
diplomová práce Ing. Bc. Tomáš Ovad Fosforylace eukaryotického iniciačního faktoru 2α alternativními zdroji fosfátu katalyzovaná kinasou regulovanou hemem: kinetická analýza Tato diplomová práce je zaměřena na fosforylaci eukaryotického iniciačního faktoru 2α (eIF2α) inhibitorem regulovaným hemem (HRI), která je klíčovou reakcí v regulaci eukaroytické pro- teosyntézy. V předešlých studiích byly stanoveny kinetické parametry této reakce v přítomno- sti ATP jako donoru fosfátu. Nebyla však studována možnost využití alternativních NTP (GTP, UTP, CTP) jako zdrojů fosfátu pro tuto reakci. V této diplomové práci byl hetero- logní expresí v E. coli získán wild-type enzym HRI a byla studována jeho kinasová aktivita v přítomnosti ATP, GTP, UTP a CTP. Byly určeny kinetické parametry a střední inhibiční koncentrace hemu pro reakci katalyzovanou HRI v přítomnosti jednotlivých NTP jako zdrojů fosfátu. Pro validaci těchto kinetických experimentů byly vyloučeny kontaminace ATP v roz- tocích GTP, UTP a CTP pomocí iontově párové chromatografie. Ukázalo se, že ačkoli ATP je nejefektivnějším zdrojem fosfátu pro kinasovou aktivitu HRI, i zbývající NTP (GTP, UTP, CTP) mohou být v dané reakci využity jako donory fosfátu. Tato...
|
host ::
RSS.