|
|
Příprava a studium vlastností kyanidhydratasy z Aspergillus niger a nitrilasy z Arthroderma benhamiae
Hradilová, Iveta ; Vaněk, Ondřej (vedoucí práce) ; Martínek, Václav (oponent)
Nitrilasy jsou dobře známé pro svou jedinečnou schopnost účinně katalyzovat nitrilové sloučeniny na odpovídající karboxylové kyseliny za uvolnění amoniaku. V některých případech mohou vznikat i amidy jako vedlejší produkty. Během chemické reakce nitrilasy nevyžadují přítomnost kofaktorů ani prostetických skupin na rozdíl od nitrilhydratas. Tato práce je zaměřena na nitrilasu z vláknité houby Arthroderma benhamiae a kyanidhydratasu z organismu Aspergillus niger K10. Geny těchto vláknitých hub byly exprimovány pomocí plasmidu pET-30a(+) v bakteriích Escherichia coli BL21-Gold (DE3). Získané produkty byly purifikovány sérií iontově výměnných chromatochrafií a gelové filtrace a následně charakterizovány zejména se zřetelem na jejich oligomerní stav a využití pro proteinovou krystalografii. K získání informací ohledně strukturního uspořádání jednotlivých proteinů byla použita elektroforetická separace v polyakrylamidovém gelu, gelová filtrace, analytická ultracentrifugace, hmotnostní spektrometrie, dynamický rozptyl světla a Ramanova spektroskopie kapkově nanášených povlaků. Klíčová slova: nitrilasa, kyanidhydratasa, Aspergillus niger, Arthroderma benhamiae, kapalinová chromatografie
|
|
|
Enzymatic detoxification of cyanide using cyanide hydratases
Sedova, Anastasia ; Rucká, Lenka ; Glozlová, Michaela ; Novotný, Petr ; Martínková, Ludmila ; Bojarová, Pavla
Cyanide, a strong chelator of metals in vital enzymes and proteins, is very toxic for most living organisms. Wastewaters from the mining, metallurgical and chemical industries contain significant concentrations of free cyanide. Though it can be largely eliminated by physicochemical methods, these processes may in turn lead to the formation of other waste. In addition, no effective methods have been found to neutralize cyanide spills coming from industrial accidents. The use of enzymes to remove cyanide is an attractive alternative, which is environmentally friendly and applicable to high cyanide concentrations. Cyanide hydratases (CynHs) are of considerable interest for the decomposition of hazardous cyanide wastes. Here we investigate the biochemical properties of new CynHs from Stereum hirsutum and Exidia glandulosa, it is of fundamental importance to preserve the enzyme activity at alkaline pH as cyanide waste is stored under these conditions.
|
|
|
Příprava a studium vlastností kyanidhydratasy z Aspergillus niger a nitrilasy z Arthroderma benhamiae
Hradilová, Iveta ; Vaněk, Ondřej (vedoucí práce) ; Martínek, Václav (oponent)
Nitrilasy jsou dobře známé pro svou jedinečnou schopnost účinně katalyzovat nitrilové sloučeniny na odpovídající karboxylové kyseliny za uvolnění amoniaku. V některých případech mohou vznikat i amidy jako vedlejší produkty. Během chemické reakce nitrilasy nevyžadují přítomnost kofaktorů ani prostetických skupin na rozdíl od nitrilhydratas. Tato práce je zaměřena na nitrilasu z vláknité houby Arthroderma benhamiae a kyanidhydratasu z organismu Aspergillus niger K10. Geny těchto vláknitých hub byly exprimovány pomocí plasmidu pET-30a(+) v bakteriích Escherichia coli BL21-Gold (DE3). Získané produkty byly purifikovány sérií iontově výměnných chromatochrafií a gelové filtrace a následně charakterizovány zejména se zřetelem na jejich oligomerní stav a využití pro proteinovou krystalografii. K získání informací ohledně strukturního uspořádání jednotlivých proteinů byla použita elektroforetická separace v polyakrylamidovém gelu, gelová filtrace, analytická ultracentrifugace, hmotnostní spektrometrie, dynamický rozptyl světla a Ramanova spektroskopie kapkově nanášených povlaků. Klíčová slova: nitrilasa, kyanidhydratasa, Aspergillus niger, Arthroderma benhamiae, kapalinová chromatografie
|
host ::
RSS.