|
|
Role β-podjednotky komplexu asociovaného s nascentním polypeptidem (NAC) při odpovědi huseníčku rolního na různé abiotické stresy
Šesták, Petr ; Fíla, Jan (vedoucí práce) ; Vosolsobě, Stanislav (oponent)
Komplex asociovaný s nascentním polypeptidem (NAC) je heterodimerní komplex složený z α- a β-podjednotky. Je konzervovaný napříč eukaryotními organismy a byl nalezen i u archeí. Tento komplex se váže na nově syntetizované proteiny vystupující z ribozomu a podílí se na jejich cílení do endoplasmatického retikula. U rostlin je komplex NAC studován v souvislosti s odolností vůči různým abiotickým stresům. V naší laboratoři jsme dříve charakterizovali T-DNA inserčního mutanta huseníčku rolního (Arabidopsis thaliana) v obou genech kódujících NACβ, který vykazoval řadu fenotypových defektů. Mezi nimi se objevil například větší počet květních orgánů, zhoršená klíčivost pylových zrn a tvorba kratších šešulí s menším počtem obsažených semen. Cílem této diplomové práce bylo charakterizovat roli β-podjednotky komplexu NAC u huseníčku rolního při klíčení semen za osmotického a solného stresu. Prokázali jsme, že absence NACβ vede ke snížení klíčivosti semen a k prodloužení doby klíčení, stejně jako nadexprese této podjednotky. Dále jsme studovali, zda stresové podmínky ovlivňují hladinu transkriptu jednotlivých genů pro obě podjednotky NAC za využití metody RT-qPCR. Abychom zjistili, jakými molekulárními mechanismy by mohl studovaný komplex ovlivňovat odpověď rostliny na stresové podmínky, rozhodli jsme se...
|
|
|
Proteinová rodina HSP70 a její role v biotických interakcích
Čičmanec, Petr
Proteiny tepelného šoku 70 (HSP70s) jsou všudypřítomné a rozšířené proteiny napříč prokaryotickými a eukaryotickými organismy. Nashromážděné důkazy naznačují, že tyto proteiny se podílejí na mnohem více než na reakci na tepelný šok. Tato práce charakterizuje roli HSP70 v reakci na různé podněty a poskytuje pohled na roli HSP70 při regulaci interakce mezi biotickými a abiotickými faktory. Teoretická část shrnuje současné poznatky o HSP70 včetně informací o jeho struktuře, aktivitě, posttranslačních modifikacích a tzv. chaperone kódu. Popisuje funkce HSP70 a věnuje zvláštní pozornost roli HSP70 v imunitě a biotických interakcích. Experimentální část je rozdělena do několika částí. Za prvé, bioinformatická analýza poskytuje srovnání HSP70 a jeho role v biotickém stresu napříč říšemi. Tato část je doplněna analýzou distribuce a abundance HSP70 na úrovni proteomu. Dále je prezentován účinek různých stimulů na abundanci proteinu HSP70 v různých modelových organismech, včetně E. coli, S. cerevisiae, A. thaliana, Pisum sativum a Linum usitatissimum. Nakonec jsou analyzovány účinky mutace hsp70, které poskytují vhled do složitosti mechanismu HSP70 a potvrzují jeho roli v biotické interakci mezi modelovou rostlinou a houbami.
|
|
|
Studying dimer formation and effectors of Arabidopsis thaliana nascent polypeptide-associated complex
Klodová, Božena ; Fíla, Jan (vedoucí práce) ; Robert Boisivon, Helene (oponent)
in Czech language Vývoj rostlinných květů představuje dynamický proces regulovaný řadou rozličných mechanismů. V předchozí studii se podařilo získat dvojitého homozygotního mutanta huseníčku rolního (Arabidopsis thaliana) v genech kódujících obě β- podjednotky komplexu asociovaného s nascentním polypeptidem (NAC). Tento mutant se vyznačoval docela výrazným defektním fenotypem; byly pozorovány odchylky od standardního počtu květních orgánů, kratší šešule s nižším počtem semen a zhoršená klíčivost pylu spolu s nižší efektivitou cílení pylové láčky do zárodečného vaku. Komplex NAC byl původně popsán v kvasince Saccharomyces cerevisiae jako heterodimer složený z α- a β-podjednotky, který se váže na ribozom a vykazuje chaperonovou funkci. NACβ podjednotka se v rostlinách podílí na regulaci stresové odpovědi, rozmnožování a regulaci vývoje, a to pravděpodobně mechanismem transkripční regulace. Role NAC heterodimeru v rostlinách ale zatím nebyla příliš prozkoumána. Tato diplomová práce si tak klade za cíl ověřit tvorbu NAC komplexu v huseníčku rolním a případně ustanovit vazebné preference mezi dvěma paralogy NACβ podjednotky a pěti paralogy NACα podjednotky. Využity byly dvě metody studia proteinových interakcí - kvasinkový dvouhybridní systém (Y2H) a bimolekulární fluorescenční komplementace (BiFC)....
|
|
|
Functional analysis of Ssc1 and Iba57 proteins in \kur{Trypanosoma brucei}
SKALICKÝ, Tomáš
Aim of this thesis was to shed light on the function(s) of Iba57 and Ssc1 proteins in both life cycle stages of T. brucei using RNA interference. Depletion of Ssc1 resulted in severe grow phenotype, decrease in activities of iron-sulphur cluster-containing enzyme aconitase but no increase in oxidative stress sensitivity or accumulation of ROS in mitochondrion. Down regulation of Iba57, specialized maturation factor of aconitase and homoaconitase, lead to depletion of aconitase, destabilization of Isa1 and increased sensitivity to oxidative stress and accumulation of ROS in both stages.
|
host ::
RSS.