|
| |
|
| |
|
|
Vliv vakcinace slinami klíštěte \kur{Ixodes ricinus} na přenos \kur{Borrelia burgdorferi} a cytokinový profil hostitele
GREGOROVÁ, Eva
Klíště Ixodes ricinus je jedním z nejvýznamnějších přenašečů patogenů napadajících člověka jako jsou spirochety Borrelia burgdorferi a virus TBE. V této práci byl studován vliv opakovaného sání neinfikovaných nymf I. ricinus a vliv vakcinace slinami klíštěte I. ricinus na přenos Borrelia burgdorferi a produkci cytokinů. Regionální lymfatické uzliny myší C3H/HeN byly vyšetřovány na produkci IL-2, IFN-? a IL-10 imunoenzymatickou metodou ELISA. Množství spirochet v kůži, srdci a močovém měchýři bylo stanovováno kvantitativní PCR v reálném čase.
|
|
| |
|
|
Charakterizace dvou zástupců multigenní rodiny jednodoménových Kunitz-inhibitorů z klíštěte \kur{Ixodes ricinus}
SINGEROVÁ, Barbora
Dva nové geny, kódující 94AA dlouhé proteiny Monolaris 1 a Monolaris 2, byly izolovány z klíštěte Ixodes ricinus. Monolaris 1 je 8,1kDa velký protein, Monolaris 2 8,3kDa. Funkce proteinu Monolaris 1 byla testována s použitím RNA interference. Po injikaci dsRNA se daly samičky klíštěte Ixodes ricinus sát na morčata. Pro zhodnocení efektu utlumení genu byla změřena tělesná hmotnost, hmotnost vaječné snůšky a úmrtnost samic. V bakteriálním expresním systému byl připraven rekombinantní protein Monolaris 1 a po imunizaci králíka byly získány protilátky proti tomuto proteinu. Protilátky reagovaly s přibližně 190kDa velkým proteinem ve slinných žlázách, ováriích a střevě klíštěte, zatímco Monolaris 1 nebyl v slinách, slinných žlázách a dalších tkáních detekován.
|
|
|
Exprese rekombinantního proteinu Kunitzova typu, potenciálního toxinu ze slinných žláz klíštěte \kur{Ixodes ricinus}
CERMANOVÁ, Tereza
Klíšťata přijímají krev po dobu několika dní, což je dostatečná doba pro rozvinutí hostitelovi imunitní odpovědi. Adaptace klíštěte k sání vedla k vývoji komplexní směsi látek ve slinách, jež pomáhají parazitovi potlačit hostitelovi obranné mechanismy. Extrémně důležitou roli hrají v této interakci inhibitory proteáz. V této práci jsme se zaměřili na protein pojmenovaný Ixocludin, člen rodiny BPTI inhibitorů serinových proteáz společně s toxiny a blokátory draslíkových kanálů. Pro expresi rekombinantního proteinu byly použity tři expresní systémy (Escherichia coli, Pachia pastoris, Chinese hamster ovary), ale pouze exprese v bakteriálním systému byla úspěšná.
|
|
| |
|
|
Charakterizace rodiny proteinů o molekulové hmotnosti 18,7 a 19 kDa ze slinných žláz klíštěte \kur{Ixodes ricinus}
SOUČKOVÁ, Nina
Podařilo se vytvořit rekombinantní protein c90 a polyklonální protilátky proti tomuto proteinu. Byla připravena dvouvláknová RNA pro pokusy s RNA interferencí. Z tkání získaných z klíšťat napíchaných touto dsRNA po pěti dnech sání byly připraveny vzorky pro RT-PCR a Western blot. Dosažené výsledky naznačovaly, že protein c90 se uplatňuje v těle klíštěte v reakci na poranění, a proto byl uskutečněn pokus s klíšťaty napíchanými vodou, G+ bakteriemi a G- bakteriemi. V průběhu získávání dat pro tuto diplomovou práci bylo zjištěno, že zkoumané proteiny mají schopnost tvořit multimery, a že při RNA interferenci nedochází k vypnutí genu, ale naopak k jeho upregulaci. Ve světle těchto informací společně s bioinformatickou analýzou vyvstává možný závěr, že proteiny o molekulové hmotnosti 18,7 a 19 kDa jsou pravděpodobně důležité ve fyziologii klíštěte. Tyto proteiny mají s největší pravděpodobností strukturní funkci v těle klíštěte a jejich produkce může být reakcí na poranění, v případě RNAi vpichu, spíš než v antiimunitě. Současně ale i skutečnost, že u normálního klíštěte jsou proteiny 18,7 kDa exprimované ve větší míře na začátku sací periody nabízí k úvaze to, že i v hostiteli mají tyto proteiny přece jen svou funkci.
|
|
|
Ricinusin - nový antimikrobiální peptid z klíštěte \kur{Ixodes ricinus}: třetí člen rodiny klíštěcích obranných proteinů bohatých na histidin.
DORŇÁKOVÁ, Veronika
Nový gen kódující antimikrobiální protein {--} ricinusin {--} byl charakterizován u klíštěte I. ricinus. Získaná 405 bp dlouhá cDNA obsahuje jeden čtecí rámec (135 aminokyselin), který kóduje protein velký 14.5 kDa s 19 aminokyselin dlouhou signální sekvencí. Diferenciální exprese ricinusinu byla indukována sáním u larvy, nymfy i dospělců. Výrazná exprese tohoto genu ve slinných žlázách a ve střevě ukázala, že ricinusin se podílí na širokém spektru imunitních reakcí. Analýza genomové sekvence ricinusinu neprokázala přítomnost intronů. Pro studium antimikrobiální aktivity ricinusinu a jeho účinnost proti zmíněným patogenům, včetně infekce bakterií Borrelia burgdorferi, byl za použití bakteriálního expresního systému získán rekombinantní protein. Analýza proteinové sekvence ricinusinu prokázala přítomnost unikátní HEAHEAHEA repetice a podobnost ricinusinu k antimikrobiálním peptidům (AMPs) z klíštěte Boophilus microplus a Amblyomma hebraeum se stejnými vlastnostmi. Ricinusin se tímto stal třetím členem nové rodiny klíštěcích obranných peptidů bohatých na histidin.
|
|
|
Možnosti a limity RNA interference u klíštěte \kur{Ixodes ricinus}
MUSIL, František
RNA interference byla použita při studiu funkcí chitin vázajícího proteinu (CBP) a dvou isoforem cathepsinu B (cathB1, cathB2) u klíštěte Ixodes ricinus. Byly využity dvě různé metody pro aplikaci dsRNA do klíšťat - injikace a kapilární sání. Připravená dsRNA byla použita ke zjištění vlivu RNAi na klíštěcí tkáně, které byly testovány pomocí metody RT-PCR a Western blot. Exprese CBP byla úspěšně utlumena ve slinných žlázách. Utlumení cathB1 a cathB2 ve střevě bylo méně efektivní, ale stále omezovalo sání klíšťat na hostiteli.
|
host ::
RSS.