|
|
Srovnání citlivosti bezkontaktní vodivostní detekce a přímé UV detekce při elektroforetickém stanovení N-acetylaminosacharidů
Malý, Michal ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tato práce se zabývá vývojem a optimalizací metody separace N-acetylglukosaminu a jeho dimeru a tri- meru kapilární zónovou elektroforézou s využitím bezkontaktní vodivostní detekce. Bylo zjištěno, že sepa- race a detekce těchto látek je možná, pokud je jako pracovní elektrolyt použit hydroxid sodný, použití jiných elektrolytů jako hydrogenfosforečnanu sodného mělo za následek nepřijatelně vysoký šum základní linie. Optimální podmínky pro provedení separace byly při koncentraci pracovního elektrolytu 40 mmol dm−3 a pracovním napětí 15 kV. Metoda je velmi citlivá na pH pracovního elektrolytu a použitý pracovní elektrolyt způsobuje rychlou degradaci kapiláry. Z těchto důvodů je obtížné spolehlivě provést kalibraci. Vyvinutá metoda byla porovnána s již existující metodou pro separaci těchto analytů využívající UV detekci. Exis- tující metoda má v porovnání s vyvinutou metodou nižší meze detekce a stanovitelnosti a je méně citlivá na pracovní podmínky. Meze detekce a stanovitelnosti vyvinuté metody jsou 34 µmol dm−3 , respektive 104 µmol dm−3 , meze detekce a stanovitelnosti metody využívající UV detekci jsou 7 µmol dm−3 , respek- tive 21 µmol dm−3 . Uvedené meze stanovitelnosti jsou uvedeny pro analyt, pro který byla detekce nejméně citlivá, v obou případech šlo o dimer. Výhodou vyvinuté metody proti...
|
|
|
Charakterizace samoorganizujících se molekul a jejich využití v kapilární elektroforéze
Hodek, Ondřej ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Čabala, Radomír (oponent)
Tato diplomová práce se zabývá využitím nově syntetizovaných derivátů α-cyklodextrinu, 2I -O-cinnamyl-α-cyclodextrinu a 3I -O-cinnamyl-α-cyclodextrinu, v kapilární elektroforéze. Jejich unikátní vlastností je tvorba agregátů ve vodném prostředí. Tyto agregáty jsou tvořeny pomocí inkluze fenylové skupiny jedné molekuly cyklodextrinu do kavity cyklodextrinu následujícího. Během práce byl testován vliv přídavku 2I -O-cinnamyl-α-cyclodextrinu či 3I -O-cinnamyl-α- cyclodextrinu do základního elektrolytu (BGE) na elektroforetické mobility osmnácti analytů. Devět analytů bylo měřeno ve formě kationtů (anilin, antipyrin, L-histidin, D,L-tyrosin, D,L- fenylalanin, N-(1-naftyl)ethylendiamin, 4-nitroanilin, p-aminoacetofenon a tyramin) a devět bylo měřeno ve formě aniontů (N-acetyl-D,L-fenylalanin, N-acetyl-D,L-tryptofan, N-benzoyl-D,L- fenylalanin, N-boc-D,L-tryptofan, N-FMOC-D,L-valin, N-FMOC-alanin, N-FMOC-D,L-leucin, D,L-3-fenylmléčná kyselina a (R)-(-)-mandlová kyselina). Elektroforetické mobility kationtů byly měřeny v základním elektrolytu o pH 2,2, posléze o pH 2,3 a anionty v základním elektrolytu o pH 8,0. Experimenty byly prováděny při teplotě 25 a 50 řC. Z počátku bylo pH pufru obsahujícího 2,5 mM TRIS upraveno na hodnotu 2,2 kyselinou trihydrogenfosforečnou. Avšak výsledky naznačovaly, že anionty...
|
|
|
Stanovení vybraných komponent v lidské moči elektroforézou v krátké kapiláře.
