|
|
Analýza aminokyselinové větve biosyntetické dráhy antibiotika linkomycinu
Smutná, Yvona ; Najmanová, Lucie (oponent)
Analýza aminokyselinové větve biosyntetické dráhy antibiotika linkomycinu Abstrakt Linkomycin a jeho deriváty jsou svými antibiotickými vlastnostmi využitelné v humánní i veterinální medicíně k léčbě infekcí způsobených grampozitivními patogeny. Molekula linkomycinu se skládá ze dvou podjednotek, a to methyllinkosamidu a propylprolinu, spojených peptidovou vazbou. Cílem práce bylo přiřadit gen lmbX k biosyntetické dráze propylprolinu, založeném na inaktivačních pokusech. Gen lmbX byl inaktivován pomocí technologie REDIRECT: PCR targeting system in Streptomyces coelicolor. Pro inaktivaci byl vybrán kmen S. lincolnensis, na němž bylo testováno, zda po inaktivaci produkuje do fermentačního média LM pomocí UPLC analýzy. Zastavená produkce LM byla poté obnovena obohacujícím experimentem. Bylo prokázáno, že uvedeným postupem došlo k inaktivaci genu a produkce LM byla potlačena. Obohacujícím experimentem PPL byla produkce LM obnovena a byl gen lmbX přiřazen k biosyntéze PPL.
|
|
|
Příprava a charakterizace proteinu LmbX zúčastněného v biosyntéze antibiotika linkomycinu
Jiráčková, Petra ; Janata, Jiří (vedoucí práce) ; Janderová, Blanka (oponent)
Linkomycin je antibiotikum využívané v klinické praxi. Jeho producentem je Streptomyces lincolnensis. Linkomycin se skládá z aminocukerné a aminokyselinové složky, které jsou spojeny amidovou vazbou. Aminokyselinovým prekurzorem je propylprolin (PPL), jehož biosyntéza probíhá dráhou vycházející z tyrosinu. Modifikovaná PPL dráha byla také objevena u pyrrolobenzodiazepinů (PBD) a hormaomycinu. V biosyntéze PBD je PPL prekuzor dále modifikován reakcemi katalyzovanými specifickými enzymy nepřítomnými v biosyntéze linkomycinu. Geny kódující tyto enzymy by mohly být přeneseny do genového shluku pro biosyntézu linkomycinu. Tímto způsobem bychom mohli získat producenty hybridních antibiotik s lepšími vlastnostmi, a dokonce antimalarickými účinky. PPL dráhy se účastní šest enzymů, které jsou kódovány v genovém shluku pro biosyntézu linkomycinu. První dvě reakce biosyntézy PPL byly již prokázány, proto se tato práce zaměřuje na reakci třetí, kterou by měl podle literatury katalyzovat protein LmbX. Jeho předpokládaná funkce v biosyntéze PPL je hydrolýza C-C vazby. Podle sekvenční homologie však protein LmbX patří do rodiny isomeras. V této práci byl nadprodukován protein LmbX a byla testována jeho aktivita v přítomnosti předpokládaného substrátu. Produkty byly měřeny na kapalinovém chromatografu (UHPLC)....
|
|
|
Analýza aminokyselinové větve biosyntetické dráhy antibiotika linkomycinu
Smutná, Yvona ; Najmanová, Lucie (oponent)
Analýza aminokyselinové větve biosyntetické dráhy antibiotika linkomycinu Abstrakt Linkomycin a jeho deriváty jsou svými antibiotickými vlastnostmi využitelné v humánní i veterinální medicíně k léčbě infekcí způsobených grampozitivními patogeny. Molekula linkomycinu se skládá ze dvou podjednotek, a to methyllinkosamidu a propylprolinu, spojených peptidovou vazbou. Cílem práce bylo přiřadit gen lmbX k biosyntetické dráze propylprolinu, založeném na inaktivačních pokusech. Gen lmbX byl inaktivován pomocí technologie REDIRECT: PCR targeting system in Streptomyces coelicolor. Pro inaktivaci byl vybrán kmen S. lincolnensis, na němž bylo testováno, zda po inaktivaci produkuje do fermentačního média LM pomocí UPLC analýzy. Zastavená produkce LM byla poté obnovena obohacujícím experimentem. Bylo prokázáno, že uvedeným postupem došlo k inaktivaci genu a produkce LM byla potlačena. Obohacujícím experimentem PPL byla produkce LM obnovena a byl gen lmbX přiřazen k biosyntéze PPL.
|
host ::
RSS.