|
|
Vliv dusíkatých látek v kultivačním médiu na aktivitu fosfoenolpyruvátkarboxylasy a metabolicky souvisejících enzymů v rostlinách tabáku
Garčeková, Květa ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce) ; Synková, Helena (oponent)
In Czech - ABSTRAKT Metabolismus rostlin pěstovaných v kultivačním médiu je ovlivněn jeho složením a také přístupem CO2. V tomto projektu byl sledován vliv kultivačního média na aktivitu fosfoenolpyruvátkarboxylasy (PEPC, EC 4.1.1.31), NADP-dependentní malátdehydrogenasy (oxalacetát dekarboxylační) (NADP-ME, EC 1.1.1.40), pyruvát, fosfátdikinasy (PPDK, EC 2.7.9.1) a enzymů metabolismu dusíku: nitrátreduktasy (NR, EC 1.7.1.1), glutaminsynthetasy (GS, EC 6.3.1.2), glutamátsynthasy (GOGAT, EC 1.4.1.13) a glutamátdehydrogenasy (GDH, EC 1.4.1.2). Rostliny tabáku Nicotiana tabacum L., cv. Petit Havana SR1, byly pěstované in vitro v kultivačních nádobkách opatřených filtrem, který zajistil limitovaný přístup CO2. Kultivačním médiem byl modifikovaný Murashige-Skoogův agar s přítomností či bez přítomnosti 1,5% sacharosy jako dodatečného zdroje uhlíku a se sníženým množstvím zdroje fosfátů, amonných iontů, dusičnanů, nebo s přidaným kaseinem. Sacharosa v kultivačním médiu znamenala vyšší aktivitu PEPC než v rostlinách pěstovaných bez sacharosy. Snížená koncentrace fosfátů, nitrátů, amonných iontů nebo přítomnost kaseinu jako výhradního zdroje dusíku v kultivačním médiu však způsobila snížení aktivity PEPC v listech i kořenech rostlin tabáku. Za těchto podmínek poklesla i aktivita NADP-ME a aktivity enzymů metabolismu...
|
|
|
Vliv biotického stresu na metabolismus dusíkatých látek v rostlinách tabáku
Fiala, Martin ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce) ; Müller, Karel (oponent)
V tomto projektu byl studován vliv virové infekce na metabolismus dusíkatých látek v rostlinách tabáku (Nicotiana tabacum L., cv. Petit Havana SR1). Skupina rostlin tabáku byla infikována Y virem bramboru, kmenem NTN. Přítomnost viru byla potvrzena metodou ELISA. Pro studium byla vybrána skupina enzymů, které jsou v C4 rostlinách součástí Hatchova-Slackova cyklu (fosfoenolpyruvátkarboxylasa (EC 4.1.1.31, PEPC), NADP- malátdehydrogenasa (oxalacetát dekarboxylační) (EC 1.1.1.40, NADP-ME), pyruvát, fosfátdikinasa (EC 2.7.9.1, PPDK). V C3 rostlinách tyto enzymy souvisejí s odpovědí rostliny na stresové podmínky. V důsledku virové infekce došlo ke zvýšení aktivity těchto enzymů. Infekce PVYNTN způsobila snížení aktivity nitrátreduktasy (EC 1.7.1.1, NR), enzymu fixace dusíkatých látek redukujícího dusičnany na dusitany. Dále byly v této práci sledovány enzymy katalyzující syntézu glutamátu a glutaminu z amonných iontů: glutaminsynthetasa (EC 6.3.2.1, GS) a glutamátsynthasa (EC 1.4.1.14, GOGAT). U obou těchto enzymů došlo ke zvýšení jejich aktivity vlivem virové infekce. Mimo tuto hlavní cestu fixace dusíku může ještě rostlina využívat enzym glutamátdehydrogenasu (EC 1.4.1.2, GDH). Enzym katalyzuje také opačnou reakci, deaminaci glutamátu. Směr reakce záleží především na podmínkách prostředí. Také u...