Makrlíková, Anna ; Opekar, František (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Kapilární zónová elektroforéza má široké uplatnění v různých analýzách. V této práci byl navržen hydrodynamický způsob zavedení vzorku do krátké elektroforetické kapiláry řízený tlakovým pulsem. Separační pufr promývá dávkovací smyčku šesticestného ventilu a zóna vzorku je nesena k dávkovacímu konci kapiláry. V čase, kdy se zóna vzorku nachází u vstupu do kapiláry, je v toku elektrolytu generován krátký tlakový puls, což vede k nadávkování vzorku do kapiláry. Následně je tok elektrolytu zastaven a současně je zapnuto separační napětí. Množství nadávkovaného vzorku je závislé na době trvání tlakového pulsu. Tato nově vyvinutá metoda byla testována pro stanovení amonných iontů, histidinu, kreatininu, kyseliny močové a kyseliny hippurové v lidské moči a pro rychlé sledování anorganických iontů v mozkomíšním moku a krevní plazmě. Stanovení bylo provedeno v kapiláře o celkové délce 10,5 cm a vyzkoušeny byly dva separační elektrolyty - 50 mM MES + 5 mM NaOH (pH 5,10) a 1 M kyselina octová + 1,5 mM crown ether 18-crown-6 (pH 2,40). Použitím duální detekce, bezkontaktní vodivostní a spektrometrické UV detekce, bylo možno současně detegovat anorganické i organické látky ve vzorku. Klíčová slova Kapilární elektroforéza, krátká kapilára, hydrodynamické dávkování, duální detekce, amonné ionty, histidin,...
|
|
|
Stanovení lithia v minerálních vodách elektroforézou v krátké kapiláře.
Makrlíková, Anna ; Opekar, František (vedoucí práce) ; Tůma, Petr (oponent)
Tato práce se zabývá stanovením obsahu lithia v minerálních vodách Vincentka a Bílinská kyselka kapilární elektroforézou s bezkontaktní vodivostní detekcí. Laboratorně sestrojená aparatura pro provádění separací v krátkých kapilárách byla nejprve testována modelovým roztokem běžných anorganických kationtů a následně použita pro analýzu vzorků minerálních vod. Obsah lithia byl stanoven na základě metody standardního přídavku. Získané výsledky byly porovnány s výsledky získanými atomovou absorpční a atomovou emisní spektroskopií, kde byl obsah lithia stanoven metodou standardního přídavku a také metodou kalibračního grafu. Experimentálně získané výsledky byly v dobré shodě s obsahy lithia deklarovanými na etiketách minerálních vod. Klíčová slova Kapilární elektroforéza, bezkontaktní vodivostní detekce, minerální vody, lithium, atomová absorpční spektroskopie, atomová emisní spektroskopie
|
|
|
Kapilární elektroforéza s duální optickou a bezkontaktní vodivostní detekcí.
Kadlecová, Tereza ; Opekar, František (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Tato práce se zabývá duální detekcí organických a anorganických analytů po separaci kapilární zónovou elektroforézou. V první části se testují dva typy dávkování vzorku. Standardní hydrodynamické dávkování, používané v laboratorních elektroforetických aparaturách nejčastěji, spočívající ve zvednutí nádobky se vzorkem v níž je ponořen dávkovací konec kapiláry, a nový způsob hydrodynamického dávkování pomocí zvýšeného tlaku na hladinu vzorku bez pohybu kapiláry. Toto dávkování minimalizuje činnost experimentátora, protože je ovládáno softwarově. Experimentátor pouze vyměňuje nádobku se vzorkem při dávkování za nádobku se separačním elektrolytem při separaci. Hledá se nejlepší dávkovací čas a tlak pro separaci tak, aby bylo dosaženo co nejvyšší účinnosti a dostatečné citlivosti detekce. V druhé části diplomové práce je vyvinutá metoda testována při separaci aminokyselin v biologickém vzorku (moči).
