|
|
Význam sialovaných glykoproteinů pro klíště \kur{Ixodes ricinus}
ONDRUŠ, Jaroslav
Kyselina sialová je běžnou součástí glykanů obratlovců. Nachází se v terminálních pozicích glykokonjugátů přítomných na povrchu buněk. Jejich množství a struktura se liší jak napříč živočišnými druhy, tak v rámci jednotlivých organismů a jeho orgánů. Sialované glykoproteiny jsou v rámci obratlovců důkladně prozkoumány, ovšem v případě bezobratlých byly zatím identifikovány a popsány jen v malém množství druhů a jejich role zde tak zůstává z velké části neznámá. V případě krev sajících parazitů je jejich výzkum zkomplikován přítomností velkého množství sialovaných glykoproteinů pocházejících z potravy, tedy krve hostitele. V klíštěti Ixodes ricinus byla přítomnost metabolicky vytvořených sialovaných glykoproteinů prokázána již dříve ve slinných žlazách a vaječnících. V této práci se zabýváme významem sialovaných glykoproteinů pocházejících z metabolismu klíštěte i hostitele. Dokazujeme zde, že metabolicky vytvořené glykoproteiny klíštětem mají funkci při embryogenezi, a že se jejich obsah mění v závislosti na stáří vykladených vajíček. Tyto molekuly byly lokalizovány ve vajíčkách i larvách klíštěte pomocí kryořezů. Dále dokazujeme, že kyselina sialová v hostitelských sérových glykoproteinech má zásadní význam pro rozpoznávání těchto glykoproteinů klíšťaty.
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
|
Analýza glykoproteinů ze slinných žláz klíštěte \kur{Ixodes ricinus}
BUČINSKÁ, Lenka
Charakterizovala jsem nekolik potencionálních glykoproteinů z extraktů slinných žláz nenasátých a částečně nasátých samic klíštěte Ixodes ricinus použitím afinitního značení s lektiny a pomocí enzymatické deglykosylační reakce. Izolovala jsem glykoprotein specifický k lektinu GNA. Tento glykoprotein obsahuje N{--}vázanou terminální manózu připojenou Man{$\alpha$}1,3Man. Tento protein byl hmotnostní spektrometrii určen jako Karboxypeptidáza M. Dále byly izolovány dva glykoproteiny obsahující GalNAc pomocí HPA{--}afinitní chromatografie. Výsledkem MS analýzy bylo určení morčecího proteinu Trappin 12. V SŽ nasáté samice klíštěte jsem detekovala fukózu vazanou vazbami {$\alpha$}1,2, {$\alpha$}1,3 a {$\alpha$}1,6. Také přítomnost O{--}vázané fukózy je možná. Přítomnost kyseliny sialové v glykoproteinech SŽ a slinách nasáté samice klíště byla nepřímo prokázána vazbou s MAA II lektinem. Analýzou hmotnostní spekrometrie byla zjištěna N{--}terminální sekvence peptidu podobná s myším sialoadhesinem (Siglec 1). Dosavadní výsledky z MS zatím nepřispěly k potvrzení či vyvrácení přítomnosti Siglec 1. Z nenasátých SŽ samic jsme izolovali dva proteiny specifické pro značení GNA lektinem. Byly předběžně identifikovány jako protein podobný arylsulfatáze B a Sojo protein cytoskeletu klíštěte Ixodes. Přítomnost proteinů s GNA specifitou byla prokázána v granulech acinů SŽ nenasáté a částečně nasáté samice klíštěte. Přítomnost fukózy byla prokázána v granulárních buňkách acinů II a III a ve střevních buňkách a obsahu střeva klíštěte pomocí afinitního značení a reakce byla pozorována florescenčním mikroskopem.
|
|
| |
host ::
RSS.