|
|
|
Vliv dusíkatých látek v kultivačním médiu na aktivitu fosfoenolpyruvátkarboxylasy a metabolicky souvisejících enzymů v rostlinách tabáku
Garčeková, Květa ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce) ; Synková, Helena (oponent)
In Czech - ABSTRAKT Metabolismus rostlin pěstovaných v kultivačním médiu je ovlivněn jeho složením a také přístupem CO2. V tomto projektu byl sledován vliv kultivačního média na aktivitu fosfoenolpyruvátkarboxylasy (PEPC, EC 4.1.1.31), NADP-dependentní malátdehydrogenasy (oxalacetát dekarboxylační) (NADP-ME, EC 1.1.1.40), pyruvát, fosfátdikinasy (PPDK, EC 2.7.9.1) a enzymů metabolismu dusíku: nitrátreduktasy (NR, EC 1.7.1.1), glutaminsynthetasy (GS, EC 6.3.1.2), glutamátsynthasy (GOGAT, EC 1.4.1.13) a glutamátdehydrogenasy (GDH, EC 1.4.1.2). Rostliny tabáku Nicotiana tabacum L., cv. Petit Havana SR1, byly pěstované in vitro v kultivačních nádobkách opatřených filtrem, který zajistil limitovaný přístup CO2. Kultivačním médiem byl modifikovaný Murashige-Skoogův agar s přítomností či bez přítomnosti 1,5% sacharosy jako dodatečného zdroje uhlíku a se sníženým množstvím zdroje fosfátů, amonných iontů, dusičnanů, nebo s přidaným kaseinem. Sacharosa v kultivačním médiu znamenala vyšší aktivitu PEPC než v rostlinách pěstovaných bez sacharosy. Snížená koncentrace fosfátů, nitrátů, amonných iontů nebo přítomnost kaseinu jako výhradního zdroje dusíku v kultivačním médiu však způsobila snížení aktivity PEPC v listech i kořenech rostlin tabáku. Za těchto podmínek poklesla i aktivita NADP-ME a aktivity enzymů metabolismu...
|
|
|
Vliv složení kultivačního média na metabolismus rostlin tabáku
Minářů, Kateřina ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce) ; Müller, Karel (oponent)
Fosfoenolpyruvát karboxylasa (EC 4.1.1.31; PEPC) plní v rostlinách důležité funkce, propojuje metabolismus sacharidů a aminokyselin. PEPC je regulována na mnoha úrovních, včetně fosforylace serinového zbytku blízko N-konce. Cílem této práce bylo zjistit, jak ovlivní složení kultivačního média aktivitu PEPC a metabolicky souvisejících enzymů NADP-dependentní malátdehydrogenasy (dekarboxylační) (EC 1.1.1.40; NADP-ME) a pyruvát, fosfátdikinasy (EC 2.7.9.1; PPDK) a také enzymů podílejících se na metabolismu dusíku, tedy nitrátreduktasy (EC 1.7.1.1; NR), glutaminsynthetasy (EC 6.3.1.2; GS), glutamátsynthasy (EC 1.4.1.14; GOGAT), NAD-glutamátdehydrogenasy (EC 1.4.1.2; NAD- GDH) a NADP-glutamátdehydrogenasy (EC 1.4.1.4; NADP-GDH). Rostliny tabáku (Nicotiana tabacum L., cv. Petit Havana SR1) byly pěstované in vitro v Murashige-Skoogově agaru a ovlivněny přítomností 2% sacharosy, sníženým obsahem dusíkatých látek nebo fosfátu a limitovaným přístupem CO2. Sacharosa přidaná do Murashige-Skoogova média způsobila zvýšení aktivity enzymů PEPC, NADP-ME a také všech sledovaných enzymů souvisejících s příjmem a metabolismem dusíku - NR, GS, GOGAT, NAD-GDH a NADP-GDH. Snížený obsah dusíkatých látek a fosfátu v kultivačním médiu snížil aktivitu většiny sledovaných enzymů. Aktivita byla také ovlivněna dostupností CO2. U...