|
|
|
Stanovení hyaluronanů elektromigračními metodami
Bártová, Adéla ; Mravcová, Ludmila (oponent) ; Řezáčová, Veronika (vedoucí práce)
Tato práce se zabývá popisem kyseliny hyaluronové, charakterizací jejího chování v roztoku, jejími chemicko-fyzikálními vlastnostmi a využitím v různých průmyslových odvětvích. Součástí práce je také část věnovaná možnostem její analýzy. Druhá polovina práce se soustředí na elektromigrační metody se zvláštní pozorností věnovanou kapilárním elektroforetickým metodám, a to zejména kapilární zónové elektroforéze. Cílem této práce je optimalizovat metodu pro stanovení kyseliny hyaluronové ve vodných roztocích pomocí kapilární zónové elektroforézy.
|
|
| |
|
|
Porovnání gelové a kapilární elektroforézy bílkovin
Krbec, Michal ; Franěk, Tomáš (vedoucí práce) ; Kotaška, Karel (oponent)
Elektroforéza sérových proteinu je jednou z metod užívaných v laboratorní diagnostice patologických stavu, ale i k výzkumným úcelum. Jde o jednostupnovou metodu, pri níž dochází k izolaci jednotlivých proteinu ze smesi (nejcasteji krevních bílkovin) v elektrickém poli v prítomnosti vhodného pufru a na vhodném nosici na základe jejich ruzné pohyblivosti, závislé na jejich povrchovém náboji a molekulové hmotnosti. Puvodne býval nosicem papír, pozdeji acetátcelulózová membrána a nyní již témer výhradne agaróza (cištený agar s nízkou endoosmózou), prípadne polyakrylamid (PAA). Mým úkolem v této práci bylo analyzovat sérii vzorku metodou gelové elektroforézy a následne analyzovat stejnou sérii i metodou kapilární elektroforézy. Výsledky získané obema metodami jsem zpracoval numericky, vzájemne porovnal a statisticky zhodnotil. Výstupem mojí práce je porovnání gelové a kapilární elektroforézy, zhodnocení výhod, nevýhod a zejména rozdílu mezi obema metodami.
|
|
|
Analýza derivátů pterinu kapilární zónovou elektroforézou
Krajíček, Jan ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Čabala, Radomír (oponent)
Pteriny patří do důležité skupiny látek fungující jako inhibitory, senzitizéry, enzymy, koenzymy, pigmenty atd. a spolu s karotenoidy a anthrachoninony jsou zodpovědné za charakteristické zbarvení ploštic. Tato práce byla zaměřena na vývoj kapilární elektroforetické separační metody pro analýzu šesti vybraných derivátů pterinu (biopterinu, neopterinu, isoxanthopterinu, leukopterinu, xanthopterinu a erythropterinu) a jejich následnou identifikaci ve třech formách ploštice Graphosoma semipunctatum. Separace byly realizovány v křemenné nemodifikované kapiláře termostatované na teplotu 30 řC. Separační elektrolyt se skládal z kyseliny borité, tris(hydroxymethyl)aminomethanu a disodné soli ethylendiamintetraoctové kyseliny. V rámci optimalizační procedury byl studován vliv pH pufru, koncentrace jednotlivých složek základního elektrolytu, velikosti separačního napětí a vlnové délky UV detekce na elektromigrační chování a citlivost detekce. Za optimalizovaných separačních podmínek byly analyzovány organické extrakty ze tří forem ploštice Graphosoma semipunctatum.
|
|
|
Elektroforetické separace sacharidů v krátké kapiláře.
Vochyánová, Blanka ; Opekar, František (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Byl vyvinut nový laboratorní systém pro rychlé elektroforetické separace anorganických a organických iontů. Použita byla křemenná kapilára v kombinaci s bezkontaktní vodivostní detekcí. Základní funkce systému byly ověřeny na směsi anorganických iontů. Systém byl dále použit k separacím neutrálních mono- a disacharidů. Modelová směs obsahovala pět sacharidů (sacharózu, laktózu, glukózu, fruktózu a ribózu). Vyvinutá metoda byla použita ke stanovení sacharózy, glukózy a fruktózy v energetických nápojích.
|
host ::
RSS.