|
|
Vliv rozpustnosti a adsorpce vybraných látek na plast v transportních experimentech
Šilhanová, Marie ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Studentka: Marie Šilhanová Školitel: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv rozpustnosti a adsorpce vybraných látek na plast v transportních experimentech Z transportních experimentů na buněčných modelech získáváme významné informace o transportních mechanismech léčiv v organismu. In vitro experimenty jsou prováděné například na insertech typu Transwell. Během měření bylo zjištěno, že výsledky pro některé látky jsou nehomogenní a patrně dochází k úbytku množství látky v roztoku z důvodů horší rozpustnosti lipofilních látek nebo jejich adsorpce na povrch plastů, ze kterých jsou inserty vyrobeny atd. Kvůli těmto problémům dochází k významnému zkreslování výsledků. Tato práce se zaměřila na antivirotika, u kterých byla pozorována při transportních experimentech nepřesná data. Nejprve byly vyvinuty HPLC/MS metody, pomocí kterých byly stanovovány koncentrace vzorků antivirotik. Vlivy adsorpce na plastové povrchy a rozpustnosti pro jednotlivá léčiva byly stanoveny za různých podmínek. Látky byly rozděleny do skupin podle jejich chování. Poté byly tyto informace porovnány se vzorky získanými z transportních experimentů. Nakonec byly prozkoumávány možnosti, které by...
|
|
|
LC-HRMS analysis of selected drugs in biological material I.
Tomanová, Jana ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Váňová, Nela (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Jana Tomanová Školiteľ: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Vít Šesták, Ph.D. Názov diplomovej práce: LC-HRMS analýza vybraných liečiv v biologickom materiáli I. Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia patrí k jedným z najrozšírenejších separačných analytických techník. Využíva sa v rôznych medicínskych, farmaceutických a priemyselných laboratóriách. Využíva rozdielne afinity látok v analyzovanej zmesi k mobilnej a stacionárnej fáze. Hmotnostná spektrometria je jedna z inštrumentálnych techník pomocou ktorých sa separujú elektricky nabité častice v plynnej fáze na základe pomeru hmotnosť/náboj. V dnešnej dobe sa kladie veľký dôraz na to, aby jednotlivé analytické metódy, ktoré sa vyvíjajú, boli aj následne zvalidované podľa príslušných medzinárodných smerníc. Validácia je proces, ktorý overuje, či je daná metóda vhodná k zamýšľanému použitiu. V tejto diplomovej práci boli optimalizované a validované podmienky pre stanovenie warfarínu v sére pacientov pomocou hmotnostného spektrometra s lineárnou iónovou pascou LTQ XL. Pri optimalizácii metódy sa vychádzalo z už vyvinutej a validovanej metódy UHPLC-HRMS na Úseku klinickej a forenznej toxikológie Ústavu...
|
|
|
Sledování distribuce látky BZ po intramuskulárním podání
Čechová, Lenka ; Váňová, Nela (vedoucí práce) ; Bavlovič Piskáčková, Hana (oponent)
Bojová otravná látka 3-chinuklidinyl benzilát (látka BZ) patří do skupiny psychicky zneschopňujících látek s anticholinergní aktivitou. V dnešní době se však pro svou schopnost navozovat poruchy kognitivních funkcí (koordinace a paměť) využívá zejména pro vědecké účely při studiu Alzheimerovy choroby. I přes tuto skutečnost však není její farmakokinetika doposud podrobně prozkoumána. Pro stanovení látky BZ v biologickém materiálu byla vyvinuta, optimalizována a validována LC-MS/MS metodika zpracování tělních tekutin (plazma, žluč) a tkání (mozek, játra, ledviny). Výslednou metodikou pro zpracování tělních tekutin byla extrakce na pevné fázi s využitím kolonky C18 s elucí do metanolu a pro tělní tkáně to byla precipitace s acetonitrilem. Vlastní chromatografická separace byla prováděna na reverzní fázi, konkrétně na koloně Gemini NX-C18 o rozměrech 150 × 4,6 mm a velikosti částic 5 μm. Mobilní fáze se skládala z 10mM roztoku octanu amonného o pH 11 a metanolu v poměru 30 : 70. Eluce analytů byla prováděna v režimu isokratické eluce. Celková doba analýzy byla 5 minut. Hmotnostně-spektrometrická detekce byla prováděna lineární iontovou pastí za použití ionizace elektrosprejem. Metodiky zpracování a chromatografické analýzy byly úspěšně aplikovány na reálné vzorky z in vivo experimentu. Potkaním samcům...
