|
|
Základ strukturně-funkční studie vybraných enzymů 4-alkyl- L-prolinové dráhy
Zachovalová, Veronika ; Zdvořáková, Lucie (vedoucí práce) ; Košek, Dalibor (oponent)
4-alkyl-L-prolinový derivát (APD) je stavebním blokem několika důležitých bioaktivních specializovaných metabolitů produkovaných aktinobakteriemi. Nachází se například ve struktuře antibiotika linkomycinu, bakteriálního hormonu s antimikrobiálním účinkem hormaomycinu, antituberkulotika griselimycinu či pyrrolo-1,4-benzodiazepinů (PBD), které mají protinádorové účinky. APD, či jejich prekursory, vznikají z L-leucinu či L-tyrosinu v unikátní biosyntetické dráze tvořené až šesti homologními proteiny označovanými Apd1 - Apd6. První část práce pokládá základ krystalizační studii SAM-závislé methyltransferasy Apd3 z biosyntézy linkomycinu - proteinu LmbW, za účelem objasnění skutečné podoby přirozeného substrátu tohoto proteinu, který je stále předmětem vědeckých diskuzí. Byla optimalizována metoda purifikace poskytující protein LmbW dostatečné kvantity, kvality a čistoty pro krystalizaci, následně byly definovány základní krystalizační podmínky umožňující růst krystalů. Druhá část práce se zabývá objasněním odlišné reakční specifity Apd6 homologních proteinů - F420H2-závislých oxidoreduktas, katalyzujících jedno- (Por15 - biosyntéza PBD porothramycinu) či dvojnásobnou (LmbY - biosyntéza linkomycinu) redukci na identickém substrátu se dvěma konjugovanými dvojnými vazbami. Na základě recentně vyřešené...
|
|
|
Analýza a izolace intermediátů biosyntetické dráhy alkylprolinových derivátů
Cudlman, Lukáš ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Michalíková, Klára (oponent)
(CZ) Tato diplomová práce je zaměřena na přípravu, analýzu a izolaci intermediátů biosyntetické dráhy 4-alkyl-L-prolinových derivátů pro jejich strukturní identifikaci. Mezi sloučeniny obsahující inkorporované 4-alkyl-L-prolinové deriváty patří klinicky používané antibiotikum, linkomycin A, ze skupiny linkosamidů, dále některé pyrrolobenzodiazepiny s protinádorovými účinky a bakteriální hormon hormaomycin. Studiem intermediátů biosyntetických drah těchto biologicky aktivních sloučenin je možné získat poznatky, které mohou být využity při přípravě nových a účinnějších derivátů biologicky aktivních metabolitů. První část diplomové práce se zaměřuje na žlutě zabarvené dikarboxylové intermediáty 1 a 2 biosyntetické dráhy 4-propyl-L-prolinu - prekursoru linkomycinu A. V přítomnosti methylačního činidla S-adenosyl-L-methioninu a C-methyltransferasy LmbW se podařilo částečně přeměnit intermediát 1 na intermediát 2. Obě sloučeniny byly identifikovány pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie z absorpčních i hmotnostně-spektrometrických spekter. Byla vyvinuta semi- -preparativní chromatografická metoda pro izolaci obou intermediátů. Neočekávaně byla zjištěna výrazně nižší stabilita intermediátu 2 ve srovnání s intermediátem 1 v in vitro enzymatické reakční směsi. Druhá část diplomové práce se...
|
|
|
Analýza a izolace intermediátů biosyntetické dráhy alkylprolinových derivátů
Cudlman, Lukáš ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Michalíková, Klára (oponent)
(CZ) Tato diplomová práce je zaměřena na přípravu, analýzu a izolaci intermediátů biosyntetické dráhy 4-alkyl-L-prolinových derivátů pro jejich strukturní identifikaci. Mezi sloučeniny obsahující inkorporované 4-alkyl-L-prolinové deriváty patří klinicky používané antibiotikum, linkomycin A, ze skupiny linkosamidů, dále některé pyrrolobenzodiazepiny s protinádorovými účinky a bakteriální hormon hormaomycin. Studiem intermediátů biosyntetických drah těchto biologicky aktivních sloučenin je možné získat poznatky, které mohou být využity při přípravě nových a účinnějších derivátů biologicky aktivních metabolitů. První část diplomové práce se zaměřuje na žlutě zabarvené dikarboxylové intermediáty 1 a 2 biosyntetické dráhy 4-propyl-L-prolinu - prekursoru linkomycinu A. V přítomnosti methylačního činidla S-adenosyl-L-methioninu a C-methyltransferasy LmbW se podařilo částečně přeměnit intermediát 1 na intermediát 2. Obě sloučeniny byly identifikovány pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie z absorpčních i hmotnostně-spektrometrických spekter. Byla vyvinuta semi- -preparativní chromatografická metoda pro izolaci obou intermediátů. Neočekávaně byla zjištěna výrazně nižší stabilita intermediátu 2 ve srovnání s intermediátem 1 v in vitro enzymatické reakční směsi. Druhá část diplomové práce se...
|
host ::
RSS.