|
|
Analýza metabolických efektů transkripčních faktorů chmelu (H. lupulus) u heterologního systému Petunia hybrida
MORAVCOVÁ, Vendula
Transformace rostlin je dnes klíčovou metodou v oblasti biologie rostlin a rovněž se jedná o jedinečný praktický nástroj v zlepšování odrůd kulturních rostlin. Při této práci byla snaha získat transgenní rostliny Petunia x hybrida obsahující transgen nptII (gen pro kanamycinovou rezistenci) pomocí nepřímé transformace s využitím bakterií Agrobacterium tumefaciens. V podmínkách in vivo byl ze semen vypěstován pokusný materiál v podobě rostlin Petunia x hybrida cv. Andrea. Pro pokusy byly použity tři různé konstrukty, a to HLWD40 3278-80 a HLbHLH 3577 a HLbHLH 3677 GFP. Z listů petúnií byly připraveny listové disky a byla provedena kokultivace na 1/2MS s bakteriemi nesoucími příslušné konstrukty. Kokultivace probíhala přes noc a následně byly přepasážovány na pevné regenerační medium. Z listových disků postupně vznikly kalusy (shluky buněk), na kterých regenerovaly nové rostliny. Na explantátech začaly během prvních 2-4 týdnů po transfromaci vznikat kalusy a během dalšího týdne bylo možné odebrat první regeneranty. Na jeden explantát připadlo průměrně okolo 7 regenerantů, přičemž explantáty regenerované konstruktem HLbHLH 3577 regenerovaly lépe než regeneranty transformované konstruktem HLWD 40 3278-80. Během transformace byly získány regeneranty. Pomocí ?tissue? PCR bylo zjištěno, že 15 rostlin nese gen pro kanamycinovou rezistenci. Účinnost transformace byla 3,75%. Úspěšná transformace by měla splňovat i podmínku, že transformované rostliny budou fertilní. Z tohoto důvodu byl udělán pokus křížení, kdy byly kříženy rostliny transformované Pap1 1527/2 a Pap1 1572/4 s rostlinami kříženými HLWD 40 3278-80. Na vyrostlých rostlinách byla provedena reakce PCR.
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
|
Reporterové markery GFP a GUS v transgenozi rostlin
HRABÁKOVÁ, Lenka
Hlavním cílem této bakalářské práce bylo srovnání dvou často používaných reportérových genů gfp a gus, jejich struktury, použití a metod zobrazování jejich aktivity. Experimentální část bakalářské práce byla založena na transformaci tabáku kmeny Agrobacterium tumefaciens.
|
|
|
Ověření metody transformace listových disků rododendronů
SKOTNICOVÁ, Petra
Pomocí bakterie Agrobacterium tumefaciens jsem transformovala listové disky dvou odrůd rododendronů. Zkoumala jsem nejvhodnější postup selekce na antibiotiku kanamycinu po transformaci. Přítomnost vnášeného genu gus jsem u rostlin regenerujících na médiu s 100 mg/l kanamycinu ověřovala pomocí fluorimetrického stanovení GUS a PCR.
|
|
|
Porovnání účinnosti přímé a nepřímé metody genetické transformace u bramboru (Solanum tuberosum L.)
PŘIBYLOVÁ, Marie
Brambory jsou jednou z hlavních plodin, u nichž je cílený přenos genů vhodnou metodou pro zlepšení vlastností stávajících odrůd. Cílem této práce bylo porovnání účinnosti genetické transformace bramboru, odrůdy Bintje, jednak prostřednictvím bakterií Agrobacterium tumefaciens a jednak mikroprojektily. V obou případech byla internodia bramboru transformována shodným plazmidem p35SGUSint, který se skládá z 35S CaMV promotoru a genů gus (s vloženým intronem) a nptII. Pro získání transgenních rostlin, jejich identifikaci a analýzu byly použity metody selekce na kanamycinu, tranzientní a stabilní exprese enzymu {$\beta$}-glukuronidázy a amplifikace genů gus a nptII pomocí PCR.
|
host ::
RSS.