|
|
|
Vliv sacharosy v kultivačním mediu na aktivitu fosfoenolpyruvátkarboxylasy v rostlinách tabáku
Fiala, Martin ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce) ; Hoffmeisterová, Hana (oponent)
In Czech - Abstrakt Rostliny jsou za fyziologických podmínek autotrofní organismy, které využívají energii slunečního záření k fixaci CO2 pro syntézu sacharidů. Přítomnost sacharosy v kultivačním médiu může ovlivnit metabolismus celé rostliny. Cílem této práce bylo zjistit, zda přítomnost sacharosy ovlivní aktivitu fosfoenolpyruvátkarboxylasy (EC 4.1.1.31, PEPC) a nitrátreduktasy (EC 1.7.1.1., NR). PEPC je v C4 a CAM rostlinách fotosyntetickým enzymem, v C3 rostlinách plní řadu funkcí, dodává intermediáty citrátového cyklu a spojuje tak metabolismus sacharidů a aminokyselin. Aktivita PEPC v rostlinách pěstovaných se sacharosou byla o 70 % vyšší než v rostlinách pěstovaných bez sacharosy. Stupeň fosforylace PEPC byl studován stanovením aktivity PEPC po působení alkalické fosfatasy, aktivaci D- glukosa-6-fosfátem a inhibici L-malátem. Aktivita PEPC se po působení alkalické fosfatasy snížila. Pokles byl pro rostliny pěstované se sacharosou i bez sacharosy velmi podobný. Aktivace PEPC D-glukosa-6-fosfátem a inhibice PEPC L-malátem byla srovnatelná v rostlinách pěstovaných se sacharosou i bez sacharosy. Nitrátreduktasa je klíčovým enzymem fixace dusíku. Aktivita NR byla v rostlinách pěstovaných se sacharosou o 90 % vyšší než v rostlinách pěstovaných bez sacharosy. V rostlinách pěstovaných se sacharosou bylo o 52...
|
|
|
Vliv sucha na metabolismus rostlin tabáku
Miedzińska, Lucia ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce) ; Vaňková, Radomíra (oponent)
VVlliivv ssuucchhaa nnaa mmeettaabboolliissmmuuss rroossttlliinn ttaabbáákkuu (Nicotiana tabacum L.) Diplomová práce - abstrakt Lucia Miedzińska, Bc. Vedoucí diplomové práce: Doc. RNDr. Helena Ryšlavá, CSc. Konzultant: RNDr. Veronika Doubnerová, PhD. Sucho patří mezi jednu z nejčastějších forem rostlinného stresu, neboť k němu dochází nejen při nedostatku vody, ale i sníženou schopností přijímat vodu kořeny v zasolených půdách či za chladu. V této diplomové práci bylo zjišťováno, zda rostliny tabáku (Nicotiana tabacum L., cv. W38) reagují na sucho změnou aktivity enzymů: NADP dependentní malátdehydrogenasy dekarboxylační (EC 1.1.1.40; NADP-ME), fosfoenolpyruvátkarboxylasy (EC 4.1.1.31; PEPC) a pyruvát, fosfátdikinasy (EC 2.7.9.1; PPDK). Aktivity sledovaných enzymů v listech tabáku byly v průběhu 11 dnů stresu významně zvýšeny; aktivita PEPC dvojnásobně, PPDK až 3,3-krát a NADP-ME dokonce až čtyřnásobně oproti rostlinám kontrolním. V průběhu stresu byla sledována regulace aktivity NADP-ME a PEPC na úrovni transkripce - metodou "real-time" PCR a translace - imunochemicky. Exprese proteinu NADP-ME a transkripce mRNA pro chloroplastovou isoformu byly zvýšeny, mRNA pro cytosolovou isoformu nebyla významně ovlivněna. Exprese proteinu PEPC byla zvýšena jen velmi málo, transkripce mRNA pro PEPC byla mírně snížena....
|
host ::
RSS.