|
|
Úloha adrenergního systému v genetické hypertenzi
Loučková, Anna ; Kadlecová, Michaela (vedoucí práce) ; Husková, Zuzana (oponent)
Adrenergní systém hraje významnou roli v regulaci krevního tlaku. U spontánně hypertenzního potkana, nejvíce studovaného modelu esenciální hypertenze, je mnoho součástí adrenergního systému změněno. Změny v úrovni exprese některého z enzymů biosyntetické dráhy katecholaminů nebo některého podtypu adrenergních receptorů by mohly být jednou z příčin vzniku hypertenze. V této práci byla měřena exprese genů adrenergního systému v nadledvině, kůře ledvin a dřeni ledvin u třináctitýdenních spontánně hypertenzních (SHR), Wistar-Kyoto a Brown Norway potkanů. V nadledvině SHR byla snížená exprese všech enzymů biosyntetické dráhy katecholaminů (tyrosinhydroxylasy, DOPA-dekarboxylasy, dopamin-β-hydroxylasy a fenyletanolamin-N-metyltransferasy) a téměř všech podtypů adrenergních receptorů (kromě Adra1a a Adra1d). Toto celkové snížení exprese v nadledvině SHR naznačuje, že alespoň část regulace exprese genů adrenergního systému je společná. Mechanismem útlumu exprese u SHR může být zpětná vazba přes adrenergní receptory stimulované vysokou plasmatickou koncentrací noradrenalinu. V ledvině SHR nebyl zjištěn rozdíl v expresi většiny podtypů adrenergních receptorů s výjimkou Adrb1 a Adra2c, jejichž exprese byla zvýšená. Tento rozdíl v expresi je spíše důsledkem nebo průvodním jevem než příčinou vzniku hypertenze.
|
|
|
Příprava vazebných partnerů 14-3-3 proteinů pro strukturní studie.
Kopecká, Miroslava ; Obšil, Tomáš (vedoucí práce) ; Teisinger, Jan (oponent)
Tyrosinhydroxylasa patří do skupiny hydroxylas aromatických aminokyselin a katalyzuje počáteční krok biosyntézy katecholaminových neuropřenašečů. Tento enzym má homoteramerní strukturu a skládá se ze tří strukturních domén: N-koncové regulační domény, katalytické domény a C-koncové tetramerizační domény. Aktivita tyrosinhydroxylasy je regulována fosforylací a regulací na úrovni exprese. Fosforylace Ser-19 umožňuje navázání proteinu 14-3-3, které ovlivňuje strukturu regulační domény a chrání ji před její defosforylací a degradací. Struktura regulační domény je stále neznámá, proto jsme se rozhodli pro její objasnění pomocí technik nukleární magnetické rezonance. Byl optimalizován expresní a purifikační protokol regulační domény tyrosinhydroxylasy. Protein byl exprimován jako fúzní protein obsahující histidinovou kotvu na N-konci polypetidového řetězce. Purifikace se skládala ze dvou kroků: z niklové chelatační chromatografie a gelové permeační chromatografie. Dynamický rozptyl světla a 1 H-NMR spektroskopie byly využity k ověření monodisperzity proteinu a jeho možného použití pro další experimenty.
|
|
|
Úloha adrenergního systému v genetické hypertenzi
Loučková, Anna ; Kadlecová, Michaela (vedoucí práce) ; Husková, Zuzana (oponent)
Adrenergní systém hraje významnou roli v regulaci krevního tlaku. U spontánně hypertenzního potkana, nejvíce studovaného modelu esenciální hypertenze, je mnoho součástí adrenergního systému změněno. Změny v úrovni exprese některého z enzymů biosyntetické dráhy katecholaminů nebo některého podtypu adrenergních receptorů by mohly být jednou z příčin vzniku hypertenze. V této práci byla měřena exprese genů adrenergního systému v nadledvině, kůře ledvin a dřeni ledvin u třináctitýdenních spontánně hypertenzních (SHR), Wistar-Kyoto a Brown Norway potkanů. V nadledvině SHR byla snížená exprese všech enzymů biosyntetické dráhy katecholaminů (tyrosinhydroxylasy, DOPA-dekarboxylasy, dopamin-β-hydroxylasy a fenyletanolamin-N-metyltransferasy) a téměř všech podtypů adrenergních receptorů (kromě Adra1a a Adra1d). Toto celkové snížení exprese v nadledvině SHR naznačuje, že alespoň část regulace exprese genů adrenergního systému je společná. Mechanismem útlumu exprese u SHR může být zpětná vazba přes adrenergní receptory stimulované vysokou plasmatickou koncentrací noradrenalinu. V ledvině SHR nebyl zjištěn rozdíl v expresi většiny podtypů adrenergních receptorů s výjimkou Adrb1 a Adra2c, jejichž exprese byla zvýšená. Tento rozdíl v expresi je spíše důsledkem nebo průvodním jevem než příčinou vzniku hypertenze.
|
|
|
Příprava vazebných partnerů 14-3-3 proteinů pro strukturní studie.
Kopecká, Miroslava ; Obšil, Tomáš (vedoucí práce) ; Teisinger, Jan (oponent)
Tyrosinhydroxylasa patří do skupiny hydroxylas aromatických aminokyselin a katalyzuje počáteční krok biosyntézy katecholaminových neuropřenašečů. Tento enzym má homoteramerní strukturu a skládá se ze tří strukturních domén: N-koncové regulační domény, katalytické domény a C-koncové tetramerizační domény. Aktivita tyrosinhydroxylasy je regulována fosforylací a regulací na úrovni exprese. Fosforylace Ser-19 umožňuje navázání proteinu 14-3-3, které ovlivňuje strukturu regulační domény a chrání ji před její defosforylací a degradací. Struktura regulační domény je stále neznámá, proto jsme se rozhodli pro její objasnění pomocí technik nukleární magnetické rezonance. Byl optimalizován expresní a purifikační protokol regulační domény tyrosinhydroxylasy. Protein byl exprimován jako fúzní protein obsahující histidinovou kotvu na N-konci polypetidového řetězce. Purifikace se skládala ze dvou kroků: z niklové chelatační chromatografie a gelové permeační chromatografie. Dynamický rozptyl světla a 1 H-NMR spektroskopie byly využity k ověření monodisperzity proteinu a jeho možného použití pro další experimenty.
|
host ::
RSS.