|
|
Structural and functional characterization of yeast plasma membrane domains
Strádalová, Vendula ; Malínský, Jan (vedoucí práce) ; Palková, Zdena (oponent) ; Konopásek, Ivo (oponent)
Plazmatická membrána (PM) všech buněk hostí celou řadu důležitých buněčných funkcí. Tyto funkce musí být pečlivě koordinovány, a jak současný výzkum ukazuje, plazmatická membrána je za tímto účelem uspořádána do specializovaných domén. Naše laboratoř se zabývá výzkumem způsobu organizace plazmatické membrány u kvasinky pivní, kde bylo za použití fluorescenční mikroskopie popsáno několik nepřekrývajících se domén. Jednou takovou doménou je MCC (Membrane Compartment occupied by transporter Can1), která je tvořena stabilními izolovanými oblastmi PM o velikosti asi 300 nm. MCC domény obsahují několik přenašečů a proteinů o neznámé funkci (proteiny příbuzné Sur7 a Nce102) a jejich formování je organizováno z cytosolu proteinovými komplexy zvanými eisosomy, jež jsou tvořeny především proteiny Pil1 a Lsp1. Tato práce navazuje na studie, které měly za cíl objasnit složení, strukturu a funkci MCC. V první části práce jsme se zaměřili na ultrastrukturální analýzu MCC, přičemž jsme nejdříve vyvinuli protokol pro transmisní elektronovou mikroskopii (TEM), který dobře zachovává strukturu PM. Zjistili jsme, že mrazová fixace pomocí vysokotlakého zamražení, kombinovaná s mrazovou substitucí a zalitím vzorku do pryskyřice za nízké teploty, vede k výrazně lepšímu zachování buněčné struktury a vyššímu signálu při...
|
|
|
Vyhledávání jaderného transportinu faktoru ISW1 remodelujícího chromatin u Saccharomyces cerevisiae
Strádalová, Vendula ; Hašek, Jiří ; Janatová, Ivana
Bylo připraveno několik intragenově značených verzí Isw1, jejichž distribuce byla studována na živých či fixovaných buňkách. Kompletní sada importinových mutantů byla těmito konstrukty transformována. V delečních mutantech importinů Kap120p, Nmd5p, Sxm1p, Kap114p, Los1p, Msn5p, Kap123p a Pdr6 jsme zjistili, že Isw1-GFP byl vždy správně lokalizován do buněčného jádra, což ukazuje, že tyto importiny nejsou do transporu zapojeny.
|
host ::
RSS.