|
|
|
SLEDOVÁNÍ BIOMARKERŮ OXIDAČNÍHO STRESU HPLC METODAMI
Váňová, Nela ; Jun, Daniel (vedoucí práce) ; Doležal, Rafael (oponent) ; Hroch, Miloš (oponent)
a klíčová slova Ačkoliv mají reaktivní formy kyslíku a dusíku zásadní význam pro fyziologické procesy probíhající v živém organismu, jejich nadměrná produkce vyvolaná působením vnitřních i vnějších vlivů může vést k závažnému narušení redoxní homeostázy, poškození intracelulárních komponent a tím zásadně ovlivnit jejich funkci nebo dokonce indukovat buněčnou smrt. Oxidační stres patří mezi významné mechanismy toxického působení chemických látek včetně léčiv a může tak přispívat k rozvoji jejich závažných nežádoucích účinků. Vzhledem k nízkému počtu studií, zabývajících se sledováním oxidačního stresu po expozici oximovým reaktivátorům acetylcholinesterasy (AChE) in vitro a in vivo, není vztah mezi toxicitou těchto léčiv a tvorbou specifických markerů oxidativního poškození biomolekul stále zcela objasněn. Pro posouzení antioxidačních/prooxidačních účinků léčiv byla vyvinuta metoda vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s tandemovou hmotnostně spektrometrickou detekcí (LC-MS/MS) pro simultánní stanovení dvou biomarkerů oxidačního stresu, malondialdehydu (MDA) a 3-nitrotyrosinu (3-NT), z biologických matric. V rámci validace této LC-MS/MS metody bylo dosaženo přijatelné selektivity, správnosti, krátkodobé i dlouhodobé přesnosti a návratnosti pracovního postupu a nebyly pozorovány žádné...
|
|
|
Analysis of oxidative and free radical induced DNA damage
Váňová, Nela ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Kovaříková, Petra (oponent)
Analýza oxidativního poškození DNA volnými radikály Diplomová práce Nela Váňová Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Volné radikály a reaktivní formy kyslíku (ROS) jsou vysoce reaktivní molekuly schopné modifikovat biomolekuly včetně DNA. 5',8-cyklo-2'-deoxynukleosidy představují skupinu DNA lézí vyznačující se současným poškozením sacharidové složky a nukleové báze stejného purinového nukleosidu a společněs 8-oxo-2'-deoxypuriny patří do hlavní skupiny lézí vznikajících atakem volných radikálů (včetně hydroxylového radikálu). Kvantifikace oxidativně a volnými radikály způsobených DNA lézí jako biomarkerů oxidačního stresu hraje významnou roli ve studiu jejich vlivu na lidské zdraví a nemoci. Pro kvantifikaci těchto DNA lézí ve vzorcích ozařovaných gamma paprsky bude použito spojení tandemové spojení hmotnostní spektrometrie a vysoce účinné kapalinové chromatografie (LC/MS/MS). Před nástřikem do LC/MS/MS, ozářené vzorky podrobené enzymatickému štěpení za účelem získání volných nukleosidů musí být odsoleny a DNA léze musí být separovány od nepoškozených nukleosidů. Pro separaci (5'R)-5',8-cyklo-2'-deoxyadenosinu; (5'R)-5',8-cyklo-2'-deoxyguanosinu; (5'S)- 5',8-cyklo-2'-deoxyadenosinu; (5'S)-5',8-cyklo-2'-deoxyguanosinu;...
|
host ::
RSS.